第一部分大鼠孕期維生素A缺乏損傷仔鼠腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和胃腸運動目的:研究孕期母體維生素A缺乏（VAD）對仔鼠腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及胃腸運動功能的影響,并探討其可能涉及的信號通路。方法:選取3周齡SD雌鼠,分別構(gòu)建VA正常（VAN,>1.05μmol/L）、VA缺乏（VAD,<0.7μmol/L）以及孕早期VA補充（VAS,孕鼠E3.5d開始灌胃補充VA一周）動物模型;高效液相色譜法（HPLC）檢測血清VA水平;免疫熒光染色觀察三組仔鼠E12.5d和E14.5d胚腸中腸神經(jīng)元TUJ1遷移情況;Western blot方法檢測三組仔鼠E14.5d胎腸中視黃酸核受體（RARs）、腸神經(jīng)元（PGP9.5）、腸膠質(zhì)細胞（S100β）及腸神經(jīng)系統(tǒng)（enteric nervous system,ENS）發(fā)育過程中關(guān)鍵基因SOX10和Ret的蛋白表達水平;待三組仔鼠成長至8w齡時,觀察大便性狀,檢測大便含水量、總的胃腸傳輸時間和結(jié)腸蠕動力以評估胃腸功能;同時,還用Western blot檢結(jié)腸組織中膽堿能（ChAT）和氮能（nNOS）腸神經(jīng)元表達情況;分離結(jié)腸肌間神經(jīng)叢,免疫熒光染色ChAT

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

RA代謝及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模式圖

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文20基于以上所述，本研究依據(jù)當前國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及課題組前期研究基礎(chǔ)，提出以下的科學(xué)假設(shè)（圖2）：母孕期VAD降低子代RARs的表達，可能通過影響SOX10的表達，損傷子代ENS發(fā)育，出現(xiàn)GI功能異常；而母孕早期補充VA能減輕孕期VAD對子代ENS的損害。圖2課題假設(shè)示意圖Figure2Aschematicdiagramofresearchhypothesis.針對以上的科學(xué)假設(shè)，我們設(shè)計了相關(guān)的體內(nèi)外實驗。首先，我們構(gòu)建母孕期VA正常、VA缺乏、VA補充的SD大鼠模型，在胚胎期12.5天和14.5天檢測子代鼠RARs、SOX10、Ret的表達情況，并且評估ENS的發(fā)育情況；在仔鼠成年期檢測胃腸功能及亞型腸神經(jīng)元發(fā)育情況；然后，在E14.5d胎鼠中提取并培養(yǎng)原代腸神經(jīng)球，RA處理腸神經(jīng)球，檢測其對增殖及分化的影響；最后，利用siRNA和過表達技術(shù)干預(yù)腸神經(jīng)球中RARβ基因的表達，初步探討RA影響ENS發(fā)育可能涉及的分子機制。技術(shù)路線圖：第一部分大鼠孕期VAD對仔鼠ENS發(fā)育及胃腸動力功能的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文21圖3技術(shù)路線一Figure3Technicalrouteone.第二部分通過體外培養(yǎng)腸神經(jīng)球，進一步探討RA對腸神經(jīng)干祖細胞增殖和亞型腸神經(jīng)元分化的影響及其可能涉及的分子機制圖4技術(shù)路線二Figure4Technicalroutetwo.


本文編號：3266541