目的:根據(jù)中醫(yī)“異病同治”理論,將邵長(zhǎng)榮教授矽肺治療經(jīng)驗(yàn)應(yīng)用于特發(fā)性肺纖維化,由治療矽肺有效經(jīng)驗(yàn)方化裁而成化纖煎應(yīng)用于IPF治療。采用隨機(jī)、對(duì)照臨床研究,評(píng)價(jià)化纖煎治療氣陰兩虛、痰瘀互結(jié)型IPF的臨床療效。進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究,觀察化纖煎凍干粉溶液對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞增殖、活化、分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響,并觀察其對(duì)TNF-α細(xì)胞因子和NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控,探討化纖煎治療IPF的作用機(jī)制。方法:臨床實(shí)驗(yàn):采用隨機(jī)、對(duì)照臨床研究,納入符合入組標(biāo)準(zhǔn)IPF患者64例,治療組33例,對(duì)照組31例,兩組均采用N乙酰半胱氨酸基礎(chǔ)治療,治療組同時(shí)予以中藥化纖煎干預(yù),觀察比較兩組治療前后中醫(yī)證候積分,肺功能FVC、TLC、DLCO,6min步行距離,Borg呼吸困難評(píng)分,SGRQ生活質(zhì)量評(píng)分,血清細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β指標(biāo)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):采用TGF-β1誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5增殖、活化,化纖煎凍干粉溶液進(jìn)行干預(yù),CCK8法檢測(cè)化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞增殖的影響。q RT-PCR法檢測(cè)α-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原m RNA,觀察成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,分泌細(xì)胞外基質(zhì)情況。q RT... 

【文章來(lái)源】：上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞毒性檢測(cè)（48H）

上海中醫(yī)藥大學(xué)2019屆博士研究生學(xué)位論文29將MRC-5細(xì)胞與濃度分別為200ug/ml，100ug/ml，50ug/ml，25ug/ml，12.5ug/ml，6.25ug/ml，3.125ug/ml，0ug/ml化纖煎凍干粉溶液共同培養(yǎng)，48h和72h后檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果提示在低于或等于25ug/ml的濃度范圍內(nèi)，均未呈現(xiàn)細(xì)胞毒性，為安全濃度范圍（見(jiàn)圖1，圖2），由此確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)化纖煎凍干粉溶液高、中、低濃度分別為25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml。NC:空白對(duì)照組,*P<0.01comparedwithNC。圖1：不同濃度化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞毒性檢測(cè)（48H）NC:空白對(duì)照組,*P<0.01comparedwithNC。圖2：不同濃度化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞毒性檢測(cè)（72H）2.TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞活化模型構(gòu)建以1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml三個(gè)濃度梯度的TGF-β1刺激MRC-5細(xì)胞，結(jié)果顯示，TGF-β1濃度為10ng/ml，作用時(shí)間48h時(shí)，α-SMA表達(dá)水平最高，與空白對(duì)照組相比具有顯著性差異。刺激濃度為10ng/ml時(shí)，作用時(shí)間48Hα-SMA表達(dá)水平與作用時(shí)間24H、72H相比具有顯著差異；在作用時(shí)間48H時(shí)，10ng/ml刺激濃度與1ng/ml、3ng/ml刺激濃度相比，α-SMA表達(dá)水平相比具有顯著差異。由此可見(jiàn)TGF-β1濃度為10ng/ml，對(duì)MRC-5細(xì)胞刺激時(shí)間48h時(shí)，模型構(gòu)建效果相對(duì)最佳。后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選用10ng/ml的濃度和48h的刺激時(shí)間（見(jiàn)圖3）。

上海中醫(yī)藥大學(xué)2019屆博士研究生學(xué)位論文30圖3：TGF-β1對(duì)MRC-5細(xì)胞α-SMAmRNA表達(dá)水平的影響（**P<0.01）3.化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組的MRC-5細(xì)胞增殖水平具有顯著增加（P<0.01），増值率為14.11%。與模型對(duì)照組比較，各化纖煎凍干粉溶液組MRC-5細(xì)胞增殖水平均有降低，在化纖煎中劑量、高劑量組降低尤明顯（P<0.01），細(xì)胞增殖抑制率隨藥物濃度增加逐步提高（見(jiàn)表15，圖4）表15：化纖煎凍干粉溶液對(duì)MRC-5細(xì)胞增值的影響（n=6，xˉ±s）組別OD值增殖抑制率（%）空白對(duì)照組2.799±0.108模型對(duì)照組3.194±0.232*化纖煎低劑量組2.979±0.2376.73化纖煎中劑量組2.709±0.133△15.18化纖煎高劑量組2.479±0.195△22.39注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較△P<0.01。NC:空白對(duì)照Control:陰性對(duì)照*P<0.01comparedwithNC,**P<0.01comparedwithControl圖4：化纖煎凍干粉溶液對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞增殖的影響

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3248591