研究背景和目的:AC0010（艾維替尼）是以吡咯嘧啶環(huán)為母核的EGFR不可逆結(jié)合抑制劑,與之前報(bào)道的基于嘧啶環(huán)為母核的EGFR不可逆結(jié)合抑制劑（如奧希替尼、盧瑟替尼等）在結(jié)構(gòu)上有明顯不同。在臨床前和臨床研究表明AC0010可選擇性的抑制EGFR T790M突變。然而,AC0010治療后最終也將導(dǎo)致耐藥,具體作用機(jī)制尚未知曉。本研究擬通過體外不同方法建立AC0010耐藥細(xì)胞株,并通過RNA seq和Western Blot等分子生物學(xué)方法探索耐藥的作用機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)c-MET和BCL-2在兩個(gè)耐藥株中分別異常表達(dá),通過小分子抑制劑和si RNA方法靶向c-MET和BCL-2可克服AC0010耐藥。本研究為臨床治療中出現(xiàn)AC0010耐藥的肺癌患者治療提供了一種有效的基于耐藥機(jī)制的聯(lián)合用藥克服耐藥策略和解決方案。研究方法:1、選擇同時(shí)具有21外顯子L858R突變和20外顯子T790M的NCI-H1975細(xì)胞株,通過體外濃度遞增法誘導(dǎo)建立AC0010耐受的NCI-H1975耐藥細(xì)胞株和通過NCIH1975移植瘤小鼠模型體內(nèi)持續(xù)暴露AC0010形成耐藥腫瘤組織并取出培養(yǎng)建立耐藥細(xì)胞株。2、通過對(duì)... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：111 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

1轉(zhuǎn)錄組建庫(kù)測(cè)序流程圖

AC0010為杭州艾森醫(yī)藥研發(fā)的第三代EGFR抑制劑,NCI-H1975為具有EGFR L858R和T790M雙突變的人肺癌細(xì)胞株。根據(jù)CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算不同濃度的AC0010對(duì)NCI-H1975的增殖抑制率,再根據(jù)抑制率使用GraphPad擬合IC50曲線,如圖3.1-1所示,AC0010作用NCI-H1975細(xì)胞的IC50為18.89nM。3.2 AC0010耐藥細(xì)胞株的建立

使用正置顯微鏡下觀察,NCI-H1975細(xì)胞、H1975-P細(xì)胞和H1975-AVR細(xì)胞均單層排列生長(zhǎng),細(xì)胞邊界清楚,多為長(zhǎng)梭形或多邊形,生長(zhǎng)時(shí)細(xì)胞分散較好,不聚團(tuán)生長(zhǎng),與NCI-H1975細(xì)胞(A、D)相比,H1975-P細(xì)胞形態(tài)偏圓一些(B、E),H1975-AVR細(xì)胞偏長(zhǎng)一些(C、F)(圖3.2-1)。3.2.4多個(gè)EGFR-TKI對(duì)NCI-H1975及其耐藥株H1975-P1和H1975-AVR1細(xì)胞的增殖抑制IC50

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2012年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,左婷婷,賈漫漫,夏昌發(fā),鄒小農(nóng),赫捷.  中國(guó)腫瘤. 2016(01)
[2]非小細(xì)胞肺癌基因檢測(cè)的臨床意義[J]. 韓曉紅,張寧寧,石遠(yuǎn)凱.  中國(guó)新藥雜志. 2013(17)
[3]吉非替尼耐藥細(xì)胞株的篩選和基因譜表達(dá)研究[J]. 粟波,蘇春霞,張海平,鄧沁芳,趙印敏,周彩存.  腫瘤. 2008(07)



本文編號(hào)：3218938