引言食管癌是全球第八大常見腫瘤,也是世界癌癥相關(guān)死亡的最常見原因之一。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,我國(guó)食管癌患者占全球患者總數(shù)的一半以上,男性和女性死亡率都居于全球首位,食管癌的治療方案包括手術(shù)、化療、放療等。中晚期食管癌耐藥性的產(chǎn)生是阻礙治療效果的重要因素之一。腫瘤耐藥的機(jī)制包括:（1）藥物外排,減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物的濃度。（2）細(xì)胞凋亡阻滯。（3）DNA損傷修復(fù)應(yīng)答。在腫瘤細(xì)胞中,耐藥性的產(chǎn)生可能由一種或幾種機(jī)制共同發(fā)揮作用,不同腫瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制不同。外泌體是具有脂質(zhì)雙分子膜的納米級(jí)囊泡,存在于所有體液中。腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體參與多種細(xì)胞功能和生理病理事件。外泌體內(nèi)容物包括mRNA、miRNA、蛋白質(zhì)等,這些內(nèi)容物都具有生物活性,能夠在靶細(xì)胞中執(zhí)行功能反應(yīng),而外泌體內(nèi)容物miRNA與食管癌化療耐藥性的作用及其相關(guān)機(jī)制,目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過食管癌細(xì)胞株TE1構(gòu)建食管癌順鉑耐藥細(xì)胞株TE1/DDP,并研究食管癌耐藥細(xì)胞株TE1/DDP分泌的外泌體對(duì)敏感細(xì)胞株TE1順鉑敏感性的影響。通過對(duì)外泌體中的miRNA和處理細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行高通量測(cè)序,利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行miRNA和mRNA關(guān)聯(lián)分析,尋找... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：153 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１食管癌細(xì)胞ＣＣＫ－８檢測(cè)結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??

?第一部分順鉑耐藥細(xì)胞外泌體對(duì)敏感細(xì)胞順鉬耐受性的影響???３ｌ?令?ＴＳ１ＣＤＰ??Ｔ＆ｌ４〇７ｕ＾ＷＤＯＰ??Ｔ＆１？Ｗｔ０７ｕ（｜４Ｔｉ?ＤＯＰ??？?Ｔ＆１??Ｉ！??°?０?２４?４８?７２??Ｔｉｎ?ｅ?（ｈ）??圖１．１食管癌細(xì)胞ＣＣＫ－８檢測(cè)結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??ＳＯ??ａ?３??６０??????Ｅ?４０??［２??？２０?—：—Ｉ?邊：隱???????ｌｌ＿ｌｌ＿ｌｌ＂?■—???Ｔｔ：丨?Ｔｔ：ｌ／Ｉ＞ＤＩ＊??圖１．２ＴＥ１／ＤＤＰ細(xì)胞活力檢測(cè)??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ??４．２?ＴＥｌ／ＤＤＰ細(xì)胞凋亡檢測(cè)??為了檢測(cè)構(gòu)建的順鉑耐藥食管癌細(xì)胞株ＴＥ１／ＤＤＰ在ＩＣ５Ｑ濃度順鉑（０．７??ｕｇ／ｍＬ）壓力下的細(xì)胞凋亡情況，我們利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ＴＥ１／ＤＤＰ細(xì)胞的凋??亡情況（圖１．３）。如圖１．３所示：ＩＣ５〇濃度順鉑壓力下，ＴＥ１細(xì)胞株基本完全凋??亡，凋亡率為９８．４±１．２％，而我們構(gòu)建的順鉑耐藥食管癌細(xì)胞株ＴＥ１／ＤＤＰ則只??有部分發(fā)生凋亡，凋亡率為５２．８士１５．８９％，兩者相比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜??０．００１）。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，我們構(gòu)建的順鉑耐藥食管癌細(xì)胞株ＴＥ１／ＤＤＰ是成??功的。??１５??

?第一部分順鈾耐藥細(xì)胞外泌體對(duì)敏感細(xì)胞順鉑耐受性的影響???Ａ?Ｂ??ＴＥＩ?ＴＥ１／ＤＤＰ?穿??Ｓ■嫌????：二?．１?ｒｎ?＂?？??§??Ｉ?Ｍ．??＇黌１?ｒ??？［?＾?—?Ｉ?■??．．?■?＇?．．．?３??ＴＥ１?ＴＥ１，ＤＤＰ??圖１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ細(xì)胞凋亡檢測(cè)??Ａ：流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果；Ｂ：凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)柱狀圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??Ａ：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥＩ／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；?Ｂ：??ｈｉｓｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＴＥＩ?／?ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．??表１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ細(xì)胞凋亡檢測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)??Ｔａｂｌｅ?１．３?ｄａｔａ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??ｓａｍｐｌｅ?Ｘ±ＳＤ?Ｐ??ＴＥＩ?９５．８３６土?８．３２１??ＴＥ１／ＤＤＰ?４０．９８３士３．７９５?０．０１５８???４．３外泌體鑒定??我們利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和透射電鏡觀察的方法，鑒定提取的食管癌外泌體（圖??１．４和圖１．５）。結(jié)果顯示，在透射電鏡下，可以看到食管癌外泌體的形態(tài)，呈現(xiàn)??典型的圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu)，大小為５０－２００?ｎｍ。用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)外泌體??標(biāo)志性蛋白分子ＣＤ６３的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，在ＴＥ１細(xì)胞和ＴＥ１／ＤＤＰ細(xì)


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