目的:醛固酮參與了腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展,但醛固酮介導(dǎo)糖尿病小鼠腎臟損害的機(jī)制尚不完全清楚。方法:醛固酮和/或鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑（MRA）依普利酮干預(yù)糖尿病小鼠（db/db）或近端小管上皮細(xì)胞（PTECs）:檢測(cè)腎臟/PTECs的損傷;提取來源于PTECs的細(xì)胞外囊泡（EVs）干預(yù)成纖維細(xì)胞,并對(duì)EVs做miRNA芯片分析。提取腎臟來源的EVs干預(yù)正常小鼠,檢測(cè)腎臟的損傷。檢測(cè)糖尿病伴或者不伴糖尿病腎�。―KD）患者血清和腎臟樣品miR-196b-5p表達(dá)。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)醛固酮能促進(jìn)db/db糖尿病小鼠蛋白尿和腎小管間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的積累,而依普利酮能減輕醛固酮的不良反應(yīng)。然而,PTECs和成纖維細(xì)胞的共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),當(dāng)PTECs衍生的細(xì)胞外囊泡被成纖維細(xì)胞吸收時(shí),ECM的產(chǎn)生顯著增加。此外,經(jīng)醛固酮處理的腎皮質(zhì)注射EVs的C57BL/6小鼠顯示ECM積累增加。我們分析了PTECs分泌的EVs的功能,鑒定出RNAs與EVs誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞功能障礙有關(guān)。進(jìn)一步的miRNA芯片分析顯示,在醛固酮刺激的PTECs來源的EVs中,miR-196b-5p是升高最顯著的miRNA。成纖維細(xì)胞中m... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

醛固酮組血BUN及UACR水平明顯高于對(duì)照組，復(fù)合依普利酮可以明顯緩解腎臟功能的損傷

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文圖2血糖、體重、血鉀水平和血壓水平在各組小鼠之間無差異。Figure2Bloodglucose,bodyweight,potassiumandbloodpressuredidnotdifferbetweenthegroupsdb/db小鼠予皮下微量泵泵入醛固酮（0.4mg/kg/d）和/或通過飲水給予依普利酮（100mg/kg/d），干預(yù)6周。A-D檢測(cè)小鼠血糖、體重、血鉀和血壓變化。Aldo：醛固酮；Epl：依普利酮。N=10。db/dbmiceweregivensubcutaneousmicropumpsofaldosterone(0.4mg/kg/d)and/oreprazone(100mg/kg/d)bydrinkingwaterfor6weeks.Changesinbloodglucose,weight,potassiumandbloodpressureweremeasuredwithA-D.Aldo:aldosterone;Epl:eplerenone.N=10.3.1.3各組小鼠腎臟HE染色、PAS染色、天狼星紅染色和Massom染色的檢測(cè)建模完成后，我們?nèi)∧I臟組織固定后制備石蠟塊，用于各組小鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)的檢測(cè)，以觀察觀察醛固酮的腎臟損害作用。HE染色發(fā)現(xiàn)Aldo組腎臟組織腎小管間質(zhì)部分細(xì)胞腫脹、間質(zhì)膨脹、刷狀緣丟失、空泡變性、壞死小管、鑄型形成和脫落等情況明顯比對(duì)照組嚴(yán)重，復(fù)合依普利酮后損傷明顯好轉(zhuǎn)。PAS染色液可以看到Aldo組腎臟組織糖原沉積水平明顯高于對(duì)照組，而給予依普利酮后可以明顯緩解（如圖3）。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文圖3HE染色及PAS染色觀察醛固酮及依普利酮對(duì)db/db小鼠腎臟病理改變的影響（200X）Figure3HEstainingandPASstainingtoobservetheeffectofaldosteroneandeplerenoneonrenalpathologicalchangesindb/dbmice(200X)進(jìn)一步通過天狼星紅染色及Masson染色觀察腎臟纖維化的情況。首先，通過天狼星紅染色我們發(fā)現(xiàn)Aldo組腎臟膠原纖維沉積程度明顯高于對(duì)照組，而復(fù)合了依普利酮后，膠原纖維沉積情況明顯緩解。其次，通過Masson染色評(píng)估各組小鼠腎組織中膠原堆積的情況，對(duì)比發(fā)現(xiàn)Aldo組膠原沉積明顯增加，復(fù)合依普利酮后，膠原堆積的程度明顯緩解（如圖4）。


本文編號(hào)：3255263