宮頸癌是全球女性中第四大常見的癌癥,已有研究表明持續(xù)性感染高危型人乳頭瘤狀病毒（HPV）病毒是宮頸病變的必要條件。早期感染HPV不會產(chǎn)生任何癥狀,這是因為HPV L1蛋白是保護性抗原,可激發(fā)人自身的免疫系統(tǒng)而清除病毒,又因為HPV L1蛋白是晚期產(chǎn)生的蛋白,主要存在病毒復(fù)制期,所以檢測HPV L1蛋白能反應(yīng)患者的免疫狀態(tài)和HPV DNA是否整合到宿主基因組,從而判斷病情發(fā)展趨勢以及是否能引起惡性病變。不同宮頸癌變的級別與HPV感染型別存在一定差異,人們常常根據(jù)患者攜帶病毒的量來辨別病情,預(yù)測宮頸惡性病變的風(fēng)險,因此當(dāng)已經(jīng)確證持續(xù)感染HPV后,我們既要根據(jù)感染HPV的型別,又要根據(jù)患者攜帶病毒的量,來評判和預(yù)測與HPV病毒有關(guān)疾病的發(fā)展趨勢,做到早預(yù)防早治療,降低發(fā)病率和死亡率。綜上HPV分型檢測對早期宮頸癌的篩查起著重要作用,而檢測HPV L1蛋白對宮頸疾病發(fā)展趨勢的預(yù)測和HPV感染治療的預(yù)后都具有很大的參考意義,二者結(jié)合起來對臨床診斷更具實用價值。同時進行HPV分型和HPV L1蛋白檢測可彌補彼此的缺點,臨床上可極大降低漏診誤診率,提高惡性病變診斷和預(yù)測的準(zhǔn)確性,最大程度減少患者的損... 

