本文關(guān)鍵詞：DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)的發(fā)病率與日俱增,易損斑塊發(fā)生的破裂和繼發(fā)的血栓形成,是誘發(fā)急性冠脈綜合征、心肌梗死和中風等多種疾病的主要機制之一。傳統(tǒng)觀點認為,動脈粥樣硬化始于血管壁內(nèi)皮損傷,單核細胞募集并遷入內(nèi)膜下轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎?識別并吞噬脂質(zhì)形成泡沫細胞,同時募集白細胞、平滑肌細胞等進入斑塊,積聚脂質(zhì)、中央核心壞死,導致斑塊破裂的發(fā)生。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的重要因素。研究發(fā)現(xiàn),ox-LDL可以損傷內(nèi)皮,誘導單核細胞趨化,促進平滑肌增殖遷移,加速泡沫細胞形成,引起炎癥反應(yīng),加劇脂質(zhì)沉積等動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程。研究發(fā)現(xiàn),Wnt信號通路參與細胞粘附、干細胞更新、腫瘤發(fā)生和細胞分化、增殖、遷移、組織發(fā)生等多種分子生物學變化。各種環(huán)境因素能夠調(diào)節(jié)Wnt通路的啟動和關(guān)閉,通過結(jié)合胞膜上的LRP5/6等受體,調(diào)節(jié)胞質(zhì)中的β-catenin的積累和降解,影響(3-catenin的靶基因表達而調(diào)節(jié)細胞的功能變化。Wnt通路存在許多胞外拮抗分子,其中DKK家族是一種分泌型拮抗蛋白,除DKK3外的DKK亞家族成員(DKK1,2,4)均可參與Wnt信號調(diào)控。目前有關(guān)DKK家族中研究最多的蛋白為DKK1。DKK1與心血管疾病的發(fā)生存在著密切的關(guān)系,而在ox-LDL刺激下巨噬細胞內(nèi)的DKK1表達水平存在著怎樣的變化尚未見報道。研究目的：(1)明確ox-LDL對巨噬細胞中DKK1的調(diào)節(jié)作用；(2)明確LXRs在ox-LDL調(diào)節(jié)DKK1中的作用；(3)明確β-catenin與LXRs的相互作用在ox-LDL調(diào)節(jié)DKK1中的作用。研究方法：1.細胞培養(yǎng)購自ATCC的人單核/巨噬細胞系以RPMI-1640(含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素)懸浮培養(yǎng)。并以終濃度為160nM的PMA誘導貼壁為巨噬細胞,作為實驗的模型細胞。2.細胞轉(zhuǎn)染β-catenin、LXRa和LXRβ的siRNA和陰性對照Negative control siRNA均由上海吉瑪公司合成,按照脂質(zhì)體Lipo-2000的說明書進行轉(zhuǎn)染后,給予不同的刺激并檢測。3.蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)提取不同刺激后細胞的蛋白,99℃加熱10分鐘,SDS-PAGE電泳,按照對應(yīng)的分子量切膠,濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜,封閉,一抗孵育4℃過夜,洗膜后二抗孵育1小時20分鐘,洗去附著的二抗,化學發(fā)光,分析對應(yīng)的蛋白條帶的灰度值。4.實時熒光定量PCR分析刺激結(jié)束后利用Trizol法提取細胞中的總核糖核酸(Ribonucleic Acid, RNA),測定提取的RNA濃度,使用TaKaRa公司的cDNA合成試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成互補脫氧核糖核酸(Complementary Deoxyribonucleic Acid, cDNA),再使用TaKaRa公司的SYBR Green實時定量PCR試劑盒進行PCR反應(yīng),以測定DKKl和內(nèi)參蛋白的mRNA表達情況。5.DKK1濃度的測定使用RD公司的Human DKK1 Immunoassay ELISA試劑盒檢測巨噬細胞分泌到胞外的DKK1濃度。