乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可導致肝炎,肝硬化,最終發(fā)展成為肝癌。據(jù)估計全球大約有2.4億人為慢性HBV感染。世界衛(wèi)生組織（WHO）下屬的國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer）已將HBV列為“一類致癌物”。HBV慢性感染與HBV暴露發(fā)生的年齡是有關的。母嬰傳播HBV以及幼兒時期感染HBV均可導致HBV慢性感染。超過90%的接觸HBV的新生兒以及大約30%的兒童在1歲至5歲之間感染HBV,均無法有效清除HBV。然而,大約95%的成人感染HBV則可以自發(fā)地清除病毒。這種差異一直被認為是由于嬰幼兒和成年人之間的免疫力差異導致的。因為與嬰幼兒相比,成年人免疫系統(tǒng)發(fā)育完全,有能力清除HBV感染。人類的腸道聚集著數(shù)以萬億計的共生菌。這些腸道共生菌在人類健康中發(fā)揮著重要作用。腸道共生菌不僅調節(jié)代謝、上皮細胞的發(fā)育,粘膜免疫系統(tǒng)的發(fā)育而且也參與調控粘膜免疫系統(tǒng)例如腸道、肺臟和非粘膜免疫系統(tǒng)例如肝臟免疫應答。肝臟位于一個獨特的全身循環(huán)系統(tǒng)中,接受來自肝動脈和門靜脈的血液,使其成為代謝解毒和免疫細胞發(fā)揮功... 

【文章來源】：中國科學技術大學安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第1章 緒論
    1.1 乙肝研究進展
        1.1.1 乙肝的現(xiàn)狀
        1.1.2 乙肝所參與的細胞及細胞免疫應答的研究
        1.1.3 乙肝中體液免疫應答的研究
    1.2 腸道共生菌與免疫系統(tǒng)相互作用
        1.2.1 腸道共生菌的概述
        1.2.2 腸道共生菌與免疫系統(tǒng)發(fā)育的關系
        1.2.3 腸道共生菌對免疫應答的調控
    1.3 腸道共生菌與肝臟免疫的關系
        1.3.1 腸道共生菌維持肝臟免疫耐受
        1.3.2 腸道共生菌與肝臟疾病
    1.4 結語
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗小鼠
        2.1.2 小鼠單個核細胞分離、純化相關試劑
        2.1.3 流式細胞術檢測的相關試劑
        2.1.4 細胞培養(yǎng)及刺激的相關試劑
        2.1.5 生化試劑
        2.1.6 質粒抽提及分子生物學相關試劑
        2.1.7 免疫組化和組織病理染色相關試劑
        2.1.8 放射性免疫檢測相關試劑
        2.1.9 乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)檢測試劑盒
    2.2 實驗設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 口服抗生素水清除小鼠腸道共生菌
        2.3.2 中抽質粒
        2.3.3 高壓注射pAAV-HBV1.2質粒構建小鼠HBV轉染模型
        2.3.4 組織HE染色
        2.3.5 組織免疫化學染色檢測HBV核心抗原
        2.3.6 放射免疫法檢測HBV表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg),表面抗體(anti-HBs)
        2.3.7 小鼠肝臟、脾臟單個核細胞的分離
        2.3.8 流式細胞術
        2.3.9 MACS純化細胞
        2.3.10 定量PCR法檢測HBV DNA水平
        2.3.11 檢測血清中谷丙轉氨酶(ALT)水平(連續(xù)監(jiān)測法)
        2.3.12 RNA抽提與逆轉錄PCR
        2.3.13 統(tǒng)計分析
第3章 實驗結果
    3.1 清除小鼠腸道共生菌的模型建立
    3.2 小鼠HBV轉染模型的建立
    3.3 共生菌維持的抗HBV小鼠模型建立
        3.3.1 清除腸道共生菌的HBV轉染模型構建
        3.3.2 清除腸道共生菌的高劑量HBV轉染模型中,HBV清除能力無顯著變化
        3.3.3 清除腸道共生菌的低劑量HBV轉染模型中,HBV清除能力顯著減弱
    3.4 CD4~+T細胞在共生菌維持的抗HBV免疫中發(fā)揮關鍵作用
        3.4.1 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,肝臟、脾臟單個核細胞的數(shù)量,淋巴細胞亞群的比例無顯著差異
        3.4.2 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,肝臟、脾臟Treg細胞的比例和數(shù)量無顯著差異
        3.4.3 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,效應性的CD4~+T細胞比例和數(shù)量顯著減少
        3.4.4 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,HBV特異性的CD4~+T細胞比例顯著減少
        3.4.5 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,CD4~+T細胞功能減弱
        3.4.6 共生菌促進HBV清除依賴適應性免疫系統(tǒng)
        3.4.7 共生菌促進HBV清除依賴CD4~+T細胞
    3.5 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中體液免疫應答減弱
        3.5.1 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,產生anti-HBs能力減弱
        3.5.2 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,HBsAg陽性小鼠比例顯著增多
        3.5.3 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,生發(fā)中心B細胞比例減少
        3.5.4 清除腸道共生菌的HBV轉染模型中,Tfh細胞比例減少,應答減弱
    3.6 共生菌載量在CD4~+T細胞依賴的HBV的清除中發(fā)揮重要作用
        3.6.1 單一抗菌素處理不足以延緩成年小鼠清除HBV
        3.6.2 TLR2,TLR4,TLR9信號的補充不能促進菌群缺失成年小鼠清除HBV
        3.6.3 TLR2/TLR4/TLR9的單一缺陷對共生菌介導的成年小鼠清除HBV無影響
第4章 討論與總結
參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間的主要研究成果
    學術論文發(fā)表情況
    參加的學術會議
    獲得獎勵


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Activation of TLR-4 and liver injury via NF-kappa B in rat with acute cholangitis[J]. Hong Yu and Shuo-Dong Wu Department of the First Biliary and Minimal Invasive Surgery, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(02)



本文編號：3191187