第一部分USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)定位研究目的:探討USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)特點(diǎn)及定位。方法:1.通過免疫印跡技術(shù)了解USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育表達(dá)特點(diǎn)。2.通過免疫熒光技術(shù)了解USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)分布。結(jié)果:1.USP47在剛出生時(shí)即在小鼠海馬、皮層具有豐富的表達(dá),且其表達(dá)水平隨著發(fā)育成熟逐漸降低。2.免疫熒光顯示在人腦組織皮層和成年小鼠海馬與皮層腦組織中,USP47與神經(jīng)元標(biāo)記物NeuN存在共表達(dá),但不與星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP共表達(dá)。另外,USP47主要定位于神經(jīng)元胞漿,未在細(xì)胞核見到明顯定位。結(jié)論:USP47隨神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育成熟蛋白表達(dá)水平逐漸降低,且主要定位于神經(jīng)元胞漿,不在星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。第二部分USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能研究目的:探討USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能具有的功能。方法:1.構(gòu)建靶向敲減USP47表達(dá)的慢病毒,并轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,通過免疫印跡技術(shù)驗(yàn)證其敲減效率。2.采用Label-free定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)鑒定USP47相關(guān)靶點(diǎn)以及相互作用蛋白,并利用生物信息學(xué)軟件分析。3.采用細(xì)胞電生理技術(shù)分析USP47對(duì)神經(jīng)元... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

USP47在小鼠腦中的發(fā)育表達(dá)譜

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文29圖1.2免疫熒光染色分析USP47在TBI患者顳葉皮層組織中的表達(dá)Figure1.2ExpressionofUSP47inTBIhumanbraintissuebyimmunofluorescencestaining（A）在TBI患者術(shù)后的顳葉皮層組織中可見，USP47(紅色)與神經(jīng)元標(biāo)記物NeuN共定位，且USP47主要定位在神經(jīng)元周圍，而非細(xì)胞核中；（B）但USP47（紅色）并不與星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP（綠色）共定位。比例尺50μm，放大圖比例尺10μm。(A)USP47(red)isco-localizedwiththeneuronalmarkerNeuNinthetemporalcorticaltissueofTBIpatients,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,butnotinthenucleus;(B)WhileUSP47(red)doesnotco-localizewithastrocyteGFAP(green).Thescalebar=50μm(10μminzoomimages).同時(shí)，我們也觀察了USP47在小鼠腦組織中的表達(dá)情況，與人腦組織中的發(fā)現(xiàn)一致，在海馬CA1區(qū)，USP47主要與神經(jīng)元細(xì)胞共定位（圖1.3A），而與星形膠質(zhì)細(xì)胞無共定位（圖1.3C），并且USP47并不表達(dá)于細(xì)胞核，而主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)。USP47在皮層的定位與海馬一致（圖1.3B，D）。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文30圖1.3雙標(biāo)免疫熒光染色分析USP47在成年小鼠腦組織的表達(dá)Figure1.3ExpressionofUSP47inadultmousebrainbydual-labelledimmunofluorescencestaining（A-B）在小鼠的顳葉皮層和海馬組織中，USP47(紅色)與神經(jīng)元標(biāo)記物NeuN共定位，且USP47主要定位在神經(jīng)元周圍，并不定位于細(xì)胞核；（B）在小鼠的顳葉皮層和海馬組織中，USP47（紅色）并不與星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP（綠色）共定位。比例尺50μm，放大圖比例尺10μm。(A-B)Inthehippocampusandcortexofmice,USP47(red)isco-localizedwiththeneuronmarkerNeuN,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,notinthenucleus;(B)Inhippocampusandcortexofmouse，USP47(red)isnotcolocalizedwithastrocyteGFAP(green).


本文編號(hào)：3331966