按照ELISA試劑盒說明書配制DKKl標準品并稀釋樣品,添加到事先包被有DKK1單克隆抗體的96孔酶標板中,并依次加入說明書中相應(yīng)的試劑,使用酶標儀測定450nm各孔吸光度,并繪制標準曲線,計算不同刺激下分泌到胞外的DKK1濃度。6.免疫共沉淀不同刺激后使用Western及IP細胞裂解液提取細胞中總蛋白,留取部分加入5×蛋白上樣緩沖液后煮沸留作對照,剩余蛋白裂解液中加入事先配好的50%瓊脂糖磁珠和合適濃度的一抗原液4℃孵育過夜,清洗瓊脂糖磁珠后,加入2×蛋白上樣緩沖液后煮沸,使得結(jié)合在磁珠上的蛋白脫離,留取上清棄磁珠,Western Blot檢測相關(guān)蛋白的含量。7.統(tǒng)計學分析實驗所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準誤表示,采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。多組之間的統(tǒng)計分析采用單因素方差分析,P0.05代表統(tǒng)計學有顯著性差異。研究結(jié)果1. ox-LDL上調(diào)巨噬細胞DKKl的表達100mg/L ox-LDL刺激6小時和9小時顯著上調(diào)巨噬細胞內(nèi)DKK1蛋白的表達(P0.05)。濃度梯度刺激6小時,100mg/L ox-LDL刺激對DKK1蛋白的上調(diào)達到峰值(P0.05)。同時,50mg/L和100mg/L ox-LDL刺激6小時能夠上調(diào)巨噬細胞DKK1 mRNA水平(P0.05)。而100mg/L ox-LDL刺激9小時,DKK1的上清水平顯著上調(diào)(P0.05)。2.經(jīng)典Wnt通路參與ox-LDL對巨噬細胞中DKKl表達的調(diào)節(jié)與陰性對照組相比,β-catenin siRNA能夠顯著下調(diào)巨噬細胞中β-catenin及其靶基因CyclinD1的表達水平(P0.05)。同時ox-LDL刺激6小時,對DKK1的上調(diào)作用被β-catenin干擾阻斷,表明經(jīng)典Wnt通路參與ox-LDL對DKK1的上調(diào)作用。3.LXRa參與ox-LDL對巨噬細胞中DKKl表達的調(diào)節(jié),而LXRβ參與與對照組相比,LXRs激動劑T0901317、GW3965、22-(R)-OH能夠顯著阻斷ox-LDL對DKK1的上調(diào)作用(P0.05)。而LXRs抑制劑GGPP和22-(S)-OH能夠顯著上調(diào)巨噬細胞內(nèi)DKK1的表達水平,同時LXRs抑制劑組與ox-LDL刺激組無統(tǒng)計學差異(P0.05)。與陰性對照組相比,LXRa干擾組中巨噬細胞中DKK1的表達水平顯著上調(diào)(P0.05)。而LXRP干擾卻不能上調(diào)巨噬細胞中DKK1的水平(P0.05)。4. ox-LDL下調(diào)巨噬細胞中LXRs與P-catenin的相互作用免疫共沉淀結(jié)果顯示,與空白對照組相比,ox-LDL不僅下調(diào)了巨噬細胞中LXRa與β-catenin的相互結(jié)合,同時亦減少了巨噬細胞中β-catenin與LXRβ的相互結(jié)合。結(jié)論(1) ox-LDL能夠上調(diào)巨噬細胞中DKK1的表達；(2) ox-LDL能夠減少LXRa對β-catenin的抑制作用來上調(diào)DKK1的表達。研究背景Wnt信號通路是一條與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和脊椎動物胚胎發(fā)育有重要關(guān)系的信號通路,近年來在心血管領(lǐng)域的研究越來越受到人們的關(guān)注。DKK1作為經(jīng)典Wnt通路的分泌型抑制劑,除了參與調(diào)節(jié)皮膚色素和厚度、骨骼的形成及穩(wěn)態(tài)、神經(jīng)退行性疾病、脂質(zhì)代謝等,DKKl在心血管疾病中的作用也不容忽視。DKK1不僅影響心肌細胞、心臟瓣膜等多種心血管成分的生成,還可以促進主動脈內(nèi)皮的的內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化來調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,同時DKK1可以增加內(nèi)皮和血小板之間的炎癥反應(yīng),發(fā)揮促動脈粥樣硬化和增加斑塊易損性的作用。