膠質(zhì)母細胞瘤（多形性成膠質(zhì)細胞瘤）,又稱為四級星形細胞瘤,與其他的膠質(zhì)瘤一起構(gòu)成了絕大多數(shù)的惡性腦瘤。膠質(zhì)母細胞瘤是惡性程度最高的腦腫瘤,具有高死亡率,預(yù)后差以及生存期短等特性。目前亟需探索更多膠質(zhì)母細胞瘤的診斷和治療方案來進一步延長膠質(zhì)母細胞瘤病人的生存期。核仁紡錘體相關(guān)蛋白1（NUSAP1）最初是作為一個有絲分裂調(diào)控因子被發(fā)現(xiàn),同時NUSAP1也是一個微管結(jié)合蛋白。NUSAP1不僅參與到有絲分裂過程中,在多種生物學(xué)進程尤其是腫瘤生物學(xué)中也發(fā)揮著必不可少的作用。研究表明,NUSAP1在多種人類腫瘤中高表達,因此NUSAP1是腫瘤治療中的一個潛在靶標(biāo)。然而,NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤中的作用尚不清楚。本論文旨在研究NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤中所扮演的角色。結(jié)合臨床數(shù)據(jù)平臺及臨床樣本的分析,NUSAP1可作為膠質(zhì)母細胞瘤診斷及治療的分子標(biāo)記物。結(jié)合細胞水平及體內(nèi)水平的研究,NUSAP1能夠促進膠質(zhì)母細胞瘤的生長,并且NUSAP1能夠增強膠質(zhì)母細胞瘤的化學(xué)耐藥性,提供了NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤治療中的理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.NUSAP1在膠質(zhì)瘤中高表達并且其高表達與膠質(zhì)瘤病人的不... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 概述
    1.2 膠質(zhì)母細胞瘤
        1.2.1 膠質(zhì)母細胞瘤的特性
        1.2.2 膠質(zhì)母細胞瘤的治療
    1.3 核仁紡錘體相關(guān)蛋白(NUSAP1)與腫瘤
        1.3.1 NUSAP1的生物學(xué)特性
        1.3.2 NUSAP1的研究進展
第2章 引言
    2.1 研究背景及目的意義
        2.1.1 研究背景
        2.1.2 研究目的及意義
    2.2 主要研究內(nèi)容
        2.2.1 NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達及其對膠質(zhì)母細胞瘤預(yù)后的影響
        2.2.2 NUSAP1對膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖、凋亡和成瘤能力的調(diào)控
        2.2.3 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤生長的機制研究
        2.2.4 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤化學(xué)耐藥性的研究
    2.3 技術(shù)路線
第3章 NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達及其臨床預(yù)后分析
    3.1 實驗材料、儀器及試劑
        3.1.1 主要實驗材料(組織樣本及細胞系)
        3.1.2 臨床病人數(shù)據(jù)庫
        3.1.3 實驗儀器及設(shè)備
        3.1.4 實驗試劑
        3.1.5 主要實驗試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞復(fù)蘇
        3.2.2 細胞培養(yǎng)
        3.2.3 細胞傳代
        3.2.4 細胞凍存
        3.2.5 免疫組織化學(xué)
        3.2.6 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        3.2.7 臨床數(shù)據(jù)分析
        3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤患者以及細胞系中高表達
        3.3.2 NUSAP1與膠質(zhì)母細胞瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)
    3.4 討論
第4章 NUSAP1 調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖、凋亡、DNA損傷以及腫瘤形成能力
    4.1 實驗材料、儀器及試劑
        4.1.1 主要實驗材料
        4.1.2 實驗儀器及設(shè)備
        4.1.3 實驗試劑
        4.1.4 主要實驗試劑的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 NUSAP1敲低載體構(gòu)建
        4.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染以及細胞感染
        4.2.3 細胞計數(shù)及鋪板
        4.2.4 MTT實驗
        4.2.5 BrdU實驗
        4.2.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
        4.2.7 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        4.2.8 Caspase3/7 活性檢測
        4.2.9 彗星實驗
