本文關(guān)鍵詞：中藥安替可膠囊的物效基礎(chǔ)及配伍機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1研究背景由于環(huán)境的污染,人們生活方式的改變,惡性腫瘤已成為威脅人類生命和健康的一大殺手。近年來,關(guān)于抗腫瘤治療的研究一直在不斷發(fā)展和進(jìn)步,但依舊沒有取得突破性進(jìn)展,攻克惡性腫瘤仍然是人類面臨的一大科學(xué)難題。中醫(yī)中藥治療腫瘤因其整體性、多靶點(diǎn)、高效低毒的特征有著良好的效果,因此從祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中發(fā)掘具有顯著抗腫瘤作用的中藥及中藥復(fù)方,已成為國內(nèi)外抗腫瘤領(lǐng)域研究的一個重要思路。安替可膠囊由蟾皮和當(dāng)歸二味中藥材配伍組成,大量實(shí)踐表明,其對惡性腫瘤的臨床治療具有明顯的療效。然而,安替可膠囊與其它中藥復(fù)方一樣,存在著功效成分不清楚、作用機(jī)制不明確的缺陷,制約著安替可膠囊的廣泛應(yīng)用以及在國際上的認(rèn)可。因此,對安替可膠囊進(jìn)行全面系統(tǒng)的成分分析,闡明安替可膠囊發(fā)揮抗腫瘤作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制和組方原理,進(jìn)而從中篩選出成分清楚、靶點(diǎn)確切、配伍合理、療效顯著的化學(xué)成分組方,不僅對于其二次開發(fā)有著重要的意義,更是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化、國際化的迫切需要。本研究基于此目的,采用中藥指紋圖譜、血清藥物化學(xué)和藥代動力學(xué)等研究手段,檢測安替可膠囊中主要化學(xué)成分及其入血移行成分、安替可膠囊及其主成分抗腫瘤活性等,藉此闡明安替可膠囊組方的科學(xué)性和合理性。2方法2.1安替可膠囊的成分分析和質(zhì)量控制:利用高效液相色譜法建立安替可膠囊的指紋圖譜和多成分含量測定的分析方法,在此基礎(chǔ)上,對色譜圖中安替可膠囊的特征色譜峰進(jìn)行篩選,并結(jié)合已知對照品對特征色譜峰進(jìn)行化學(xué)鑒定和含量測定。色譜條件:Angilent Zorbax SB-C18色譜柱(4.6×250 mm,5μm),Angilent Zorbax SB-C184.6×12.5 mm保護(hù)住,柱溫:30℃;流動相采用乙腈(A)和0.1%冰醋酸-0.5%磷酸二氫鉀水溶液(磷酸調(diào)節(jié)p H=2.4)(B)梯度洗脫的方法,時間程序?yàn)?8%乙腈(0min),30%乙腈(20 min),40%乙腈(45 min),50%乙腈(70 min),40%乙腈(75 min),和8%乙腈(80 min),流速0.8 m L/min;進(jìn)樣量:20μL,檢測波長:296 nm。2.2安替可膠囊血中移行成分分析:利用甲醇加熱回流提取后濃縮,真空冷凍干燥器揮干其中水分的方法,制備安替可膠囊、蟾皮藥材和當(dāng)歸藥材提取物的凍干粉;采用血清藥物化學(xué)的研究手段和安替可膠囊指紋圖譜的色譜條件,分析安替可膠囊凍干粉經(jīng)灌胃給藥后大鼠血清的高效液相色譜圖,并與安替可膠囊凍干粉指紋圖譜、已知對照品色譜圖、空白血清色譜圖相比較,鑒定安替可膠囊凍干粉的入血成分。2.3蟾皮、當(dāng)歸及其配伍在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究:利用高效液相色譜技術(shù),建立同時測定大鼠血漿中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、遠(yuǎn)華蟾毒精和蟾毒靈4種成分血藥濃度的分析方法,色譜條件為Angilent Zorbax SB-C18色譜柱(4.6×250 mm,5μm),Angilent Zorbax SB-C18 4.6×12.5 mm保護(hù)住,流動相采用乙腈(A)和0.1%冰醋酸-0.5%磷酸二氫鉀水溶液(磷酸調(diào)節(jié)p H=2.4)(B)梯度洗脫的方法,時間程序?yàn)?10%乙腈(0 min),20%乙腈(6 min),40%乙腈(40 min),50%乙腈(50 min),30%乙腈(55 min),和10%乙腈(60 min),流速0.8 m L/min,柱溫:30℃,進(jìn)樣量:20μL,檢測波長:296 nm;由此分別繪制了4種成分分別在蟾皮單味、當(dāng)歸單味和蟾皮當(dāng)歸配伍給藥條件下的血藥濃度-時間曲線,比較三組之間4種血中移行成分的藥代動力學(xué)參數(shù)的差異,探討藥物配伍使用后對主要活性成分藥代動力學(xué)規(guī)律的影響。