第一部分大鼠腦出血后腦組織中EPAC1、EPAC2的蛋白水平變化目的探討大鼠腦出血（intracerebral hemorrhage,ICH）后 EPAC（exchange protein directly activated by cAMP）兩個亞型EAPC1和EPAC2蛋白水平變化情況。方法1.實驗動物分組:隨機分配54只SD大鼠（成年,雄性）到9個組中,包括:正常組,假手術組和7個ICH組,ICH組分為ICH后3小時,6小時,12小時,24小時,48小時,72小時和7天這七個亞組。2.體內ICH模型的建立:通過立體定向儀將動脈血（抽取大鼠自體心臟動脈血）注入大鼠尾狀核。假手術組中,僅用注射針穿刺腦組織形成穿刺隧道但不注血。3.體外ICH模型的建立和分組:在神經元細胞中加入OxyHb（10μM）建立ICH體外模型。一共分為六組,分別是正常組和加入OxyHb后3小時組、6小時組、12小時組、24小時組、48小時組。4.檢測方法及指標:使用Westem-blot方法檢測體內和體外ICH模型中,各組蛋白樣本中EPAC1和EPAC2的蛋白水平變化。通過對大腦組織的石蠟切片進行免疫熒光染色,... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３：大鼠ＩＣＨ模型大體標本??

第一部分?ＥＰＡＣ蛋白介導的細胞凋亡在大鼠腦出血后繼發(fā)性腦損傷中的作用及其機制研究??１?參令?ＩＣＨ?－?＾??．．???１?１?Ｒ??Ｌ．ｐｃ？Ｕｉｌ??－Ｔｕｂｕｌｉｎ?ｍｍｍ＾?ｗ？ｉＢＰ?ＤＯ??Ｂ?４＊??＃＃?＃＃??＾?３．?￣?￣??ｌｉ?＊＊ｉ?＾??ｉＬｉｉ??圖４：在體內模型中，ＩＣＨ后各個時間點腦組織內ＥＰＡＣ２蛋白水平變化情況。??Ａ：典型的ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ條帶圖，（３－Ｔｕｂｕｌｉｎ是內參。Ｂ：對ＥＰＡＣ２蛋白水平進行量化??分析的統(tǒng)計圖，＊＊ｐ?＜?０．０１?ｖｓ．?ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＃＃ｐ?＜?０．０１，６－ｈ?ｖｓ．?３－?ａｎｄ?１２－ｈ?ｇｒｏｕｐｓ??（ｎ＝６）??４．４在體內模型中，ＩＣＨ后各個時間點腦組織中ＥＡＰＣ１總蛋白和ＥＰＡＣ１磷酸化蛋??白水平的變化（見圖５）：??與Ｓｈａｍ組相比，各個時間點的ＥＰＡＣ１總蛋白并沒有變化，但是通過免疫共沉??淀檢測ＥＰＡＣ１磷酸化蛋白水平變化結果顯示：與Ｓｈａｍ組相比，在ＩＣＨ后，ＥＰＡＣ１??１６??

低谷（ｐ＜?０．０１）。??Ａ?＾?１ＣＨ?（ｈ）??〇?ＩｇＧ?＾?３?６?１２?２４?４８?ＫＤ??￡?ｐ－Ｓｅｒ?１?〇４??■■＝?ＥＰＡＣ１?＿?ＨＩ?醒４４?＿?Ｍ?１０４??ＣＯ??門?ｉ￣￣ｉ?ｅ３ｖｙ?Ｃ?ｈｄｉ?ｉ?ｒ＊ｉ?５０??ＥＰＡＣ１?？？？?ｍｍ?？ｍ?＾＼０４??ＷＣＬ??ｐ－Ｔｕｂｕ?Ｉ?ｉｎ?５５??ｌｂ?ｉｌｌ??＾?３?６?１２?２４?４８?Ｅ?０＾?３?６?１２?２４??令?ＩＣＨ?（ｈ）?伯＃?ＩＣＨ?（ｈ）??圖５：在體內模型中，ＩＣＨ后各個時間點腦組織內ＥＡＰＣｌ總蛋白和ＥＰＡＣｌ磷酸??化蛋白水平變化情況。Ａ：典型的ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ條帶圖，ｐ－Ｔｕｂｕｌｉｎ是內參。Ｂ：對ＥＰＡＣ１??憐酸化蛋白水平進行量化分析統(tǒng)計圖，＊＊ｐ?＜?０．０１?ｖｓ．?ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＊ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．??ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＜?０？０１，６－ｈ?ｖｓ．?３－ｈ?ａｎｄ?１２－ｈ?ｇｒｏｕｐｓ?（ｎ＝６）。Ｃ：對?ＥＰＡＣ?１?總蛋??白水平進行量化分析，各個時間點與ＩｇＧ組相比，無統(tǒng)計學意義。??４．５在體內模型中，ＩＣＨ后ＥＰＡＣ２石蠟切片免疫熒光染色結果：??通過免疫熒光染色技術探測腦組織神經元中ＥＰＡＣ２的蛋白水平，結果提示??ＥＰＡＣ２在正常組和假手術組中神經元細胞中ＥＰＡＣ２的蛋白水平都很低，但在ＩＣＨ后??６ｈＥＰＡＣ２蛋白水平明顯升高，這和ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｏｌｔ的結果是一致的（見圖６）。??１７??


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