研究背景及目的結直腸癌（Colorectal Cancer,CRC）是目前全球的第三大癌癥死因,也是全球范圍內因癌癥死亡的主要原因之一。結直腸癌發(fā)病隱匿,多數確診時已為晚期。結直腸癌患者死亡主要是由于轉移發(fā)生,超過70%的患者會出現(xiàn)肝臟轉移,肝轉移是影響結直腸癌預后差的重要因素。闡釋結直腸癌肝轉移發(fā)生和發(fā)展的分子機制,探尋結直腸癌肝轉移早期診斷標志物及有效的治療靶點,是降低結直腸癌死亡率的關鍵。本研究中,通過microRNA微陣列芯片高通量篩選正常組織-腺瘤-結直腸癌發(fā)生和發(fā)展相關的差異miRNA,并通過進一步擴大樣本量,采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術驗證并建立結直腸癌miRNA差異表達譜,篩選出在正常組織-腺瘤-結直腸癌中表達逐漸增加的miR-135a-5p進行后續(xù)的功能研究。結合結直腸癌患者及細胞外泌體分析,識別及驗證外泌體miR-135a-5p調控的下游靶基因及相關信號通路,初步探討外泌體穿梭miR-135a-5p在結直腸癌肝轉移微環(huán)境中的作用機制,并進一步評價其作為結直腸癌診斷及預后標志物的診斷價值,為闡明結直腸癌肝轉移的發(fā)病機理、發(fā)現(xiàn)早期診斷標志物及以miR-1... 

【文章來源】：東南大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

miRNA芯片掃描結果

東南大學博士學位論文10圖1-1.提取總RNA的電泳圖（28S和18S核糖體的RNA電泳帶比較亮，且未發(fā)現(xiàn)RNA彌散現(xiàn)象，可見RNA帶清晰，未發(fā)生彌散，可用于miRNA芯片雜交）3.3miRNA芯片掃描結果（以1號癌旁組織，7號腺瘤組織，1號癌組織為例）圖1-2中所示的綠色熒光信號表示在該位置探針所檢測的miRNA在組織中可能有表達，并且熒光信號的強弱與組織樣本中miRNA的表達水平直接相關無熒光信號則提示在該處芯片探針所檢測的miRNA在組織樣本中可能沒有表達。圖1-2.miRNA芯片掃描結果3.4芯片數據質量評估Boxplot（箱形圖）可以直觀地顯示出數據集的分布，通過對miRNA表達譜的原始

第一章結直腸癌組織microRNA差異表達譜的分析11數據進行標準化后，各樣本數據的中位數基本保持一致，符合正態(tài)分布特征，能較好的進行差異表達miRNA的篩選（圖1-3）。圖1-3.miRNA芯片數據標準化前后比較的boxplot圖（BeforeNormalization：數據標準化前；AfterNormalization：數據標準化后）3.5芯片中差異表達miRNA的識別通過對miRNA芯片數據進行分層聚類分析，結果顯示芯片可正確區(qū)分癌旁組織、腺瘤組織以及結直腸癌組織樣本（圖1-4）。差異miRNA篩選條件為：閾值Foldchange上調2倍以上或下調超過0.5倍，P<0.05，進行三組樣本間差異表達的miRNA的交互分析，最終篩選出3個miRNA在三組樣本均差異表達（圖1-5），其中，僅有miR-135a-5p的表達在癌旁-腺瘤-癌組織中呈逐漸增加趨勢（圖1-6）。圖1-4.組織樣本中差異表達的miRNA聚類分析熱圖（NOR：癌旁組織；ADE：腺瘤組織；CRC：結直腸癌組織；紅色表示基因表達上調，藍色表示基因表達下調）


本文編號：3424181