乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可導(dǎo)致肝炎,肝硬化,最終發(fā)展成為肝癌。據(jù)估計(jì)全球大約有2.4億人為慢性HBV感染。世界衛(wèi)生組織（WHO）下屬的國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（International Agency for Research on Cancer）已將HBV列為“一類致癌物”。HBV慢性感染與HBV暴露發(fā)生的年齡是有關(guān)的。母嬰傳播HBV以及幼兒時(shí)期感染HBV均可導(dǎo)致HBV慢性感染。超過90%的接觸HBV的新生兒以及大約30%的兒童在1歲至5歲之間感染HBV,均無法有效清除HBV。然而,大約95%的成人感染HBV則可以自發(fā)地清除病毒。這種差異一直被認(rèn)為是由于嬰幼兒和成年人之間的免疫力差異導(dǎo)致的。因?yàn)榕c嬰幼兒相比,成年人免疫系統(tǒng)發(fā)育完全,有能力清除HBV感染。人類的腸道聚集著數(shù)以萬億計(jì)的共生菌。這些腸道共生菌在人類健康中發(fā)揮著重要作用。腸道共生菌不僅調(diào)節(jié)代謝、上皮細(xì)胞的發(fā)育,粘膜免疫系統(tǒng)的發(fā)育而且也參與調(diào)控粘膜免疫系統(tǒng)例如腸道、肺臟和非粘膜免疫系統(tǒng)例如肝臟免疫應(yīng)答。肝臟位于一個(gè)獨(dú)特的全身循環(huán)系統(tǒng)中,接受來自肝動(dòng)脈和門靜脈的血液,使其成為代謝解毒和免疫細(xì)胞發(fā)揮功... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第1章 緒論
    1.1 乙肝研究進(jìn)展
        1.1.1 乙肝的現(xiàn)狀
        1.1.2 乙肝所參與的細(xì)胞及細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究
        1.1.3 乙肝中體液免疫應(yīng)答的研究
    1.2 腸道共生菌與免疫系統(tǒng)相互作用
        1.2.1 腸道共生菌的概述
        1.2.2 腸道共生菌與免疫系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)系
        1.2.3 腸道共生菌對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)控
    1.3 腸道共生菌與肝臟免疫的關(guān)系
        1.3.1 腸道共生菌維持肝臟免疫耐受
        1.3.2 腸道共生菌與肝臟疾病
    1.4 結(jié)語
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
        2.1.2 小鼠單個(gè)核細(xì)胞分離、純化相關(guān)試劑
        2.1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的相關(guān)試劑
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)及刺激的相關(guān)試劑
        2.1.5 生化試劑
        2.1.6 質(zhì)粒抽提及分子生物學(xué)相關(guān)試劑
        2.1.7 免疫組化和組織病理染色相關(guān)試劑
        2.1.8 放射性免疫檢測(cè)相關(guān)試劑
        2.1.9 乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)檢測(cè)試劑盒
    2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 口服抗生素水清除小鼠腸道共生菌
        2.3.2 中抽質(zhì)粒
        2.3.3 高壓注射pAAV-HBV1.2質(zhì)粒構(gòu)建小鼠HBV轉(zhuǎn)染模型
        2.3.4 組織HE染色
        2.3.5 組織免疫化學(xué)染色檢測(cè)HBV核心抗原
        2.3.6 放射免疫法檢測(cè)HBV表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg),表面抗體(anti-HBs)
        2.3.7 小鼠肝臟、脾臟單個(gè)核細(xì)胞的分離
        2.3.8 流式細(xì)胞術(shù)
        2.3.9 MACS純化細(xì)胞
        2.3.10 定量PCR法檢測(cè)HBV DNA水平
        2.3.11 檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平(連續(xù)監(jiān)測(cè)法)
        2.3.12 RNA抽提與逆轉(zhuǎn)錄PCR
        2.3.13 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 清除小鼠腸道共生菌的模型建立
    3.2 小鼠HBV轉(zhuǎn)染模型的建立
    3.3 共生菌維持的抗HBV小鼠模型建立
        3.3.1 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型構(gòu)建
        3.3.2 清除腸道共生菌的高劑量HBV轉(zhuǎn)染模型中,HBV清除能力無顯著變化
        3.3.3 清除腸道共生菌的低劑量HBV轉(zhuǎn)染模型中,HBV清除能力顯著減弱
    3.4 CD4~+T細(xì)胞在共生菌維持的抗HBV免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用
        3.4.1 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,肝臟、脾臟單個(gè)核細(xì)胞的數(shù)量,淋巴細(xì)胞亞群的比例無顯著差異
        3.4.2 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,肝臟、脾臟Treg細(xì)胞的比例和數(shù)量無顯著差異
        3.4.3 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,效應(yīng)性的CD4~+T細(xì)胞比例和數(shù)量顯著減少
        3.4.4 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,HBV特異性的CD4~+T細(xì)胞比例顯著減少
        3.4.5 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,CD4~+T細(xì)胞功能減弱
        3.4.6 共生菌促進(jìn)HBV清除依賴適應(yīng)性免疫系統(tǒng)
        3.4.7 共生菌促進(jìn)HBV清除依賴CD4~+T細(xì)胞
    3.5 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中體液免疫應(yīng)答減弱
        3.5.1 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,產(chǎn)生anti-HBs能力減弱
        3.5.2 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,HBsAg陽性小鼠比例顯著增多
        3.5.3 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,生發(fā)中心B細(xì)胞比例減少
        3.5.4 清除腸道共生菌的HBV轉(zhuǎn)染模型中,Tfh細(xì)胞比例減少,應(yīng)答減弱
    3.6 共生菌載量在CD4~+T細(xì)胞依賴的HBV的清除中發(fā)揮重要作用
        3.6.1 單一抗菌素處理不足以延緩成年小鼠清除HBV
        3.6.2 TLR2,TLR4,TLR9信號(hào)的補(bǔ)充不能促進(jìn)菌群缺失成年小鼠清除HBV
        3.6.3 TLR2/TLR4/TLR9的單一缺陷對(duì)共生菌介導(dǎo)的成年小鼠清除HBV無影響
第4章 討論與總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間的主要研究成果
    學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
    參加的學(xué)術(shù)會(huì)議
    獲得獎(jiǎng)勵(lì)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Activation of TLR-4 and liver injury via NF-kappa B in rat with acute cholangitis[J]. Hong Yu and Shuo-Dong Wu Department of the First Biliary and Minimal Invasive Surgery, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110004, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(02)



本文編號(hào)：3191187