肝臟具有重要的生理功能,近年來的研究顯示多種細(xì)胞因子參與病毒性肝炎、酒精性肝損傷、脂肪肝、肝細(xì)胞肝癌等慢性肝病的發(fā)病過程。其重要發(fā)生過程是:在損傷因子作用下,激活肝臟Kupffer細(xì)胞（KC）釋放大量細(xì)胞因子,通過調(diào)控肝星狀細(xì)胞（HSC）中相應(yīng)信號通路,促進(jìn)HSC細(xì)胞的活化增殖,合成以膠原為主的ECM過度沉積于肝臟,引起肝臟發(fā)生病理改變,發(fā)展成肝硬化,甚至肝癌。研究發(fā)現(xiàn)HSC在肝臟的炎癥反應(yīng)過程中可能會發(fā)揮重要的作用。在多種因素如病毒感染藥物作用等導(dǎo)致肝損傷后,HSC等肝臟細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子,如IL-1,IL-6及IL-10等。HSC膜上特異性受體可以識別這些細(xì)胞因子,進(jìn)一步將信號通過細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路傳遞到核內(nèi),激活核內(nèi)存在的某些關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子,最終達(dá)到促進(jìn)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的目的。在此過程中,激活后的HSC可產(chǎn)生大量的促炎因子和促纖維化因子并通過旁分泌和自分泌作用,進(jìn)一步刺激未激活轉(zhuǎn)化的HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞,使肝纖維化形成正反饋。炎癥反應(yīng)作為肝纖維化形成和啟動因素,是促其形成肝纖維的原因,減輕炎癥有助于阻止肝纖維化的發(fā)生。而HSC作為肝纖維化主要的效應(yīng)細(xì)胞,其在炎癥反... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮寫詞對照
中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗取材
    2.2 實驗動物
    2.3 藥品與試劑
    2.4 儀器與設(shè)備
    2.5 溶液和試劑的配制
3 實驗方法
    3.1 質(zhì)粒的制備和轉(zhuǎn)化
    3.2 動物造模、分組
    3.3 肝組織病理學(xué)染色
    3.4 免疫組織化學(xué)檢測
    3.5. 免疫熒光制片
    3.6 免疫熒光雙染
    3.7 免疫沉淀
    3.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.8.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.8.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.8.3 細(xì)胞傳代
        3.8.4 細(xì)胞計數(shù)
        3.8.5 凍存細(xì)胞
    3.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.10 PDTC處理細(xì)胞
    3.11 RT-PCR
    3.12 實時熒光定量PCR
    3.13 MTT比色法測細(xì)胞增殖
    3.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡
    3.15 Western blot
    3.16 ELISA法檢測IL-1β 和IL-6 的釋放水平
    3.17 雙熒光素酶報告試驗
    3.18 統(tǒng)計學(xué)分析
4.實驗結(jié)果
    4.1 NLRC5在纖維化組織中的表達(dá)
        4.1.1 病理組織學(xué)檢測
        4.1.2 NLRC5、α-SMA在人肝纖維化組織中的表達(dá)
        4.1.3 在肝纖維化組織中NLRC5、α-SMA共定位于活化的肝星狀細(xì)胞
    4.2 過表達(dá)和沉默NLRC5生物學(xué)效果檢測
    4.3 NLRC5對LX-2 細(xì)胞活化及炎癥因子分泌的影響
        4.3.1NLRC5對LX-2 細(xì)胞活化的調(diào)控作用
            4.3.1.1 TGF-β1 對LX-2 細(xì)胞中NLRC5、α-SMA的表達(dá)影響
        4.3.2 NLRC5對LX-2 細(xì)胞中炎癥因子分泌的調(diào)控
    4.4 NLRC5對LX-2 細(xì)胞增殖、周期及凋亡的的影響
        4.4.1 MTT法檢測沉默NLRC5對TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞增殖的影響
        4.4.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默NLRC5對TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞周期及凋亡的影響
        4.4.3 沉默NLRC5對TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞中凋亡蛋白表達(dá)的影響
    4.5 NLRC5對NF-κB與TGF-β1/Smad信號通路的作用研究
        4.5.1 NLRC5對TGF-β1 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中NF-κB信號通路的調(diào)控作用
        4.5.2 NLRC5對TNF-α 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中NF-κB信號通路的調(diào)控作用
        4.5.3 NLRC5對TGF-β1 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中TGF-β1/Smad信號通路的調(diào)控作用
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    References



本文編號：3277000