發(fā)布時(shí)間：2021-10-08 12:41

　　研究背景及目的結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer,CRC）是目前全球的第三大癌癥死因,也是全球范圍內(nèi)因癌癥死亡的主要原因之一。結(jié)直腸癌發(fā)病隱匿,多數(shù)確診時(shí)已為晚期。結(jié)直腸癌患者死亡主要是由于轉(zhuǎn)移發(fā)生,超過70%的患者會(huì)出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移,肝轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌預(yù)后差的重要因素。闡釋結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制,探尋結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移早期診斷標(biāo)志物及有效的治療靶點(diǎn),是降低結(jié)直腸癌死亡率的關(guān)鍵。本研究中,通過microRNA微陣列芯片高通量篩選正常組織-腺瘤-結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展相關(guān)的差異miRNA,并通過進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)驗(yàn)證并建立結(jié)直腸癌miRNA差異表達(dá)譜,篩選出在正常組織-腺瘤-結(jié)直腸癌中表達(dá)逐漸增加的miR-135a-5p進(jìn)行后續(xù)的功能研究。結(jié)合結(jié)直腸癌患者及細(xì)胞外泌體分析,識(shí)別及驗(yàn)證外泌體miR-135a-5p調(diào)控的下游靶基因及相關(guān)信號(hào)通路,初步探討外泌體穿梭miR-135a-5p在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移微環(huán)境中的作用機(jī)制,并進(jìn)一步評(píng)價(jià)其作為結(jié)直腸癌診斷及預(yù)后標(biāo)志物的診斷價(jià)值,為闡明結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)病機(jī)理、發(fā)現(xiàn)早期診斷標(biāo)志物及以miR-1... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

miRNA芯片掃描結(jié)果

東南大學(xué)博士學(xué)位論文10圖1-1.提取總RNA的電泳圖（28S和18S核糖體的RNA電泳帶比較亮，且未發(fā)現(xiàn)RNA彌散現(xiàn)象，可見RNA帶清晰，未發(fā)生彌散，可用于miRNA芯片雜交）3.3miRNA芯片掃描結(jié)果（以1號(hào)癌旁組織，7號(hào)腺瘤組織，1號(hào)癌組織為例）圖1-2中所示的綠色熒光信號(hào)表示在該位置探針?biāo)鶛z測的miRNA在組織中可能有表達(dá)，并且熒光信號(hào)的強(qiáng)弱與組織樣本中miRNA的表達(dá)水平直接相關(guān)無熒光信號(hào)則提示在該處芯片探針?biāo)鶛z測的miRNA在組織樣本中可能沒有表達(dá)。圖1-2.miRNA芯片掃描結(jié)果3.4芯片數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估Boxplot（箱形圖）可以直觀地顯示出數(shù)據(jù)集的分布，通過對(duì)miRNA表達(dá)譜的原始

第一章結(jié)直腸癌組織microRNA差異表達(dá)譜的分析11數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后，各樣本數(shù)據(jù)的中位數(shù)基本保持一致，符合正態(tài)分布特征，能較好的進(jìn)行差異表達(dá)miRNA的篩選（圖1-3）。圖1-3.miRNA芯片數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化前后比較的boxplot圖（BeforeNormalization：數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化前；AfterNormalization：數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后）3.5芯片中差異表達(dá)miRNA的識(shí)別通過對(duì)miRNA芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分層聚類分析，結(jié)果顯示芯片可正確區(qū)分癌旁組織、腺瘤組織以及結(jié)直腸癌組織樣本（圖1-4）。差異miRNA篩選條件為：閾值Foldchange上調(diào)2倍以上或下調(diào)超過0.5倍，P<0.05，進(jìn)行三組樣本間差異表達(dá)的miRNA的交互分析，最終篩選出3個(gè)miRNA在三組樣本均差異表達(dá)（圖1-5），其中，僅有miR-135a-5p的表達(dá)在癌旁-腺瘤-癌組織中呈逐漸增加趨勢（圖1-6）。圖1-4.組織樣本中差異表達(dá)的miRNA聚類分析熱圖（NOR：癌旁組織；ADE：腺瘤組織；CRC：結(jié)直腸癌組織；紅色表示基因表達(dá)上調(diào)，藍(lán)色表示基因表達(dá)下調(diào)）


本文編號(hào)：3424181