肝癌細胞系中糖鞘脂糖鏈譜及Globo-系列糖鞘脂合成通路的研究
發(fā)布時間：2021-08-15 05:12
糖鞘脂（Glycosphingolipid,GSL）是一類廣泛分布在脊椎動物細胞和體液中,由頭部糖鏈結構與尾部脂質(zhì)神經(jīng)酰胺連接組成的具有水脂雙親性的生物大分子。它是細胞黏附、細胞生長、細胞凋亡、細胞增殖、血管生成、炎癥反應、維持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)等諸多細胞活動的重要參與者,被認為是“細胞社會學”中重要的一類分子,因而單個細胞中的糖鞘脂組分是高度動態(tài)的,并與細胞的發(fā)育和細胞微環(huán)境密切相關。GSL的分析方法學是深入認識GSL生物學功能與研究GSL與疾病之間關系的基礎。肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一,在惡性腫瘤死亡順位中占第2位。在我國,90%的肝癌是肝細胞癌（Human Hepatocellular carcinoma,HCC）。本論文首先使用本實驗室已建立的凝集素芯片檢測GSL糖鏈技術,分析了人正常肝細胞系（HL-7702）和具有低轉移能力的HCC細胞系（MHCC97L）及具有高轉移能力的HCC細胞系（MHCC97H和HCCLM3）中GSL糖鏈結構的表達譜,發(fā)現(xiàn)與對照組（HL-7702細胞）相比,有27種凝集素（例如ECA、GSL-I和DSA）所特異識別的糖鏈結構在HCC細胞GSL中的表達有顯著差...
【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：166 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
糖鞘脂合成通路示意圖
—N-糖鏈、O-糖鏈、糖胺聚糖、GSL相關糖鏈、以及游離寡糖[91]（圖1-2）。圖1-2 糖組學的主要研究內(nèi)容Figure 1-2 Contents of glycomics在尋找疾病物標志物的探索歷程中，研究人員發(fā)現(xiàn)，與經(jīng)典的蛋白組學研究相比，與糖組學研究相關的糖綴合物作為疾病生物標志物具有更多的優(yōu)勢[91]。全方位的蛋白質(zhì)組學研究發(fā)現(xiàn)，即便有已知的特征明顯的生物標志物，它也很難被質(zhì)譜鑒定出來，因為其在生物體內(nèi)表達水平太低[92]。上述結論表明，與蛋白質(zhì)作為生物標志物相比，糖相關的生物標志物在生物體內(nèi)的含量更加豐富，因為結構相同的糖鏈可以附著于幾種不同的蛋白質(zhì)上，從而增加了糖鏈結構的總濃度并且簡化了糖相關生物標志物檢測。然而，具有特定糖鏈譜（在結構和聚糖附著位點方面）的糖蛋白也可能比單獨的糖鏈提供特異性更高的生物標志物。
PSA PSA 前列腺癌 診斷、病情監(jiān)測、復發(fā)檢測β-hCG β-hCG 婦科相關癌癥 病情監(jiān)測1.5 前期研究基礎在前期研究中，本實驗室成熟的凝集素芯片技術平臺在細胞、組織、血清、唾液等生物樣本的糖蛋白糖鏈譜的研究工作上取得了諸多進展[122-127]。因此，根據(jù)凝集素芯片技術的基礎，結合其分析各種生物樣本中糖蛋白糖鏈的特點，本實驗建立了以凝集素芯片技術分析 GSL 糖鏈譜方法[11,128]。該方法以鞘脂神經(jīng)酰胺脫酰基酶（sphingolipid ceramide N-deacylase，SCDase）對 GSL 進行初步處理（見圖 1-3），使GSL 分子在增強親水性的同時可以被熒光染料 Cy3 所標記，并使用神經(jīng)節(jié)苷脂 GM1a作為標準 GSL 樣品，對凝集素芯片檢測 GSL 糖鏈的、最佳上樣濃度、封閉緩沖液成分、孵育緩沖液成分，以及熒光標記后 Lyso-GM1a 的純化柱的選擇等實驗參數(shù)進行探索和確定，最終建立了一套可靠的使用凝集素芯片技術研究 GSL 糖鏈譜的技術。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]膀胱癌臨床血清樣本N-連接糖鏈的表達分析[J]. 王雯雯,孫承文,楊剛龍,關鋒. 生物學雜志. 2017(05)
[2]糖鞘脂分析技術及相關疾病研究進展[J]. 杜昊騏,于漢杰,賈麗苑,李錚. 生物化學與生物物理進展. 2016(01)
[3]糖類相關基因芯片的設計與制備[J]. 陳聞天,劉晨,于漢杰,顏樺,王岸瀟,陳超,李錚. 中國科學:化學. 2010(05)
[4]凝集素芯片技術檢測糖蛋白方法的建立及初步應用[J]. 簡強,于漢杰,陳超,李錚. 生物化學與生物物理進展. 2009(02)
