第一部分兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、鑒定及培養(yǎng)目的:從成年兔的四肢骨中分離提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),同時(shí)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。方法:通過(guò)Percoll密度梯度分離法提取并擴(kuò)增培養(yǎng)BMSCs,并通過(guò)流式細(xì)胞儀、成骨及成脂分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)BMSCs進(jìn)行鑒定。結(jié)果:BMSCs原代及傳代細(xì)胞狀態(tài)良好,流式細(xì)胞儀、成骨及成脂分化誘導(dǎo)鑒定表明分離提取的BMSCs具有BMSCs特有的特征,說(shuō)明分離提取成功。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)所分離提取的兔四肢骨內(nèi)的細(xì)胞鑒定為BMSCs,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。第二部分兔成骨細(xì)胞的提取、鑒定及培養(yǎng)目的:從成年兔的四肢骨膜中分離提取成骨細(xì)胞（osteoblasts,OB）,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),同時(shí)對(duì)OB進(jìn)行鑒定,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。方法:采用骨膜源性的方法提取OB并擴(kuò)增培養(yǎng)OB,通過(guò)吉薩姆染色、茜素紅染色、掃描電鏡對(duì)OB進(jìn)行鑒定。結(jié)果:OB原代及傳代細(xì)胞狀態(tài)良好,吉薩姆染色、茜素紅染色、掃描電鏡對(duì)OB細(xì)胞進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明分離提取的OB細(xì)胞具有相應(yīng)特性,說(shuō)明分... 

【文章來(lái)源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：213 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

-C顯示，P3代BMSCs培養(yǎng)24h，在顯微鏡下不同倍數(shù)的形態(tài)表現(xiàn)，其中A為4×，B為10×，C為20×

基于腎主骨生髓理論研究淫羊藿苷調(diào)控外泌體內(nèi)miR-122-5p對(duì)BMSCs成骨、遷移的作用及機(jī)制27圖2CD29、CD44、CD45三個(gè)細(xì)胞表型鑒定結(jié)果，其中，CD29和CD44呈陽(yáng)性，CD45呈陰性。2.2成骨分化誘導(dǎo)鑒定圖3經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，肉眼和微下觀(guān)。A為2w培養(yǎng)后BMSCs經(jīng)茜素紅染色，肉眼可見(jiàn)大量的被染成紅色的礦化結(jié)節(jié)出現(xiàn)。B、C、D為2w培養(yǎng)后不同數(shù)顯微鏡下所觀(guān)察到的大量礦化結(jié)節(jié)，其中B為4×，C為10×，D為20×。2.3成脂分化誘導(dǎo)鑒定

基于腎主骨生髓理論研究淫羊藿苷調(diào)控外泌體內(nèi)miR-122-5p對(duì)BMSCs成骨、遷移的作用及機(jī)制27圖2CD29、CD44、CD45三個(gè)細(xì)胞表型鑒定結(jié)果，其中，CD29和CD44呈陽(yáng)性，CD45呈陰性。2.2成骨分化誘導(dǎo)鑒定圖3經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，肉眼和微下觀(guān)。A為2w培養(yǎng)后BMSCs經(jīng)茜素紅染色，肉眼可見(jiàn)大量的被染成紅色的礦化結(jié)節(jié)出現(xiàn)。B、C、D為2w培養(yǎng)后不同數(shù)顯微鏡下所觀(guān)察到的大量礦化結(jié)節(jié)，其中B為4×，C為10×，D為20×。2.3成脂分化誘導(dǎo)鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂肪干細(xì)胞來(lái)源外泌體促進(jìn)大鼠皮瓣移植后血管新生的研究[J]. 胡玄,易陽(yáng)艷,朱元正,王朝慧,吳舒,張靜,王江文,聶佳瑩.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2019(12)
[2]基于“腎主骨生髓”辨治脊髓型頸椎病的經(jīng)驗(yàn)[J]. 陸洋,謝林.  上海中醫(yī)藥雜志. 2019(12)
[3]基于“益腎生髓”理論探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的病機(jī)及臨床治療[J]. 謝興文,李建國(guó),李寧,黃晉,蘇積亮,丁聚賢,宋學(xué)文.  中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志. 2019(11)
[4]補(bǔ)腎中藥促進(jìn)成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1成骨與分化研究進(jìn)展[J]. 朱庭辰,華臻,殷杰,王建偉.  安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(06)
[5]外泌體研究在中醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用及前景[J]. 壽崟,馬宇航,虎力,徐平,張偉波,高原,張必萌.  上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(06)
[6]活血通絡(luò)湯對(duì)SANFH兔造模過(guò)程中Notch2、DLL3以及PDGF表達(dá)的影響[J]. 王敏,蔡萬(wàn)翔,李濤,江蓉星.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2019(10)
[7]富集自體骨髓干細(xì)胞移植與髓芯減壓治療缺血性股骨頭壞死患者血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2、缺氧誘導(dǎo)因子1α、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的變化[J]. 張景義,海國(guó)棟,楊昊飛,范叢亮,嚴(yán)磊,張春雷,竇浚峰,馬海龍.  中國(guó)組織工程研究. 2020(01)
[8]外泌體分離技術(shù)及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 高方園,焦豐龍,張養(yǎng)軍,秦偉捷,錢(qián)小紅.  色譜. 2019(10)
[9]基于“脾主肉、腎主骨”理論探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的OPG/RANK/RANKL信號(hào)調(diào)控機(jī)制[J]. 石敏,趙繼榮,薛旭,馬同.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2019(09)
[10]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法改良與鑒定[J]. 黃可欣,于軍,石搏.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2019(14)



本文編號(hào)：3389956