目的第一部分:探討不同濃度梯度順鉑（Cisplatin,DDP）溶液培養(yǎng)下的膀胱癌細(xì)胞凋亡情況和miR-141表達(dá)含量的差異性及分析。第二部分:探討順鉑通過(guò)下調(diào)miR-141表達(dá)促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制,從miR-141與沉默信息調(diào)節(jié)因子1（Sirt1）調(diào)控關(guān)系的角度進(jìn)行闡述,以期為臨床檢測(cè)及治療膀胱癌提供幫助。方法第一部分:選擇膀胱癌T24細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),選取第三代生長(zhǎng)細(xì)胞作為研究對(duì)象;將其分成以下幾組:Control組（添加等量PBS緩沖溶液）;H-DDP組（高劑量組,50μmol/L DDP培養(yǎng)24小時(shí)）;M-DDP組（中劑量組,20μmol/L DDP培養(yǎng)24小時(shí)）;L-DDP組（低劑量組,10μmol/L DDP培養(yǎng)24小時(shí)）;利用實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)（RT-PCR）檢測(cè)上述各組細(xì)胞miR-141的表達(dá)水平;MTT檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況;Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;DNA倍體檢測(cè)細(xì)胞周期;線粒體跨膜電位檢測(cè)線粒體電位;透射電鏡檢測(cè)細(xì)胞器變化,并做出相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析。第二部分:在第一部分分組的基礎(chǔ)上,Control組（等量PBS）,H... 

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RT-PCR檢測(cè)各組膀胱癌T24細(xì)胞miR-141含量分析

圖 1-2：各組膀胱癌 T24 細(xì)胞 miR-141 溶解曲線分析。表 1-1 miR-141 在各組膀胱癌 T24 細(xì)胞中的表達(dá)( x±s)組別 2-ΔΔCtt 值 P 值Control 0.97±0.06 15.564 0.004L-DDPM-DDPH-DDP0.33±0.09*0.28±0.06*#0.17±0.02*#$13.22410.56310.4450.0150.0230.020備注：*表示 H-DDP 組、M-DDP 組、L-DDP 組與 Control 組比較，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；#表示 H-DDP、M-DDP 與 L-DDP 組比較，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；$表示H-DDP 組與 M-DDP 組相比，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖 1-3：miR-141 在各組膀胱癌 T24 細(xì)胞中的表達(dá)分析1.2.2 HE 染色分析各組 T24 膀胱癌細(xì)胞 HE 染色結(jié)果如圖 1-4 所示。對(duì)照組細(xì)胞整體上數(shù)量較多，密度較大，細(xì)胞周圍的血管以及絨毛數(shù)量較多，膀胱癌細(xì)胞的凋亡趨勢(shì)較弱。在順鉑充分干預(yù)下，細(xì)胞的形狀逐漸不規(guī)則，整體密度低，細(xì)胞空隙較大，充斥較多組織液，細(xì)胞多是不規(guī)則的多邊形。隨著順鉑濃度的增加，細(xì)胞的密度逐漸降低，細(xì)胞周圍的空隙逐漸增大，由規(guī)則的立方形逐漸變成不規(guī)則的多邊形，提示細(xì)胞凋亡增多，隨著順鉑濃度的增加，膀胱癌 T24 的凋亡趨勢(shì)逐漸明顯，細(xì)胞破壞的程度逐漸嚴(yán)重，提示順鉑對(duì)膀胱癌細(xì)胞具有一定的干預(yù)作用。

【參考文獻(xiàn)】：
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