引言食管癌是全球第八大常見腫瘤,也是世界癌癥相關死亡的最常見原因之一。統(tǒng)計結果顯示,我國食管癌患者占全球患者總數的一半以上,男性和女性死亡率都居于全球首位,食管癌的治療方案包括手術、化療、放療等。中晚期食管癌耐藥性的產生是阻礙治療效果的重要因素之一。腫瘤耐藥的機制包括:（1）藥物外排,減少腫瘤細胞內藥物的濃度。（2）細胞凋亡阻滯。（3）DNA損傷修復應答。在腫瘤細胞中,耐藥性的產生可能由一種或幾種機制共同發(fā)揮作用,不同腫瘤細胞中的作用機制不同。外泌體是具有脂質雙分子膜的納米級囊泡,存在于所有體液中。腫瘤細胞分泌的外泌體參與多種細胞功能和生理病理事件。外泌體內容物包括mRNA、miRNA、蛋白質等,這些內容物都具有生物活性,能夠在靶細胞中執(zhí)行功能反應,而外泌體內容物miRNA與食管癌化療耐藥性的作用及其相關機制,目前尚不清楚。本實驗通過食管癌細胞株TE1構建食管癌順鉑耐藥細胞株TE1/DDP,并研究食管癌耐藥細胞株TE1/DDP分泌的外泌體對敏感細胞株TE1順鉑敏感性的影響。通過對外泌體中的miRNA和處理細胞轉錄組進行高通量測序,利用生物信息學軟件進行miRNA和mRNA關聯分析,尋找... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數】：153 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１食管癌細胞ＣＣＫ－８檢測結果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??

?第一部分順鉑耐藥細胞外泌體對敏感細胞順鉬耐受性的影響???３ｌ?令?ＴＳ１ＣＤＰ??Ｔ＆ｌ４〇７ｕ＾ＷＤＯＰ??Ｔ＆１？Ｗｔ０７ｕ（｜４Ｔｉ?ＤＯＰ??？?Ｔ＆１??Ｉ！??°?０?２４?４８?７２??Ｔｉｎ?ｅ?（ｈ）??圖１．１食管癌細胞ＣＣＫ－８檢測結果??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣＣＫ－８?ｋｉｔ?ｆｏｒ?ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ??ＳＯ??ａ?３??６０??????Ｅ?４０??［２??？２０?—：—Ｉ?邊：隱???????ｌｌ＿ｌｌ＿ｌｌ＂?■—???Ｔｔ：丨?Ｔｔ：ｌ／Ｉ＞ＤＩ＊??圖１．２ＴＥ１／ＤＤＰ細胞活力檢測??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ??４．２?ＴＥｌ／ＤＤＰ細胞凋亡檢測??為了檢測構建的順鉑耐藥食管癌細胞株ＴＥ１／ＤＤＰ在ＩＣ５Ｑ濃度順鉑（０．７??ｕｇ／ｍＬ）壓力下的細胞凋亡情況，我們利用流式細胞儀檢測ＴＥ１／ＤＤＰ細胞的凋??亡情況（圖１．３）。如圖１．３所示：ＩＣ５〇濃度順鉑壓力下，ＴＥ１細胞株基本完全凋??亡，凋亡率為９８．４±１．２％，而我們構建的順鉑耐藥食管癌細胞株ＴＥ１／ＤＤＰ則只??有部分發(fā)生凋亡，凋亡率為５２．８士１５．８９％，兩者相比具有顯著統(tǒng)計學意義（尸＜??０．００１）。上述實驗結果表明，我們構建的順鉑耐藥食管癌細胞株ＴＥ１／ＤＤＰ是成??功的。??１５??

?第一部分順鈾耐藥細胞外泌體對敏感細胞順鉑耐受性的影響???Ａ?Ｂ??ＴＥＩ?ＴＥ１／ＤＤＰ?穿??Ｓ■嫌????：二?．１?ｒｎ?＂?？??§??Ｉ?Ｍ．??＇黌１?ｒ??？［?＾?—?Ｉ?■??．．?■?＇?．．．?３??ＴＥ１?ＴＥ１，ＤＤＰ??圖１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ細胞凋亡檢測??Ａ：流式細胞儀檢測細胞凋亡結果；Ｂ：凋亡檢測實驗結果數據統(tǒng)計柱狀圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??Ａ：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥＩ／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；?Ｂ：??ｈｉｓｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＴＥＩ?／?ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．??表１．３?ＴＥ１／ＤＤＰ細胞凋亡檢測數據統(tǒng)計??Ｔａｂｌｅ?１．３?ｄａｔａ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ＴＥ１／ＤＤＰ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ??ｓａｍｐｌｅ?Ｘ±ＳＤ?Ｐ??ＴＥＩ?９５．８３６土?８．３２１??ＴＥ１／ＤＤＰ?４０．９８３士３．７９５?０．０１５８???４．３外泌體鑒定??我們利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和透射電鏡觀察的方法，鑒定提取的食管癌外泌體（圖??１．４和圖１．５）。結果顯示，在透射電鏡下，可以看到食管癌外泌體的形態(tài)，呈現??典型的圓形或橢圓形杯狀結構，大小為５０－２００?ｎｍ。用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測外泌體??標志性蛋白分子ＣＤ６３的表達情況，結果顯示，在ＴＥ１細胞和ＴＥ１／ＤＤＰ細


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