研究背景和目的:AC0010（艾維替尼）是以吡咯嘧啶環(huán)為母核的EGFR不可逆結合抑制劑,與之前報道的基于嘧啶環(huán)為母核的EGFR不可逆結合抑制劑（如奧希替尼、盧瑟替尼等）在結構上有明顯不同。在臨床前和臨床研究表明AC0010可選擇性的抑制EGFR T790M突變。然而,AC0010治療后最終也將導致耐藥,具體作用機制尚未知曉。本研究擬通過體外不同方法建立AC0010耐藥細胞株,并通過RNA seq和Western Blot等分子生物學方法探索耐藥的作用機制。我們發(fā)現c-MET和BCL-2在兩個耐藥株中分別異常表達,通過小分子抑制劑和si RNA方法靶向c-MET和BCL-2可克服AC0010耐藥。本研究為臨床治療中出現AC0010耐藥的肺癌患者治療提供了一種有效的基于耐藥機制的聯合用藥克服耐藥策略和解決方案。研究方法:1、選擇同時具有21外顯子L858R突變和20外顯子T790M的NCI-H1975細胞株,通過體外濃度遞增法誘導建立AC0010耐受的NCI-H1975耐藥細胞株和通過NCIH1975移植瘤小鼠模型體內持續(xù)暴露AC0010形成耐藥腫瘤組織并取出培養(yǎng)建立耐藥細胞株。2、通過對... 

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1轉錄組建庫測序流程圖

AC0010為杭州艾森醫(yī)藥研發(fā)的第三代EGFR抑制劑,NCI-H1975為具有EGFR L858R和T790M雙突變的人肺癌細胞株。根據CCK-8實驗結果計算不同濃度的AC0010對NCI-H1975的增殖抑制率,再根據抑制率使用GraphPad擬合IC50曲線,如圖3.1-1所示,AC0010作用NCI-H1975細胞的IC50為18.89nM。3.2 AC0010耐藥細胞株的建立

使用正置顯微鏡下觀察,NCI-H1975細胞、H1975-P細胞和H1975-AVR細胞均單層排列生長,細胞邊界清楚,多為長梭形或多邊形,生長時細胞分散較好,不聚團生長,與NCI-H1975細胞(A、D)相比,H1975-P細胞形態(tài)偏圓一些(B、E),H1975-AVR細胞偏長一些(C、F)(圖3.2-1)。3.2.4多個EGFR-TKI對NCI-H1975及其耐藥株H1975-P1和H1975-AVR1細胞的增殖抑制IC50

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3218938