[5]痘苗病毒寡核苷酸檢測芯片的設計及研制[J]. 王艷,馬文麗,毛向明,吳清華,李凌,王洪敏,肖維威,鄭文嶺. 第一軍醫(yī)大學學報. 2004(02)
博士論文
[1]肝癌發(fā)生發(fā)展中糖蛋白糖鏈合成通路和糖結合蛋白表達定位的研究[D]. 鐘耀剛.西北大學 2016
[2]肝細胞癌患者血清糖蛋白質(zhì)組及其糖鏈結構研究[D]. 楊剛龍.西北大學 2013
碩士論文
[1]基于凝集素芯片技術分析糖鞘脂糖鏈譜方法的建立與應用[D]. 杜昊騏.西北大學 2016
[2]肝纖維化小鼠模型糖相關基因表達與糖鏈結構整合分析[D]. 于漢杰.西北大學 2014
[3]糖類相關基因芯片的設計與制備[D]. 陳聞天.西北大學 2009
本文編號：3343922
【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：166 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
糖鞘脂合成通路示意圖
—N-糖鏈、O-糖鏈、糖胺聚糖、GSL相關糖鏈、以及游離寡糖[91]（圖1-2）。圖1-2 糖組學的主要研究內(nèi)容Figure 1-2 Contents of glycomics在尋找疾病物標志物的探索歷程中，研究人員發(fā)現(xiàn)，與經(jīng)典的蛋白組學研究相比，與糖組學研究相關的糖綴合物作為疾病生物標志物具有更多的優(yōu)勢[91]。全方位的蛋白質(zhì)組學研究發(fā)現(xiàn)，即便有已知的特征明顯的生物標志物，它也很難被質(zhì)譜鑒定出來，因為其在生物體內(nèi)表達水平太低[92]。上述結論表明，與蛋白質(zhì)作為生物標志物相比，糖相關的生物標志物在生物體內(nèi)的含量更加豐富，因為結構相同的糖鏈可以附著于幾種不同的蛋白質(zhì)上，從而增加了糖鏈結構的總濃度并且簡化了糖相關生物標志物檢測。然而，具有特定糖鏈譜（在結構和聚糖附著位點方面）的糖蛋白也可能比單獨的糖鏈提供特異性更高的生物標志物。
PSA PSA 前列腺癌 診斷、病情監(jiān)測、復發(fā)檢測β-hCG β-hCG 婦科相關癌癥 病情監(jiān)測1.5 前期研究基礎在前期研究中，本實驗室成熟的凝集素芯片技術平臺在細胞、組織、血清、唾液等生物樣本的糖蛋白糖鏈譜的研究工作上取得了諸多進展[122-127]。因此，根據(jù)凝集素芯片技術的基礎，結合其分析各種生物樣本中糖蛋白糖鏈的特點，本實驗建立了以凝集素芯片技術分析 GSL 糖鏈譜方法[11,128]。該方法以鞘脂神經(jīng)酰胺脫酰基酶（sphingolipid ceramide N-deacylase，SCDase）對 GSL 進行初步處理（見圖 1-3），使GSL 分子在增強親水性的同時可以被熒光染料 Cy3 所標記，并使用神經(jīng)節(jié)苷脂 GM1a作為標準 GSL 樣品，對凝集素芯片檢測 GSL 糖鏈的、最佳上樣濃度、封閉緩沖液成分、孵育緩沖液成分，以及熒光標記后 Lyso-GM1a 的純化柱的選擇等實驗參數(shù)進行探索和確定，最終建立了一套可靠的使用凝集素芯片技術研究 GSL 糖鏈譜的技術。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]膀胱癌臨床血清樣本N-連接糖鏈的表達分析[J]. 王雯雯,孫承文,楊剛龍,關鋒. 生物學雜志. 2017(05)
[2]糖鞘脂分析技術及相關疾病研究進展[J]. 杜昊騏,于漢杰,賈麗苑,李錚. 生物化學與生物物理進展. 2016(01)
[3]糖類相關基因芯片的設計與制備[J]. 陳聞天,劉晨,于漢杰,顏樺,王岸瀟,陳超,李錚. 中國科學:化學. 2010(05)
[4]凝集素芯片技術檢測糖蛋白方法的建立及初步應用[J]. 簡強,于漢杰,陳超,李錚. 生物化學與生物物理進展. 2009(02)
[5]痘苗病毒寡核苷酸檢測芯片的設計及研制[J]. 王艷,馬文麗,毛向明,吳清華,李凌,王洪敏,肖維威,鄭文嶺. 第一軍醫(yī)大學學報. 2004(02)
博士論文
[1]肝癌發(fā)生發(fā)展中糖蛋白糖鏈合成通路和糖結合蛋白表達定位的研究[D]. 鐘耀剛.西北大學 2016
[2]肝細胞癌患者血清糖蛋白質(zhì)組及其糖鏈結構研究[D]. 楊剛龍.西北大學 2013
碩士論文
[1]基于凝集素芯片技術分析糖鞘脂糖鏈譜方法的建立與應用[D]. 杜昊騏.西北大學 2016
[2]肝纖維化小鼠模型糖相關基因表達與糖鏈結構整合分析[D]. 于漢杰.西北大學 2014
[3]糖類相關基因芯片的設計與制備[D]. 陳聞天.西北大學 2009
本文編號：3343922
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/yxlbs/3343922.html
最近更新
教材專著
