研究目的有研究表明,機(jī)體長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下,將導(dǎo)致HPA軸功能亢進(jìn),糖皮質(zhì)激素分泌增多,最終損傷海馬神經(jīng)元。自噬是細(xì)胞受到外界刺激后產(chǎn)生的一種自我保護(hù)機(jī)制,這種機(jī)制對損傷的神經(jīng)元細(xì)胞至關(guān)重要,但自噬過度激活將導(dǎo)致其內(nèi)環(huán)境紊亂,使其功能受損甚至死亡。四逆散出自《傷寒論》,由柴胡、枳實(shí)、白芍、炙甘草四味藥物組成,具有疏肝解郁、調(diào)和肝脾之功。課題組前期實(shí)驗(yàn)憶證明四逆散可以改善慢性應(yīng)激大鼠抑郁樣行為。故本實(shí)驗(yàn)以原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞為研究對象,利用皮質(zhì)酮建立體外慢性應(yīng)激細(xì)胞模型,通過Western-blot、Real-timePCR、免疫熒光等現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù),從蛋白、基因等層面探討慢性應(yīng)激的致病機(jī)理以及中藥四逆散的作用機(jī)制,為中醫(yī)藥治療慢性應(yīng)激提供新的理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法1、根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞并在顯微鏡下觀察4h、24h、48h以及5-7天的生長情況,第7天采用免疫熒光法鑒定所取原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞。2、利用CCK-8法檢測不同時(shí)間段（6h、12h、24h、48h）和不同濃度皮質(zhì)酮（0μM、5μM、1OμM、50μM、100μM、200μM、300μM、400μM、600μM、800... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞提取過程??注：Ａ：剪開皮膚；Ｂ：暴露腦組織；Ｃ：剝離腦組織；Ｄ：暴露海馬組織；Ｅ：分離海馬組織??１６??

?廣州中醫(yī)藥大學(xué)２０１９級博士學(xué)位論文???Ａ?丨，??．Ｃ、?＇．丨）??圖二不同時(shí)間段顯微鏡下海馬神經(jīng)元細(xì)胞生長情況（Ｘ４００）??注：Ａ：?４ｈ?；?Ｂ：?２４ｈ；?Ｃ：?４８ｈ；?Ｄ：?５－７?天??２．２新生ＳＤ大鼠原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞免疫熒光鑒定??由圖三可知，Ｍａｐ－２是神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物，ＤＡＰＩ為細(xì)胞核的標(biāo)記物，兩圖重疊??后視野中基本是海馬神經(jīng)元細(xì)胞，純度在９０％以上。且發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細(xì)胞胞體飽滿，??突觸粗大形成網(wǎng)絡(luò)這與形態(tài)學(xué)圖片一致。??ＭＡＰ－２?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??圖三原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞免疫熒光鑒定（ｘｌＯＯ）??５討論??目前，體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是一個(gè)完整且不可分割的整體。從各自在實(shí)驗(yàn)的分工??上看，體外實(shí)驗(yàn)可以更為直觀、確切、有效的證明藥物對人或動物的療效；而體內(nèi)實(shí)??１８??

?廣州中醫(yī)藥大學(xué)２０１９級博士學(xué)位論文???Ａ?丨，??．Ｃ、?＇．丨）??圖二不同時(shí)間段顯微鏡下海馬神經(jīng)元細(xì)胞生長情況（Ｘ４００）??注：Ａ：?４ｈ?；?Ｂ：?２４ｈ；?Ｃ：?４８ｈ；?Ｄ：?５－７?天??２．２新生ＳＤ大鼠原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞免疫熒光鑒定??由圖三可知，Ｍａｐ－２是神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物，ＤＡＰＩ為細(xì)胞核的標(biāo)記物，兩圖重疊??后視野中基本是海馬神經(jīng)元細(xì)胞，純度在９０％以上。且發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細(xì)胞胞體飽滿，??突觸粗大形成網(wǎng)絡(luò)這與形態(tài)學(xué)圖片一致。??ＭＡＰ－２?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??圖三原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞免疫熒光鑒定（ｘｌＯＯ）??５討論??目前，體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是一個(gè)完整且不可分割的整體。從各自在實(shí)驗(yàn)的分工??上看，體外實(shí)驗(yàn)可以更為直觀、確切、有效的證明藥物對人或動物的療效；而體內(nèi)實(shí)??１８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3313814