目的:乳腺癌是嚴(yán)重威脅全球女性健康的常見惡性腫瘤之一,世界范圍內(nèi)每年大約有167萬新發(fā)乳腺癌患者,預(yù)計到2030年,全球大約有2200萬乳腺癌患者。隨著治療手段不斷發(fā)展進(jìn)步,乳腺癌患者的預(yù)后已有了顯著的改善,但仍有30%-40%的患者最終復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移直至死亡。三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）因其惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、且無法從內(nèi)分泌治療及抗HER-2靶向治療中獲益,治療手段有限,預(yù)后差,已成為乳腺癌治療領(lǐng)域的一個難題。因此,當(dāng)務(wù)之急是發(fā)現(xiàn)新的有效的治療三陰性乳腺癌的靶點來改善三陰性乳腺癌患者的預(yù)后。腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells,CSCs）是腫瘤組織中存在的一部分特殊的腫瘤細(xì)胞,這些細(xì)胞通過某些機(jī)制不斷自我更新,分裂增殖,促進(jìn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。2003年,Al-Hajj等首次在乳腺癌中分離鑒定出乳腺癌干細(xì)胞。相較于其他類型的乳腺癌,三陰性乳腺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的占比更高。因此,針對腫瘤干細(xì)胞進(jìn)行靶向治療可能是未來乳腺腫瘤特別是三陰性乳腺癌治療最有效的方法之一。微小RNA（microRNA,miRNA）是一類小分子非編碼RN... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:miR-1對乳腺癌干細(xì)胞自我更新,增殖和凋亡能力的影響及其調(diào)控機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究方法
            2.2.1 臨床病例篩選
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)分選乳腺癌干細(xì)胞
            2.2.4 脂質(zhì)體介導(dǎo)miR-1 agomir和antagomir轉(zhuǎn)染
            2.2.5 雙熒光素酶報告系統(tǒng)
            2.2.6 微球體形成實驗
            2.2.7 CCK-8實驗
            2.2.8 實時定量PCR
            2.2.9 Western blotting實驗
            2.2.10 裸鼠移植瘤模型的建立
            2.2.11 免疫組織化學(xué)染色
            2.2.12 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定
            2.2.13 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 miR-1在三陰性乳腺癌和其配對的癌旁組織中表達(dá)情況
        3.2 流式細(xì)胞術(shù)分選乳腺癌干細(xì)胞
        3.3 過表達(dá)miR-1下調(diào)CRT表達(dá),沉默miR-1上調(diào)CRT表達(dá)
        3.4 生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-1的候選靶基因
        3.5 雙熒光素酶實驗驗證miR-1與EVI-1 mRNA3’UTR區(qū)靶向結(jié)合
        3.6 過表達(dá)miR-1下調(diào)EVI-1表達(dá),沉默miR-1上調(diào)EVI-1表達(dá)
        3.7 miR-1對乳腺癌干細(xì)胞微球體形成能力的影響
        3.8 miR-1對乳腺癌干細(xì)胞增殖能力的影響
        3.9 miR-1對乳腺癌干細(xì)胞凋亡通路相關(guān)因子的影響
        3.10 miR-1對乳腺癌干細(xì)胞EMT通路相關(guān)因子的影響
        3.11 生物信息學(xué)方法預(yù)測CRT是EVI-1的靶基因
        3.12 EVI-1正性調(diào)控CRT表達(dá)
        3.13 過表達(dá)的miR-1抑制裸鼠乳腺癌干細(xì)胞移植瘤的生長
        3.14 裸鼠移植瘤內(nèi)miR-1、EVI-1和CRT的表達(dá)情況
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:鈣網(wǎng)蛋白不同結(jié)構(gòu)域?qū)θ橄侔└杉?xì)胞生物學(xué)行為的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 鈣網(wǎng)蛋白各結(jié)構(gòu)域表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            2.2.4 微球體形成實驗
            2.2.5 流式細(xì)胞凋亡實驗
            2.2.6 Western blotting實驗
            2.2.7 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 鈣網(wǎng)蛋白各結(jié)構(gòu)域重組質(zhì)粒的測序及轉(zhuǎn)染結(jié)果
        3.2 鈣網(wǎng)蛋白各個結(jié)構(gòu)域?qū)θ橄侔└杉?xì)胞微球體形成的影響
        3.3 鈣網(wǎng)蛋白各個結(jié)構(gòu)域?qū)θ橄侔└杉?xì)胞凋亡能力的影響
        3.4 鈣網(wǎng)蛋白各個結(jié)構(gòu)域?qū)θ橄侔└杉?xì)胞EMT過程相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]下調(diào)鈣網(wǎng)蛋白表達(dá)對乳腺癌干細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響[J]. 李曉曦,孟琳,王天一,孫大鵬,仇鳳啟,馬萍.  解剖科學(xué)進(jìn)展. 2013(04)
[2]Significance and relationship between Cripto-1 and p-STAT3 expression in gastric cancer and precancerous lesions[J]. Jian-Guo Zhang, Jing Zhao, Yan Xin, The Fourth Laboratory of Cancer Institute, Department of Tumor Pathology of General Surgery Institute, the First Affi liated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(05)



本文編號：3190351