糖脂代謝失調(diào)性疾病是指因體內(nèi)糖脂代謝異常而造成全身臟器損傷及功能減退的一類(lèi)疾病,其主要臨床癥狀表現(xiàn)為高血糖、高血脂、肝脂蓄積以及胰島素抵抗等。目前糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等糖脂代謝失調(diào)性疾病發(fā)病率不斷上升,已成為人民健康的嚴(yán)重威脅。然而由于它們的發(fā)病機(jī)制至今尚不明確,造成這類(lèi)疾病缺乏有效的治療藥物。microRNA作為體內(nèi)眾多生理過(guò)程的重要調(diào)控分子,在糖脂代謝失調(diào)性疾病發(fā)生發(fā)展中的作用逐漸被發(fā)現(xiàn),為這類(lèi)疾病發(fā)病機(jī)制研究和藥物研發(fā)提供了新的可能。我們針對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)的對(duì)CYP2E1表達(dá)具有雙重調(diào)控機(jī)制的miR-552-3p進(jìn)行深入序列分析發(fā)現(xiàn)其序列中具有與NR1家族核受體響應(yīng)元件類(lèi)似的堿基排列;同時(shí)基于NR1家族核受體對(duì)糖脂代謝的關(guān)鍵調(diào)控作用,提出本論文擬解決的科學(xué)問(wèn)題—miR-552-3p與糖脂代謝的關(guān)系及其在糖脂代謝失調(diào)性疾病中的功能。miR-552-3p的生物學(xué)功能目前多集中在腫瘤領(lǐng)域,其對(duì)糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用尚未有人涉及。基于此,我們通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)對(duì)miR-552-3p對(duì)糖脂代謝調(diào)節(jié)的功能及作用機(jī)制進(jìn)行了深入和系統(tǒng)的研究。miR-552-3p調(diào)控代謝相關(guān)基因表達(dá)的功能發(fā)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所)上海市

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

miR-552-3p與NR1核受體響應(yīng)元件（FXRE，LXRE，PPRE等）序列匹配示意圖

miR-552-3p改善糖脂代謝失調(diào)性疾病作用發(fā)現(xiàn)及機(jī)制研究24HepG2細(xì)胞內(nèi)分別轉(zhuǎn)染1nMmiR-552-3pmimics與陰性對(duì)照mimics，培養(yǎng)72小時(shí)。之后棄去培養(yǎng)基，加入500μLPBS潤(rùn)洗一次，加入500μLRNAisoplus裂解細(xì)胞，用異丙醇沉淀法提取總RNA。將樣品送給華大公司進(jìn)行RNA-seq，對(duì)細(xì)胞內(nèi)各基因mRNA含量進(jìn)行測(cè)定。并且我們?cè)O(shè)定與對(duì)照組相比，表達(dá)差異倍數(shù)log2ratio>1，顯著性差異Q-value0.001，基因表達(dá)豐度FPKM>10的基因?yàn)椴町惐磉_(dá)基因。如圖2.2A所示，與轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照mimics（NC）的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染miR-552-3pmimics后，細(xì)胞內(nèi)共有1529個(gè)基因的表達(dá)發(fā)生了明顯改變，其中表達(dá)上調(diào)的基因有754個(gè)，表達(dá)下調(diào)的基因有775個(gè)。進(jìn)一步我們利用京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行分析與歸類(lèi)，找尋差異表達(dá)基因所參與的生物學(xué)過(guò)程。結(jié)果顯示（圖2.2B），富集程度最高的生物學(xué)通路是代謝通路，這表明受到miR-552-3p調(diào)控的基因主要參與體內(nèi)代謝過(guò)程。圖2.2miR-552-3p調(diào)控代謝相關(guān)基因的表達(dá)Figure2.2miR-552-3pregulatedmetabolism-relatedgeneexpression.（A）RNA-seq測(cè)序結(jié)果的熱圖分析數(shù)（log2ratio>2，Q-value0.001，F(xiàn)PKM>10）。向HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-552-3pmimics以及陰性對(duì)照mimics，72小時(shí)后收集樣品進(jìn)行RNA-seq。（B）針對(duì)RNA-seq中差異表達(dá)基因進(jìn)性KEGG分析。

miR-552-3p改善糖脂代謝失調(diào)性疾病作用發(fā)現(xiàn)及機(jī)制研究26圖2.3差異表達(dá)基因的KEGG分析Figure2.3TheKEGGpathwayanalysisfordifferentialexpressiongenes（A）針對(duì)RNA-seq中表達(dá)下調(diào)基因進(jìn)行KEGG分析。（B）針對(duì)RNA-seq中表達(dá)上調(diào)基因進(jìn)行KEGG分析。為了進(jìn)一步驗(yàn)證miR-552-3p對(duì)代謝相關(guān)基因的調(diào)控功能，我們采用RT-PCR技術(shù)對(duì)RNA-seq中表達(dá)下調(diào)的基因進(jìn)行驗(yàn)證。如圖2.4A所示，轉(zhuǎn)染miR-552-3p

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3499756