第一部分新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞的原代培養(yǎng)目的:本部分研究旨在建立K?lliker器支持細(xì)胞體外原代培養(yǎng)體系,探討其在離體培養(yǎng)培養(yǎng)條件下的生物學(xué)特性,生長(zhǎng)模式。方法:取出生1到3天的SD大鼠耳蝸,在高倍顯微鏡下通過(guò)機(jī)械分離和酶消化相結(jié)合的辦法分離出純K?lliker器,進(jìn)行體外組織培養(yǎng),并對(duì)分離的K?lliker器支持細(xì)胞通過(guò)免疫組化和RT-PCR擴(kuò)增的辦法進(jìn)行鑒定。結(jié)果:免疫組化染色證明分離的K?lliker器是單一的上皮組織,K?lliker器組織塊體外培養(yǎng)后顯微鏡下發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞呈現(xiàn)典型的鋪路石樣外觀,細(xì)胞間連接緊密,具有明顯的增殖能力,在含血清培養(yǎng)基中易形成貼壁細(xì)胞;對(duì)Hes1,Hes5以及Math1基因進(jìn)行RT-PCR分析,分離并培養(yǎng)的K?lliker器支持細(xì)胞特異性表達(dá)Hes1基因。結(jié)論:利用酶消化和機(jī)械解剖結(jié)合的方法可以分離出純粹的有活性的K?lliker器,K?lliker器支持細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力,可得到純度較高的新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞,并用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。第二部分新生大鼠耳蝸K?lliker器支持細(xì)胞中ATP存在形式的研究目的:本... 

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新生大鼠耳蝸基底膜的解剖分離×100Fig1SeparationofCochlearbasilarmembraneinNeonatalRats×100

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文12圖2新生大鼠耳蝸上皮薄層組織的解剖分離×100Fig2IsolationofCESofnewbornratcochlea×100經(jīng)嗜熱菌蛋白酶和DNA酶的D-Hanks’溶液消化后，耳蝸上皮組織與結(jié)締組織之間變得較為寬松，在高倍顯微鏡下，通過(guò)顯微鎢絲針可以輕松從基底膜上將上皮組織掀起，便于進(jìn)一步分離。CES：耳蝸薄層上皮組織片Mesenchyme：間質(zhì)組織圖3分離后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500Fig3TheCESwasmostlycomposedoftheGERandtheorganofCorti,whichcontainsIHCsandOHCs×500在高倍顯微鏡下，四排毛細(xì)胞隱約可見(jiàn)。內(nèi)、外毛細(xì)胞之間有一條微弱的暗帶。Klliker器則表現(xiàn)是一條白絲帶。在IHC和Klliker器之間有一個(gè)相對(duì)較暗的條帶，因?yàn)镵lliker器比IHC有更多的細(xì)胞層，這就導(dǎo)致了由于兩者厚度的不同，

圖3分離后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]支持細(xì)胞在哺乳動(dòng)物耳蝸發(fā)育及功能中的作用[J]. 陳佳瑞,楊軍.  國(guó)際耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2017 (04)
[2]新生大鼠耳蝸Klliker器在體凋亡的研究[J]. 楊軍,何圓圓.  聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志. 2016(04)
[3]新生大鼠Klliker器支持細(xì)胞體外凋亡及增殖的研究[J]. 何圓圓,楊軍.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2015(02)
[4]新生大鼠耳蝸血管紋緣細(xì)胞中ATP存在的證據(jù)[J]. 陳潔,何珊,楊軍.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2010(10)
[5]大鼠耳蝸大上皮嵴細(xì)胞體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)觀察[J]. 張媛,孫建和,胡吟燕,鄭貴亮,翟所強(qiáng).  中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2007(10)
[6]大鼠耳蝸大上皮嵴的分離和鑒定[J]. 宋巍,胡吟燕,郭維,鄭貴亮,翟所強(qiáng),高維強(qiáng).  臨床耳鼻咽喉科雜志. 2005(13)



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