目的:根據(jù)中醫(yī)“異病同治”理論,將邵長榮教授矽肺治療經驗應用于特發(fā)性肺纖維化,由治療矽肺有效經驗方化裁而成化纖煎應用于IPF治療。采用隨機、對照臨床研究,評價化纖煎治療氣陰兩虛、痰瘀互結型IPF的臨床療效。進行體外細胞實驗研究,觀察化纖煎凍干粉溶液對人胚肺成纖維細胞增殖、活化、分泌細胞外基質的影響,并觀察其對TNF-α細胞因子和NF-κB信號通路的調控,探討化纖煎治療IPF的作用機制。方法:臨床實驗:采用隨機、對照臨床研究,納入符合入組標準IPF患者64例,治療組33例,對照組31例,兩組均采用N乙酰半胱氨酸基礎治療,治療組同時予以中藥化纖煎干預,觀察比較兩組治療前后中醫(yī)證候積分,肺功能FVC、TLC、DLCO,6min步行距離,Borg呼吸困難評分,SGRQ生活質量評分,血清細胞因子TNF-α、TGF-β指標。細胞實驗:采用TGF-β1誘導人胚肺成纖維細胞MRC-5增殖、活化,化纖煎凍干粉溶液進行干預,CCK8法檢測化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞增殖的影響。q RT-PCR法檢測α-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原m RNA,觀察成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化,分泌細胞外基質情況。q RT... 

【文章來源】：上海中醫(yī)藥大學上海市

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞毒性檢測（48H）

上海中醫(yī)藥大學2019屆博士研究生學位論文29將MRC-5細胞與濃度分別為200ug/ml，100ug/ml，50ug/ml，25ug/ml，12.5ug/ml，6.25ug/ml，3.125ug/ml，0ug/ml化纖煎凍干粉溶液共同培養(yǎng)，48h和72h后檢測細胞活力，結果提示在低于或等于25ug/ml的濃度范圍內，均未呈現(xiàn)細胞毒性，為安全濃度范圍（見圖1，圖2），由此確定后續(xù)實驗化纖煎凍干粉溶液高、中、低濃度分別為25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml。NC:空白對照組,*P<0.01comparedwithNC。圖1：不同濃度化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞毒性檢測（48H）NC:空白對照組,*P<0.01comparedwithNC。圖2：不同濃度化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞毒性檢測（72H）2.TGF-β1誘導MRC-5細胞活化模型構建以1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml三個濃度梯度的TGF-β1刺激MRC-5細胞，結果顯示，TGF-β1濃度為10ng/ml，作用時間48h時，α-SMA表達水平最高，與空白對照組相比具有顯著性差異。刺激濃度為10ng/ml時，作用時間48Hα-SMA表達水平與作用時間24H、72H相比具有顯著差異；在作用時間48H時，10ng/ml刺激濃度與1ng/ml、3ng/ml刺激濃度相比，α-SMA表達水平相比具有顯著差異。由此可見TGF-β1濃度為10ng/ml，對MRC-5細胞刺激時間48h時，模型構建效果相對最佳。后續(xù)實驗中選用10ng/ml的濃度和48h的刺激時間（見圖3）。

上海中醫(yī)藥大學2019屆博士研究生學位論文30圖3：TGF-β1對MRC-5細胞α-SMAmRNA表達水平的影響（**P<0.01）3.化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞增殖的影響實驗結果顯示，與空白對照組比較，模型對照組的MRC-5細胞增殖水平具有顯著增加（P<0.01），増值率為14.11%。與模型對照組比較，各化纖煎凍干粉溶液組MRC-5細胞增殖水平均有降低，在化纖煎中劑量、高劑量組降低尤明顯（P<0.01），細胞增殖抑制率隨藥物濃度增加逐步提高（見表15，圖4）表15：化纖煎凍干粉溶液對MRC-5細胞增值的影響（n=6，xˉ±s）組別OD值增殖抑制率（%）空白對照組2.799±0.108模型對照組3.194±0.232*化纖煎低劑量組2.979±0.2376.73化纖煎中劑量組2.709±0.133△15.18化纖煎高劑量組2.479±0.195△22.39注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較△P<0.01。NC:空白對照Control:陰性對照*P<0.01comparedwithNC,**P<0.01comparedwithControl圖4：化纖煎凍干粉溶液對TGF-β1誘導MRC-5細胞增殖的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]邵長榮治療間質性肺病經驗[J]. 薛鴻浩,張惠勇.  中醫(yī)藥導報. 2017(18)
[2]益氣養(yǎng)陰、散結化瘀方治療特發(fā)性肺纖維化22例[J]. 薛鴻浩,張惠勇,王巍.  光明中醫(yī). 2017(04)
[3]基于現(xiàn)代文獻特發(fā)性肺纖維化中醫(yī)證候特征研究[J]. 徐飛,崔文強,劉寶君,董競成.  中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2017(01)
[4]活血藥對肺纖維化大鼠肺組織TNF-α和IL-8表達的影響[J]. 張偉,韓佳,朱雪,閆小燕.  中國中醫(yī)藥科技. 2015(04)
[5]益氣養(yǎng)陰方對肺間質纖維化大鼠肺組織TNF-α、TGF-β1和IFN-γ mRNA水平的影響[J]. 蔡杰,譚利平,馮佳,劉冬梅,趙小丹,夏燕,袁林,向陽.  細胞與分子免疫學雜志. 2015(07)
[6]養(yǎng)肺活血方對肺纖維化大鼠肺組織水通道蛋白、黏附分子表達的影響[J]. 渠景連,郭海,龔婕寧,辛麗麗,陳惠.  中藥材. 2014(09)
[7]特發(fā)性肺纖維化薄層MSCT征象與肺功能的相關性[J]. 李淑靜,孫艦,郭欣珊,王藏海,史朝霞.  中國醫(yī)學影像技術. 2012(10)
[8]特發(fā)性肺間質纖維化中醫(yī)證候規(guī)律臨床研究[J]. 樊茂蓉,韓克華,王書臣.  北京中醫(yī)藥. 2012(04)
[9]實驗性矽肺模型大鼠血清TGF-β1和TNF-α的變化[J]. 成紅,夏丹,唐婷婷,沙泉.  蚌埠醫(yī)學院學報. 2012(04)
[10]絡通纖溶飲對特發(fā)性肺纖維化大鼠肺組織中羥脯氨酸含量的影響[J]. 謝玉蘭,方朝義.  河北中醫(yī). 2011(11)

博士論文
[1]化痰藥干預肺纖維化大鼠纖維生成機制的研究[D]. 張宗學.山東中醫(yī)藥大學 2016
[2]從痰濁阻肺大鼠模型初探痰邪致病機理[D]. 吳秀艷.湖北中醫(yī)學院 2005



本文編號：3248591