抗體作為免疫檢測技術(shù)開發(fā)的關(guān)鍵原料,其質(zhì)量直接決定了相應(yīng)免疫檢測方法的性能。對于一些免疫原性低,甚至不具備免疫原性的目標檢測物,傳統(tǒng)的免疫方式較難以獲得高質(zhì)量的目標抗體。同時在免疫檢測過程中,抗原與抗體間的親和力對所建立的檢測方法靈敏度的影響也是不可忽視的。因此,開發(fā)高質(zhì)量檢測抗體及明確抗原與抗體間的親和力對免疫檢測方法靈敏度的影響十分有意義。本研究通過應(yīng)用細胞因子作為分子佐劑輔助免疫制備單克隆抗體,在DNA免疫和皮下免疫兩種免疫策略中證實了細胞因子作為分子佐劑對制備單克隆抗體的積極效果。進一步分析了高親和力抗體所識別的具體抗原表位信息,以及抗原表位氨基酸對抗原-抗體免疫反應(yīng)親和力的影響,明確了親和力在抗原與抗體結(jié)合與解離反應(yīng)過程中的重要作用。通過分析系列與檢測抗體具有不同親和力的競爭抗原對競爭法免疫檢測靈敏度的影響,明確了競爭抗原與檢測抗體的親和力和樣本中待檢抗原與檢測抗體的親和力差異對競爭法免疫檢測靈敏度的影響。最后,應(yīng)用制備得到的高親和力單克隆抗體開發(fā)了抗繆勒氏管激素（Anti-mullerian hormone,AMH）及和肽素（Copeptin,CPP）全自動化學發(fā)光檢測試劑... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：153 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

研究技術(shù)路線示意圖

華南理工大學博士學位論文26的條帶。同樣圖2-2（B）和（C）中也產(chǎn)生相應(yīng)的目的條帶，實驗結(jié)果與預(yù)期目的片段大小一致。經(jīng)測序比對，同樣證實插入目標片段完全正確；測序比對結(jié)果見附錄Ⅰ。2.4.2真核表達鑒定圖2-3Westernblot檢測細胞因子蛋白在293F細胞中的表達Figure2-3Analysisofcytokineproteinexpressionin293Fcellsbywesternblot通過試劑將pCAGGS-mFlt3L，pCAGGS-mGM-CSF和pCAGGS-mCCL20三種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293F細胞。在轉(zhuǎn)染后的第四、五、六天收集培養(yǎng)基和細胞。進行半純化處理后，通過SDS-PAGE和WB分析細胞培養(yǎng)基、天然及變性蛋白質(zhì)。結(jié)果如圖2-3所示，

華南理工大學博士學位論文42圖3-3腹水中抗體亞型鑒定Figure3-3Identificationofantibodysubtypesinascites圖3-4腹水效價評價結(jié)果Figure3-4Evaluationofascitetiters

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3350057