DKK1與脂肪代謝存在著密不可分的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn),DKK1能夠促進脂肪生成的過程,同時發(fā)現(xiàn)可源于脂肪細胞分布異常的成人肥胖,其脂肪生成過程異常主要由于經(jīng)典Wnt通路的異常活化和低水平的DKK1所致。在動脈粥樣硬化過程中DKK1與巨噬細胞的脂質(zhì)代謝功能是否存在著一定的聯(lián)系未見報道。巨噬細胞吞噬脂質(zhì)變?yōu)榕菽毎趧用}粥樣硬化中起到了重要的作用。巨噬細胞的脂質(zhì)代謝主要分為脂質(zhì)的吞噬、轉(zhuǎn)化和排出三個過程來維持其穩(wěn)態(tài)和平衡。巨噬細胞通過胞膜受體識別攝取脂蛋白和脂蛋白顆粒,并運送到溶酶體后被分解為氨基酸及游離膽固醇。繼而酯酰輔酶A膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)將其轉(zhuǎn)化為膽固醇酯儲存在胞質(zhì)中。當膽固醇接收體如HDL, apoA-Ⅰ等存在時,胞內(nèi)的游離膽固醇可經(jīng)過胞膜上的受體ABCA1、ABCG1等外流,減少胞質(zhì)內(nèi)脂質(zhì)過度沉積。在動脈粥樣硬化過程中DKK1與巨噬細胞的脂質(zhì)代謝功能是否存在著一定的聯(lián)系未見報道。研究目的：(1)明確DKK1對巨噬細胞脂質(zhì)代謝的作用；(2)明確經(jīng)典Wnt通路在DKK1調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮的作用；(3)明確巨噬細胞中DKK1對脂質(zhì)受體LOX-1和ABCA/G1的調(diào)節(jié)及相關(guān)信號通路。研究方法：1.細胞培養(yǎng)本實驗使用的THP-1細胞系為單核／巨噬細胞系,購自美國ATCC中心。將PMA加入培養(yǎng)基中,誘導細胞貼壁生長,成為THP-1來源的巨噬細胞。2.細胞轉(zhuǎn)染DKK1、β-catenin和STAT3的siRNA和陰性對照Negative control siRNA均由上海吉瑪公司合成,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染,具體步驟參照Lipo-2000的說明書進行。3.蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)刺激結(jié)束后RIPA裂解液提取蛋白,加入5×蛋白上樣緩沖液,煮沸,SDS-PAGE電泳,濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜,封閉,一抗孵育4℃過夜,洗去附著的一抗,對應(yīng)的二抗室溫孵育,洗去附著的二抗,化學發(fā)光法檢測相應(yīng)的蛋白灰度值。4.細胞油紅O染色刺激結(jié)束后,4%甲醛固定細胞,使用配制的油紅O工作液染色10分鐘,洗去浮色,蘇木素染核2分鐘,鹽酸酒精分化15秒,置于清水中返藍7分鐘,甘油明膠封片短期保存,并拍照統(tǒng)計脂質(zhì)沉積情況。5. Dil-ox-LDL吞噬實驗給予細胞不同刺激后加入Dil-ox-LDL孵育過夜,避光棄去培養(yǎng)基,4%甲醛固定,1×PBS洗去附著的甲醛,DAPI染核8分鐘,1×PBS沖洗細胞,防熒光淬滅劑封片,共聚焦顯微鏡549nm激發(fā)波長下檢測熒光強度,統(tǒng)計Dil-ox-LDL吞噬情況。6.統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)土標準誤表示,兩組之間的統(tǒng)計分析采用非配對t檢驗,多組之間的統(tǒng)計分析采用單因素方差分析,P0.05代表統(tǒng)計學有顯著性差異。研究結(jié)果1.DKKl抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積與陰性對照組相比,DKK1干擾組油紅O染色結(jié)果顯示巨噬細胞胞內(nèi)脂質(zhì)沉積顯著增加(P0.05)。與空白對照組相比,rDKKl顯著降低了巨噬細胞胞內(nèi)脂質(zhì)沉積(P0.05)。Dil-ox-LDL吞噬實驗結(jié)果表明,與陰性對照相比,DKKl干擾組顯著上調(diào)了巨噬細胞的脂質(zhì)吞噬能力(P0.05),而rDKK1組的熒光強度則顯著低于空白對照組(P0.05)。