【文章來源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集
摘要
Abstract
符號說明
第一章 緒論
    1.1 人乳頭瘤狀病毒(HPV)概述
        1.1.1 人乳頭瘤狀病毒（HPV)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 人乳頭瘤狀病毒（HPV)基因組與功能
        1.1.3 HPV病毒分型
        1.1.4 HPV與腫瘤的關(guān)系
        1.1.5 HPV的致病機理
        1.1.6 HPV病毒載量與宮頸癌的關(guān)系
        1.1.7 HPV分型檢測的意義
        1.1.8 HPV L1蛋白檢測的意義
        1.1.9 HPV分型聯(lián)合HPV L1蛋白檢測的意義
        1.1.10 HPV檢測方法
            1.1.10.1 細(xì)胞學(xué)檢查
            1.1.10.2 雜交捕獲二代分析（HC2)
            1.1.10.3 基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的檢測方法
            1.1.10.4 基因芯片技術(shù)
    1.2 基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間質(zhì)譜(MALDI TOF MS)
        1.2.1 MALDI TOF MS基本原理
        1.2.2 MALDI電離機理
        1.2.3 MALDI TOF MS的應(yīng)用
            1.2.3.1 多肽與蛋白質(zhì)分析
            1.2.3.2 多磷酸化肽分析檢測
            1.2.3.3 寡核苷酸分析檢測
            1.2.3.4 MALDI定量分析
            1.2.3.5 MALDI TOF MS對HPV檢測
    1.3 本論文研究的目的、意義和主要內(nèi)容
        1.3.1 本論文研究目的和意義
        1.3.2 本論文研究內(nèi)容
第二章 高效富集寡核苷酸納米材料的制備
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 試劑與儀器
        2.2.2 精胺修飾納米金剛石的制備
        2.2.3 紅外光譜和紅外成像的表征
        2.2.4 SP-NDs對寡核苷酸的吸附效果
        2.2.5 SP-NDs富集稀溶液及復(fù)雜基質(zhì)中的寡核苷酸
        2.2.6 MADLI TOF MS分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 SP-NDs的表征
        2.3.2 SP-NDs對寡核苷酸的吸附
        2.3.3 MALDI TOF MS分析稀溶液寡核苷酸
        2.3.4 MALDI TOF MS分析復(fù)雜基體中的寡核苷酸
    2.4 本章小結(jié)
第三章 基于納米材料高效富集質(zhì)譜法對HPV病毒分型研究
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 試劑與儀器
        3.2.2 HPV通用引物PCR擴增
        3.2.3 巢式PCR-RFLP方法
        3.2.4 臨床樣品DNA提取
        3.2.5 MALDI TOF MS檢測酶切產(chǎn)物
        3.2.6 試劑盒檢測臨床樣本
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 HPV限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFMP)
        3.3.2 MALDI TOF MS對HPV分型檢測
        3.3.3 臨床樣品驗證結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
第四章 基于納米金非共價鍵競爭吸附質(zhì)譜法定量檢測HPV16 L1蛋白
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 試劑與儀器
        4.2.2 納米金的合成
        4.2.3 納米金表征
        4.2.4 納米金聚集鹽的濃度
        4.2.5 HPV16 L1核酸適配體與AuNPs結(jié)合
            4.2.5.1 溶液配制
            4.2.5.2 pH值的影響
            4.2.5.3 鹽的影響
            4.2.5.4 吸附時間
            4.2.5.5 AuNPs與核酸適配體比例
            4.2.5.6 HPV16 L1核酸適配體與AuNPs結(jié)合物穩(wěn)定性
            4.2.5.7 HPV16 L1核酸適配體與AuNPs結(jié)合物的表征
        4.2.7 Mass Tag的篩選
            4.2.7.1 確定Mass tag與AuNPs的親和力
            4.2.7.2 Mass Tag和HPV16 L1核酸適配體競爭吸附
        4.2.8 HPV16 L1蛋白的檢測
        4.2.9 HPV16 L1蛋白的檢測特異性
        4.2.10 樣本檢測
            4.2.10.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            4.2.10.2 樣本前處理和檢測
        4.2.11 方法學(xué)驗證
            4.2.11.1 方法重現(xiàn)性
            4.2.11.2 方法回收率
        4.2.12 酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒檢測樣本
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 納米金的表征
        4.3.2 納米金聚集鹽的濃度
        4.3.3 AuNPs吸附Aptamer條件
            4.3.3.1 pH的影響
            4.3.3.2 鹽的影響
            4.3.3.3 吸附時間的影響
            4.3.3.4 AuNPs與核酸適配體比例
            4.3.3.5 AuNPs-APT_(HPV16 L1)穩(wěn)定性研究
        4.3.4 HPV16 L1核酸適配體與AuNPs結(jié)合物的表征
        4.3.5 質(zhì)量標(biāo)簽(Tag)的篩選
        4.3.6 MALDI TOF MS條件
            4.3.6.1 檢測模式
            4.3.6.2 基質(zhì)的選擇
        4.3.7 HPV16 L1蛋白的檢測
        4.3.8 方法分析表現(xiàn)
        4.3.9 實際樣品的定量分析
        4.3.10 ELISA實驗驗證
    4.4 本章小結(jié)
第五章 基于氧化石墨烯和核酸適配體競爭吸附檢測HPV 16 L1蛋白
    5.1 引言
    5.2 實驗部分
        5.2.1 試劑與儀器
        5.2.2 離心時間
        5.2.3 氯化鈉濃度
        5.2.4 HPV16 L1核酸適配體濃度
        5.2.5 HPV16 L1蛋白檢測
        5.2.6 臨床樣本檢測
        5.2.7 特異性實驗
        5.2.8 基于核酸適配體與GO檢測體系Zeta電勢和顆粒尺寸分布研究
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 離心時間的影響
        5.3.2 氯化鈉濃度的影響
        5.3.3 HPV16 L1核酸適配體的濃度
        5.3.4 HPV 16 L1蛋白檢測
        5.3.5 實際臨床樣本檢測
        5.3.6 回收率
        5.3.7 特異性實驗
        5.3.8 GO/HPV 16 L1核酸適配體檢測體系顆粒尺寸的分布研究
        5.3.9 HPV 16 L1核酸適配體和GO檢測體系Zeta電勢分布
        5.3.10 與第四章所建立的方法比較
    5.4 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
參考文獻
致謝
研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者和導(dǎo)師簡介
附件


【參考文獻】：
期刊論文
[1]子宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查異常的涂片中人乳頭狀瘤病毒L1蛋白的表達及其意義[J]. 肖巍,卞美璐,馬莉,劉軍,陳穎.  中華婦產(chǎn)科雜志. 2009 (12)
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碩士論文
[1]HPV基因分析在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的作用和意義[D]. 崔虹飛.青島大學(xué) 2013
[2]利用SELEX技術(shù)篩選高危型HPVL1蛋白適體的研究與探討[D]. 肖昕.華中科技大學(xué) 2012
[3]原位MALDI-MS輔助宮頸細(xì)胞學(xué)診斷方法的建立[D]. 王燕.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2010
[4]宮頸癌盆腔淋巴結(jié)HPV DNA檢測的臨床意義[D]. 馬玎.青島大學(xué) 2009



本文編號：3196813