2.4蟾毒靈配伍阿魏酸體外抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究:利用MTT法,分析蟾毒靈和阿魏酸對人源性肝癌細(xì)胞株Hep G2、HCCLM3、Hep-3B、Bel-7404和QGY-7703的細(xì)胞毒作用并分別計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50);以Chou-Talalay聯(lián)合指數(shù)法分析蟾毒靈和阿魏酸配伍應(yīng)用對五種肝癌細(xì)胞株的藥物聯(lián)合作用指數(shù)(CI);利用流式細(xì)胞技術(shù)分析蟾毒靈、阿魏酸及其配伍使用,對肝癌細(xì)胞株Hep G2細(xì)胞周期分布的影響。3結(jié)果3.1安替可膠囊的成分分析和質(zhì)量控制:色譜圖中篩選出28個共有色譜峰為安替可膠囊的特征色譜峰,其中16個色譜峰經(jīng)過鑒定分別對應(yīng):阿魏酸、日蟾毒它靈、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、沙蟾毒精、遠(yuǎn)華蟾毒精、去乙�；付舅`、蟾毒它靈、華蟾毒它靈、蟾毒靈、阿魏酸松柏酯、華蟾酥毒基、洋川芎內(nèi)酯A、脂蟾毒配基、蒿本內(nèi)酯和正丁烯基苯酞。建立了同時測定安替可膠囊中16種成分含量的方法,該方法穩(wěn)定可行、精密度高、重復(fù)性好,各成分回收率在94.86~103.10%范圍內(nèi),適用于安替可膠囊的質(zhì)量控制。3.2安替可膠囊血中移行成分分析:大鼠灌胃給予安替可膠囊凍干粉后,從血清中鑒定出9個移行成分,并確證了其中4個成分的化學(xué)結(jié)構(gòu),分別歸屬于當(dāng)歸的阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I和蟾皮的遠(yuǎn)華蟾毒精、蟾毒靈;由此推測阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、遠(yuǎn)華蟾毒精和蟾毒靈4種成分可能為安替可膠囊發(fā)揮抗腫瘤藥效的主要活性成分。3.3蟾皮、當(dāng)歸及其配伍在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究:蟾皮配伍當(dāng)歸給藥與當(dāng)歸單味給藥兩組相比,阿魏酸和洋川芎內(nèi)酯I的藥物達(dá)峰濃度,藥時曲線下面積明顯提高(P㩳0.05),平均滯留時間,血漿清除率,表觀分布容積顯著降低(P㩳0.05);蟾皮配伍當(dāng)歸給藥與蟾皮單味給藥組相比,遠(yuǎn)華蟾毒精和蟾毒靈的藥物達(dá)峰濃度,藥時曲線下面積明顯減小(P㩳0.05),而平均滯留時間,血漿清除率,表觀分布容積顯著升高(P㩳0.05);提示蟾皮和當(dāng)歸配伍給藥能夠有效促進(jìn)阿魏酸和洋川芎內(nèi)酯I在大鼠血中的吸收,降低藥物血漿清除率,提高生物利用度,同時能夠有效延長遠(yuǎn)華蟾毒精和蟾毒靈的作用時間并促進(jìn)藥物向組織分布。3.4蟾毒靈配伍阿魏酸體外抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究:MTT結(jié)果顯示,蟾毒靈細(xì)胞毒性顯著并呈明顯的量-效依賴關(guān)系,對五種肝癌細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度分別為57.60、83.13、74.16、27.47、52.31μM;阿魏酸細(xì)胞毒性較弱,其對五種肝癌細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度分別為1.98、1.89、3.20、0.97、1.16 m M;Chou-Talalay法分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),蟾毒靈和阿魏酸配伍作用于五種肝癌細(xì)胞株,在大多數(shù)合用情況下聯(lián)合用藥指數(shù)CI大于1.0,兩藥聯(lián)用時互相拮抗;流式細(xì)胞技術(shù)分析結(jié)果顯示,蟾毒靈單用能夠?qū)ep G2細(xì)胞阻滯于G2/M期(P㩳0.05),阿魏酸對Hep G2細(xì)胞分裂G1/G0期和S期無明顯影響,兩藥配伍使用,其G2/M期阻滯作用比蟾毒靈單用更強(qiáng)(P㩳0.05)。