以上結(jié)果表明DKK1能夠抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。2.Wnt通路參與DKK1對巨噬細胞脂質(zhì)沉積的抑制作用與陰性對照組相比,DKK1干擾組的(β-catenin水平顯著上調(diào),而P-β-catenin水平顯著下調(diào)(P0.05)。相反,rDKK1能夠阻斷ox-LDL對P-catenin的上調(diào)和P-β-catenin的下調(diào)作用(P0.05)。與陰性對照組相比,β-catenin干擾組的油紅O強度和熒光強度均顯著下調(diào)(P0.05)。表明抑制經(jīng)典Wnt通路可以減少巨噬細胞胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。3.DKKl通過抑制經(jīng)典Wnt通路下調(diào)巨噬細胞脂質(zhì)受體LOX-1的表達rDKK1能夠顯著逆轉(zhuǎn)ox-LDL對LOX-1的上調(diào)作用(P0.05)；與陰性對照組相比,DKK1干擾組能夠顯著上調(diào)LOX-1的表達,進一步加強ox-LDL對LOX-1的上調(diào)作用(P0.05)；與陰性對照組相比,β-catenin干擾能夠阻斷ox-LDL上調(diào)巨噬細胞LOX-1的表達情況(P0.05)。4.DKKl通過活化STAT3通路上調(diào)巨噬細胞脂質(zhì)受體ABCA/G1的表達與空白對照組相比,rDKK1刺激10-30分鐘能夠顯著上調(diào)P-STAT3的表達,活化STAT3通路(P0.05)。與空白對照組相比,rDKK1能夠顯著上調(diào)ABCA1和ABCG1的表達(P0.05)；而在加入STAT3抑制劑逆轉(zhuǎn)rDKK1對ABCA1和ABCG1的上調(diào)作用(P0.05)；與陰性對照組相比,STAT3干擾組能夠阻斷rDKK1對ABCAl的上調(diào)作用(P0.05)。結(jié)論(1)DKK1能夠抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積；(2)DKK1通過抑制Wnt/β-catenin通路下調(diào)LOX-1的表達；(3)DKKl通過活化STAT3通路上調(diào)ABCA/G1的表達。研究背景自噬(Autophagy)是真核生物進化過程中相對保守的生命現(xiàn)象,是指細胞利用溶酶體水解酶水解細胞內(nèi)容物的過程,分為巨自噬、微自噬和分子伴侶介導的自噬。巨自噬是指在饑餓等環(huán)境因素刺激下,胞質(zhì)內(nèi)形成雙層膜結(jié)構(gòu)將胞質(zhì)內(nèi)容物包裹運送至溶酶體被水解酶降解的過程；而微自噬是指溶酶體直接吞噬胞質(zhì)內(nèi)容物清除的現(xiàn)象；分子伴侶介導的自噬,是指在分子伴侶的協(xié)助下,胞內(nèi)容物被運送至溶酶體降解的現(xiàn)象。自噬能夠影響細胞的生存,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。一方面在早期腫瘤中自噬能夠阻斷腫瘤的發(fā)生,而抑制自噬水平會導致腫瘤的惡化；另一方面的腫瘤成熟后過快的生長、缺血,導致腫瘤內(nèi)環(huán)境惡劣,誘導自噬的發(fā)生,作為對周圍不良環(huán)境的應(yīng)激反應(yīng),此時的自噬會降解壞死的細胞器等胞內(nèi)容物,阻止腫瘤細胞的凋亡壞死,促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。自噬的本質(zhì)是一種膜運輸系統(tǒng),能夠形成雙層膜結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)運胞內(nèi)物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn),存在一種自噬小體能夠?qū)|(zhì)內(nèi)的脂質(zhì)運送至溶酶體降解,稱為自噬脂小體(Lipophagy)。胞質(zhì)內(nèi)的自噬小體與脂滴融合形成自噬脂小體后,移動到溶酶體處與之結(jié)合形成自噬脂滴溶酶體,其中的膽固醇酯在溶酶體中被降解為游離的膽固醇,并通過膽固醇逆向轉(zhuǎn)運運出胞外。