目的:隨著早產(chǎn)兒存活率的逐漸增加,早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年增加的趨勢。腦室周圍白質(zhì)軟化（periventricular leukomalacia,PVL）是早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的主要類型之一,其損傷部位及程度直接關(guān)系到早產(chǎn)兒神經(jīng)系統(tǒng)功能的發(fā)育。但目前該病仍沒有有效的臨床治療措施。近些年隨著國內(nèi)外學(xué)者對PVL研究的不斷深入,人們發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化是早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的一個標(biāo)志性特征,活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞可能不是PVL發(fā)生發(fā)展的偶然病理反應(yīng),而是PVL組織損傷修復(fù)過程中的主要參與者。星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦白質(zhì)損傷情況下,可以通過抑制毒性反應(yīng)的機(jī)制維持神經(jīng)元周圍微環(huán)境及整個腦組織的穩(wěn)態(tài),從而發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)元功能的關(guān)鍵作用。目前有研究表明白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）可通過白血病抑制因子受體（leukemia inhibitory factor receptor,LIFR）介導(dǎo)Stat3信號通路促進(jìn)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞存活,從而保護(hù)星形膠質(zhì)細(xì)胞免受活性氧自由基損傷并促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞發(fā)育成熟。但星形膠質(zhì)細(xì)胞不同活化狀態(tài)下LIFR的表達(dá)變化以及下游... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :白血病抑制因子對腦室周圍白質(zhì)軟化新生大鼠腦白質(zhì)損傷及星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要藥品及試劑的配置
        2.2 研究對象和分組
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動物
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 研究方法
            2.3.0 PVL動物模型的建立
            2.3.1 新生大鼠腦組織HE染色
            2.3.2 免疫組化染色
            2.3.3 TUNEL及 GFAP雙標(biāo)免疫熒光染色
            2.3.4 Western Blot檢測技術(shù)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 PVL新生大鼠一般情況及行為學(xué)表現(xiàn)
        3.2 LIF對 PVL大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)的影響
        3.3 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.3.1 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中GFAP表達(dá)的影響
            3.3.2 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中MBP表達(dá)的影響
            3.3.3 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中Bax/Bcl2 表達(dá)的影響
            3.3.4 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中LIFR表達(dá)的影響
        3.4 LIF對 PVL大鼠腦白質(zhì)中星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :LIF及 LIFR在氧糖剝奪誘導(dǎo)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和分組
        2.3 研究方法
            2.3.1 原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定
            2.3.2 氧糖剝奪誘導(dǎo)原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡模型建立
            2.3.3 實(shí)時熒光定量PCR檢測技術(shù)
            2.3.4 流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)
            2.3.5 TUNEL染色法
            2.3.6 MTT法檢測技術(shù)
            2.3.7 Western Blot檢測技術(shù)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞鑒定
        3.2 氧糖剝奪后星形膠質(zhì)細(xì)胞LIF的表達(dá)變化
        3.3 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的變化
            3.3.1 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察
            3.3.2 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡水平的變化
        3.4 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞活力變化
        3.5 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞LIFR表達(dá)變化
            3.5.1 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞LIFR的 mRNA表達(dá)變化
            3.5.2 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞LIFR的蛋白表達(dá)變化
        3.6 氧糖剝奪條件下LIF干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡蛋白及相關(guān)信號通路蛋白的變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 沉默LIFR對氧糖剝奪誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和分組
        2.3 研究方法
            2.3.1 原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 氧糖剝奪誘導(dǎo)原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡模型建立
            2.3.3 SiRNA基因干擾技術(shù)
            2.3.4 流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)
            2.3.5 MTT檢測法
            2.3.6 TUNEL染色法
            2.3.7 Western Blot方法
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 SiRNA抑制原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞LIFR表達(dá)情況
            3.1.1 SiRNA瞬時轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞情況
            3.1.2 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞LIFR表達(dá)抑制效果最好的siRNA及時間點(diǎn)
            3.1.3 抑制LIFR表達(dá)后原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中LIFR蛋白表達(dá)情況
        3.2 沉默LIFR后星形膠質(zhì)細(xì)胞在常氧和氧糖剝奪條件下活力變化
        3.3 沉默LIFR后星形膠質(zhì)細(xì)胞在常氧和氧糖剝奪條件下凋亡水平變化
        3.4 沉默LIFR后星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡蛋白及相關(guān)信號通路蛋白的變化
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BCI induces apoptosis via generation of reactive oxygen species and activation of intrinsic mitochondrial pathway in H1299 lung cancer cells[J]. Jong-Woon Shin,Sae-Bom Kwon,Yesol Bak,Sang-Ku Lee,Do-Young Yoon.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[2]Pathophysiology of periventricular leukomalacia: what we learned from animal models[J]. Nahla Zaghloul,Mohamed Ahmed.  Neural Regeneration Research. 2017(11)
[3]Reactive astrocyte scar and axon regeneration:suppressor or facilitator?[J]. Yosuke Ohtake,George M.Smith,Shuxin Li.  Neural Regeneration Research. 2016(07)
[4]New advances on glial activation in health and disease[J]. Kim Mai Lee,Andrew G Mac Lean.  World Journal of Virology. 2015(02)
[5]內(nèi)源性白血病抑制因子在腦室周圍白質(zhì)軟化新生大鼠腦組織中的表達(dá)[J]. 范玉穎,于濤,張俊梅,王華,趙桂鋒,劉波.  中國當(dāng)代兒科雜志. 2014(09)



本文編號：3467595