4結(jié)論首次建立安替可膠囊HPLC指紋圖譜,確證其中28個共有色譜峰并歸屬其中16種成分;利用血清藥物化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)安替可膠囊9個入血移行成分,并歸屬了4個成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)即來自于當(dāng)歸的阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I和來自蟾皮的遠(yuǎn)華蟾毒精、蟾毒靈;揭示了這4種成分的體內(nèi)藥代動力學(xué)特征;同時探討了蟾毒靈和阿魏酸配伍對腫瘤細(xì)胞的聯(lián)合用藥效果和細(xì)胞周期分布影響,為進(jìn)一步闡明組方的科學(xué)性合理性提供了思路,也為開發(fā)創(chuàng)制安替可膠囊的分子中藥提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：安替可膠囊 蟾皮 當(dāng)歸 指紋圖譜 血清藥物化學(xué) 藥代動力學(xué) 抗腫瘤 物效基礎(chǔ) 配伍機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-38
• 1 安替可膠囊的研究進(jìn)展18-21
• 2 安替可膠囊及其配伍的抗腫瘤物效成分研究進(jìn)展21-31
• 3 中藥復(fù)方研究思路的新進(jìn)展31-37
• 4 結(jié)合中藥復(fù)方研究思路對安替可膠囊進(jìn)行二次開發(fā)37-38
• 第一部分 安替可膠囊的成分分析及質(zhì)量控制38-61
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-58
• 4 討論58-59
• 5 小結(jié)59-61
• 第二部分 安替可膠囊血中移行成分分析61-69
• 實(shí)驗(yàn)一 安替可膠囊及其組分提取物凍干粉的制備61-63
• 1 實(shí)驗(yàn)材料61-62
• 2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果62-63
• 實(shí)驗(yàn)二 血清藥物化學(xué)法分析安替可膠囊的入血成分63-66
• 1 實(shí)驗(yàn)材料63-65
• 2 實(shí)驗(yàn)方法65-66
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論66-68
• 小結(jié)68-69
• 第三部分 蟾皮、當(dāng)歸及其配伍在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究69-82
• 1 實(shí)驗(yàn)材料69-70
• 2 實(shí)驗(yàn)方法70-72
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果72-78
• 4 討論78-81
• 5 小結(jié)81-82
• 第四部分 蟾毒靈配伍阿魏酸體外抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究82-90
• 1 實(shí)驗(yàn)材料82-83
• 2 實(shí)驗(yàn)方法83-85
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果85-88
• 4 討論88-90
• 總結(jié)90-92
• 參考文獻(xiàn)92-108
• 個人簡歷和研究成果108-110
• 致謝110

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳燕燕;尚明英;蔡少青;;當(dāng)歸的化學(xué)成分指紋圖譜[J];藥學(xué)學(xué)報;2008年07期

  本文關(guān)鍵詞：中藥安替可膠囊的物效基礎(chǔ)及配伍機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：330518