研究表明,Wnt/β-catenin通路對于基礎(chǔ)狀態(tài)和應(yīng)激狀態(tài)下的自噬水平均起到負調(diào)控的作用；而自噬活化時β-catenin能夠發(fā)生自噬性降解來抑制Wnt通路,形成一個負反饋調(diào)節(jié)。然而自噬在DKK1對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著的作用尚未見報道。研究目的(1)明確DKK1對巨噬細胞中自噬水平的影響；(2) 明確自噬水平的改變是否參與DKK1對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)。研究方法1.細胞培養(yǎng)本實驗使用單核/巨噬細胞系THP-1細胞。將THP-1細胞種板后,以PMA誘導為巨噬細胞作為實驗模型。2.細胞轉(zhuǎn)染DKK1 siRNA、ATG5 siRNA和Negative control siRNA均由上海吉瑪公司合成,對細胞進行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染步驟按照Lipo-2000說明書進行。3.蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)給予不同刺激后RIPA裂解液提取細胞蛋白,煮沸,SDS-PAGE電泳,按照對應(yīng)的分子量切膠,濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜,封閉,4℃一抗孵育過夜,洗膜,室溫二抗孵育1小時20分鐘,洗膜,化學發(fā)光法發(fā)光,分析蛋白條帶灰度。4.巨噬細胞吞噬功能檢測給予不同刺激后,加入ac-LDL刺激過夜,4%甲醛固定30分鐘,油紅O工作液染色10分鐘,洗去浮色,蘇木素染核2分鐘,鹽酸酒精去分化15秒,置于清水中返藍7分鐘后,甘油明膠封片,拍照并統(tǒng)計胞質(zhì)內(nèi)的脂質(zhì)沉積情況。細胞給予不同刺激后,加入Dil-ac-LDL避光孵育過夜,棄去培養(yǎng)基,1×PBS沖洗細胞,4%甲醛固定,1×PBS沖洗細胞,DAPI染核8分鐘,1×PBS沖洗細胞,抗熒光淬滅劑封片,共聚焦顯微鏡549nm激發(fā)波長下檢測熒光強度,以檢測巨噬細胞對Dil-ac-LDL的吞噬能力。5.免疫共沉淀給予不同刺激后,Western及IP細胞裂解液提取細胞蛋白,留取部分裂解液,加入5×蛋白上樣緩沖液,煮沸留作對照。加入50%瓊脂糖磁珠和適當濃度的一抗原液,4℃孵育過夜,清洗磁珠,加入2×蛋白上樣緩沖液煮沸,留取上清,Western Blot檢測相關(guān)蛋白的含量。6.統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準誤表示,采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。多組之間的統(tǒng)計分析采用單因素方差分析,P0.05代表統(tǒng)計學有顯著性差異。研究結(jié)果1.DKKl上調(diào)巨噬細胞中自噬的水平本研究以檢測巨噬細胞中自噬的標志性分子LC3-II的表達來評估自噬水平�；A(chǔ)水平的細胞中LC3-Ⅱ的表達水平較低,當加入自噬誘導劑px-LDL、 Rapamycin和EBSS時,LC3-Ⅱ的表達明顯升高,同時加入rDKK1能夠顯著增加細胞內(nèi)的LC3-II表達水平(P0.05)。但使用DKK1 siRNA干擾巨噬細胞中DKKl的表達時,與陰性對照組相比,自噬誘導劑升高的LC3-II水平被顯著下調(diào)(P0.05),甚至低于基礎(chǔ)水平。使用自噬的抑制劑3-MA和LY294002時,:DKK1上調(diào)的LC3-Ⅱ表達被顯著下調(diào)(P0.05)。2.DKKl通過上調(diào)自噬水平來抑制巨噬細胞中的脂質(zhì)沉積與rDKKl刺激組相比,加入3-MA阻斷自噬水平后,胞質(zhì)內(nèi)的脂質(zhì)沉積顯著增加；與rDKKl刺激的陰性對照組相比,ATG5干擾組的胞內(nèi)脂質(zhì)沉積也恢復到了基礎(chǔ)水平(P0.05)。Dil-ac-LDL結(jié)果顯示,使用3-MA和ATG5小干擾后,rDKKl對巨噬細胞的Dil-ac-LDL吞噬的抑制作用被逆轉(zhuǎn)(P0.05)。