        4.2.10 免疫熒光
        4.2.11 軟瓊脂克隆實驗
        4.2.12 小鼠原位移植瘤實驗
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 在膠質(zhì)母細胞瘤細胞中下調(diào)NUSAP1的表達
        4.3.2 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細胞瘤細胞的增殖
        4.3.3 敲低NUSAP1促進膠質(zhì)母細胞瘤發(fā)生細胞凋亡
        4.3.4 敲低NUSAP1 引起膠質(zhì)母細胞瘤細胞發(fā)生DNA損傷
        4.3.5 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細胞瘤的克隆形成能力
        4.3.6 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細胞瘤細胞的體內(nèi)成瘤能力
    4.4 討論
第5章 NUSAP1對ATR通路的影響及其調(diào)控作用
    5.1 實驗材料、儀器及試劑
        5.1.1 主要實驗材料
        5.1.2 實驗儀器及設(shè)備
        5.1.3 實驗試劑
        5.1.4 主要實驗試劑的配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 RNA提取(Trizol/氯仿抽提)
        5.2.2 熒光定量PCR
        5.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染及細胞感染
        5.2.4 蛋白免疫印跡
        5.2.5 蛋白穩(wěn)定性檢測
        5.2.6 蛋白免疫共沉淀實驗
        5.2.7 泛素化實驗
        5.2.8 蛋白截短實驗
        5.2.9 SUMO化實驗
        5.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 膠質(zhì)母細胞瘤細胞中ATR蛋白的表達量與NUSAP1 蛋白的表達呈正相關(guān)
        5.3.2 膠質(zhì)母細胞瘤中NUSAP1 調(diào)控ATR的蛋白穩(wěn)定性
        5.3.3 NUSAP1 調(diào)控ATR的泛素化
        5.3.4 NUSAP1 通過穩(wěn)定ATR促進膠質(zhì)母細胞瘤發(fā)生凋亡和DNA損傷
        5.3.5 NUSAP1與ATR相互結(jié)合
        5.3.6 NUSAP1 通過其COOH基末端與ATR結(jié)合
        5.3.7 NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控ATR的泛素化和SUMO化
    5.4 討論
第6章 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤細胞的化學(xué)耐藥性
    6.1 實驗材料、儀器及試劑
        6.1.1 主要實驗材料
        6.1.2 實驗儀器及設(shè)備
        6.1.3 實驗試劑
        6.1.4 主要實驗試劑的配制
    6.2 實驗方法
        6.2.1 慢病毒轉(zhuǎn)染
        6.2.2 細胞感染
        6.2.3 NUSAP1敲低及過表達與化療藥物的聯(lián)合使用
        6.2.4 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
        6.2.5 細胞活力檢測以及細胞半致死濃度(IC50)計算
        6.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 敲低NUSAP1增強膠質(zhì)母細胞瘤對替莫唑胺和阿霉素治療的敏感性
        6.3.2 NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域增強膠質(zhì)母細胞瘤的化學(xué)耐藥性
        6.3.3 NUSAP1 通過穩(wěn)定ATR調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤的生長以及化學(xué)耐藥性
    6.4 討論
第7章 綜合與討論
    1.NUSAP1在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達情況及其與預(yù)后的關(guān)系
    2.NUSAP1對膠質(zhì)母細胞瘤細胞生長及成瘤能力的調(diào)控研究
    3.NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤生長的分子機制研究
    4.NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤細胞的化學(xué)耐藥性
論文創(chuàng)新點
參考文獻
博士在讀期間發(fā)表論文及參研課題情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hepatitis B virus X protein enhances hepatocarcinogenesis by depressing the targeting of NUSAP1 mRNA by miR-18b[J]. Zhe Yang,Jiong Li,Guoxing Feng,Yuan Wang,Guang Yang,Yunxia Liu,Shuqin Zhang,Jinyan Feng,Xiaodong Zhang.  Cancer Biology & Medicine. 2019(02)



本文編號：3199494