第一部分新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞的原代培養(yǎng)目的:本部分研究旨在建立K?lliker器支持細(xì)胞體外原代培養(yǎng)體系,探討其在離體培養(yǎng)培養(yǎng)條件下的生物學(xué)特性,生長模式。方法:取出生1到3天的SD大鼠耳蝸,在高倍顯微鏡下通過機械分離和酶消化相結(jié)合的辦法分離出純K?lliker器,進行體外組織培養(yǎng),并對分離的K?lliker器支持細(xì)胞通過免疫組化和RT-PCR擴增的辦法進行鑒定。結(jié)果:免疫組化染色證明分離的K?lliker器是單一的上皮組織,K?lliker器組織塊體外培養(yǎng)后顯微鏡下發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞呈現(xiàn)典型的鋪路石樣外觀,細(xì)胞間連接緊密,具有明顯的增殖能力,在含血清培養(yǎng)基中易形成貼壁細(xì)胞;對Hes1,Hes5以及Math1基因進行RT-PCR分析,分離并培養(yǎng)的K?lliker器支持細(xì)胞特異性表達(dá)Hes1基因。結(jié)論:利用酶消化和機械解剖結(jié)合的方法可以分離出純粹的有活性的K?lliker器,K?lliker器支持細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力,可得到純度較高的新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞,并用于進一步的實驗研究。第二部分新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞中ATP存在形式的研究目的:本... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

新生大鼠耳蝸基底膜的解剖分離×100Fig1SeparationofCochlearbasilarmembraneinNeonatalRats×100

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文12圖2新生大鼠耳蝸上皮薄層組織的解剖分離×100Fig2IsolationofCESofnewbornratcochlea×100經(jīng)嗜熱菌蛋白酶和DNA酶的D-Hanks’溶液消化后，耳蝸上皮組織與結(jié)締組織之間變得較為寬松，在高倍顯微鏡下，通過顯微鎢絲針可以輕松從基底膜上將上皮組織掀起，便于進一步分離。CES：耳蝸薄層上皮組織片Mesenchyme：間質(zhì)組織圖3分離后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500Fig3TheCESwasmostlycomposedoftheGERandtheorganofCorti,whichcontainsIHCsandOHCs×500在高倍顯微鏡下，四排毛細(xì)胞隱約可見。內(nèi)、外毛細(xì)胞之間有一條微弱的暗帶。Klliker器則表現(xiàn)是一條白絲帶。在IHC和Klliker器之間有一個相對較暗的條帶，因為Klliker器比IHC有更多的細(xì)胞層，這就導(dǎo)致了由于兩者厚度的不同，

圖3分離后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]支持細(xì)胞在哺乳動物耳蝸發(fā)育及功能中的作用[J]. 陳佳瑞,楊軍.  國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2017 (04)
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[3]新生大鼠Klliker器支持細(xì)胞體外凋亡及增殖的研究[J]. 何圓圓,楊軍.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2015(02)
[4]新生大鼠耳蝸血管紋緣細(xì)胞中ATP存在的證據(jù)[J]. 陳潔,何珊,楊軍.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2010(10)
[5]大鼠耳蝸大上皮嵴細(xì)胞體外培養(yǎng)的實驗觀察[J]. 張媛,孫建和,胡吟燕,鄭貴亮,翟所強.  中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2007(10)
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本文編號：3462347