目的:胃癌（Gastric cancer,GC）是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致當(dāng)前胃癌治療失敗的主要原因。近年來的研究表明,環(huán)狀RNA（circRNA）在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著十分重要的表觀遺傳學(xué)調(diào)控作用。然而,circRNA在GC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制尚未完全闡明。本課題通過circRNA表達(dá)譜芯片鑒定、RT-qPCR方法驗(yàn)證胃癌組織及血清外泌體中差異表達(dá)的circRNA;通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究circRNA對胃癌增殖、侵襲和遷移等細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;并進(jìn)一步闡明circRNA在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制,為基于circRNA的胃癌靶向治療提供新的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外,胃癌的準(zhǔn)確分期是提高腫瘤治療效果的重要前提,貫穿于臨床診療全程,但是當(dāng)前TNM分期仍存在缺陷。因此,在最后部分,本課題回歸臨床,揭示circRNA對胃癌患者預(yù)后和TNM分期系統(tǒng)的影響,為胃癌個體化治療和隨訪提供新的思路和視角。方法:1.采用RNA表達(dá)譜芯片鑒定胃癌組織及其對應(yīng)癌旁組織,胃癌患者術(shù)前血清及健康志愿者血清中共同差異表達(dá)的circRNA。2.采用RT-qPCR方法驗(yàn)證,根據(jù)RT... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

circRNA生物學(xué)功能模式圖(引自：AmJCancerRes.20181;8(10):1919-1932.)

223)VolcanoPlot火山圖分析根據(jù)表達(dá)譜芯片篩選出差異表達(dá)的circRNA，繪制散點(diǎn)圖(圖1.2D)，紅色區(qū)域代表的circRNA差異倍數(shù)超過1.2倍，且有差異統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。圖1.2A.血清外泌體電鏡下形態(tài)；B.Westernblot檢測胃癌病人術(shù)前（左）及健康志愿者（右）血清外泌體標(biāo)志物CD9和CD81；C.胃癌病人術(shù)前及健康志愿者血清外泌體circRNA微陣列（ArraystarHumancircRNAArrayv2）分析，得到的circRNA差異表達(dá)譜（差異倍數(shù)差異≥1.2，p<0.05；T1-5表示5例胃癌病人術(shù)前血清樣本，C1-5表示健

362.3結(jié)果2.3.1circ-RanGAP1（hsa_circ_0063526）的特征分析通過circBase數(shù)據(jù)庫，我們發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0063526位于染色體22q13.2，由宿主基因RanGAP1的第1、8、10號外顯子及第1、2、4、5、6號內(nèi)含子環(huán)化形成，因此我們將其命名為circ-RanGAP1（圖2.1A）。接下來，我們通過熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsituhybridization,FISH)（圖2.1B），發(fā)現(xiàn)circ-RanGAP1主要定位于細(xì)胞質(zhì)；以及通過細(xì)胞核質(zhì)分離，抽提RNA，RT-qPCR檢測circ-RanGAP1的表達(dá)情況，同樣發(fā)現(xiàn)circ-RanGAP1主要分布在細(xì)胞質(zhì)（圖2.1C）。隨后，我們采用放線菌素D處理細(xì)胞抑制RNA轉(zhuǎn)錄，然后在不同時間點(diǎn)提取細(xì)胞RNA，RT-qPCR檢測circ-RanGAP1的表達(dá)情況，我們發(fā)現(xiàn)circ-RanGAP1在24小時內(nèi)表達(dá)量變化不明顯，說明其具有較高的穩(wěn)定性（圖2.1D）,同時我們利用核糖核酸酶（RNase）處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其不能被降解（圖2.1E）。上述結(jié)果均提示，circ-RanGAP1符合環(huán)狀RNA的特性。圖2.1A.circ-RanGAP1的在circBase數(shù)據(jù)庫中的基本信息；B.FISH實(shí)驗(yàn)顯示circ-RanGAP1定位于細(xì)胞質(zhì)；C.核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)circ-RanGAP1定位于細(xì)胞質(zhì)；D.放線菌素D實(shí)驗(yàn)檢測circ-RanGAP1的穩(wěn)定性；E.核糖核酸酶（RNase）處理后，circ-RanGAP1的穩(wěn)定性分析。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Circular RNA hsacirc0000745 may serve as a diagnostic marker for gastric cancer[J]. Mei Huang,Yi-Ren He,Li-Chuan Liang,Qiang Huang,Zhi-Qiang Zhu.  World Journal of Gastroenterology. 2017(34)
[2]Incidence and mortality of gastric cancer in China[J]. Ling Yang,National Office for Cancer Prevention and Control,Beijing 100021,China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(01)



本文編號：3302618