3.DKKl通過上調(diào)自噬水平來調(diào)節(jié)巨噬細胞脂質(zhì)受體的表達在rDKKl刺激的同時加入3-MA和ATG5小干擾下調(diào)巨噬細胞自噬水平時,與單純rDKK1刺激組相比,LOX-1的水平有所上調(diào)(P0.05),而ABCA1的水平分別下調(diào)71%(3-MA組)和68%(ATG5干擾組),ABCG1僅下調(diào)20%(3-MA組)和34%(ATG5干擾組)(P0.05)。4.DKK1能夠通過自噬化降解下調(diào)巨噬細胞中的β-catenin的水平與空白對照組相比,rDKKl顯著下調(diào)巨噬細胞中β-catenin的水平,而使用了蛋白酶體抑制劑MG-132和自噬抑制劑3-MA時,rDKKl對β-catenin的下調(diào)作用被阻斷(P0.05)。同時與陰性對照組相比,加入rDKK1組下調(diào)β-catenin的水平,ATG5干擾后rDKK1刺激組的β-catenin的水平顯著上調(diào)(P0.05)。免疫共沉淀結(jié)果顯示,與空白對照組相比,rDKK1刺激組LC3B與β-catenin的表達水平均上調(diào),表明rDKKl上調(diào)巨噬細胞中LC3B與β-catenin的結(jié)合。結(jié)論(1)DKK1能夠上調(diào)巨噬細胞的自噬水平來抑制脂質(zhì)代謝；(2)DKK1通過自噬調(diào)節(jié)脂質(zhì)受體LOX-1和ABCA/G1的表達。(3)DKK1能夠促進巨噬細胞中β-catenin的自噬化降解。
【關(guān)鍵詞】：氧化型低密度脂蛋白 DKK1 β-catenin 肝臟X受體α DKK1 脂質(zhì)代謝 凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1 三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A/G1 DKK1 自噬 脂質(zhì)代謝
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 前言8-10
• 中文摘要Ⅰ10-14
• 英文摘要Ⅰ14-19
• 符號說明Ⅰ19-21
• 論文I Ox-LDL調(diào)節(jié)巨噬細胞DKK1的表達及相關(guān)分子機制21-54
• 前言21-23
• 1. 材料與方法23-36
• 2. 結(jié)果36-38
• 3. 討論38-42
• 4. 結(jié)論42-43
• 附圖43-48
• 參考文獻48-54
• 中文摘要Ⅱ54-58
• 英文摘要Ⅱ58-63
• 符號說明Ⅱ63-65
• 論文Ⅱ DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及相關(guān)脂質(zhì)受體的變化65-97
• 前言65-66
• 1. 材料與方法66-76
• 2. 結(jié)果76-78
• 3. 討論78-82
• 4. 結(jié)論82-83
• 附圖83-89
• 參考文獻89-97
• 中文摘要Ⅲ97-101
• 英文摘要Ⅲ101-106
• 符號說明Ⅲ106-107
• 論文Ⅲ DKK1對巨噬細胞自噬水平的影響及其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用107-133
• 前言107-108
• 1. 材料與方法108-115
• 2. 結(jié)果115-117
• 3. 討論117-121
• 4. 結(jié)論121-122
• 附圖122-127
• 參考文獻127-133
• 致謝133-134
• 攻讀博士學位期間發(fā)表的論文134-135
• 學位論文評閱及答辯情況表135-136
• 英文論文Ⅰ136-160
• 英文論文Ⅱ160-173

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10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞促進腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導巨噬細胞極化效應(yīng)對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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