目的:乳腺癌是發(fā)病率最高的女性常見惡性腫瘤。近年來(lái)全世界范圍內(nèi),乳腺癌的發(fā)病率都在逐年遞增,嚴(yán)重威脅婦女的生命健康。盡管目前針對(duì)乳腺癌的診療措施有了實(shí)質(zhì)性的進(jìn)展,但乳腺癌的死亡率仍位于女性惡性腫瘤之首,乳腺癌轉(zhuǎn)移已成為乳腺癌患者死亡的主要原因,超過(guò)90%的乳腺癌患者死于乳腺癌的轉(zhuǎn)移。乳腺癌遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移造成了患者嚴(yán)重的不良預(yù)后,乳腺癌患者的5年生存率經(jīng)統(tǒng)計(jì),未發(fā)生轉(zhuǎn)移的高達(dá)98%,而發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者急劇下降低至23%。目前乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制仍然是科研人員研究的重要課題,因此對(duì)其進(jìn)行更深入的探索將為乳腺癌的診療提供一定的理論依據(jù)。P21蛋白活化激酶（P21-activated kinase,PAK）是一類絲/蘇氨酸蛋白激酶,它在進(jìn)化中保守,作為Cdc42/Rac1、生長(zhǎng)因子信號(hào)下游的主要靶蛋白,它的活化依賴于生長(zhǎng)因子和其他細(xì)胞外信號(hào)。PAK通過(guò)結(jié)合下游靶蛋白或生理性底物,參與到眾多生物學(xué)功能,例如細(xì)胞極性、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞周期演進(jìn)、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等,尤其是在細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤進(jìn)程中具有重要作用。目前,PAK家族一共發(fā)現(xiàn)并證實(shí)有6個(gè)成員,根據(jù)結(jié)構(gòu)可分為兩類,Ⅰ類成員有PAK1-3,Ⅱ類成員... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :PAK5-DNPEP-USP4 通路調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 細(xì)胞
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 方法
            2.2.1 克隆DNPEP基因的全長(zhǎng)及突變體,構(gòu)建到不同的質(zhì)粒載體中
            2.2.2 體外GST-pull down
            2.2.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染
            2.2.4 蛋白提取
            2.2.5 Western Blot
            2.2.6 免疫共沉淀
            2.2.7 銀染
            2.2.8 體外激酶實(shí)驗(yàn)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 DNPEP是 PAK5 的相互作用蛋白
        3.2 PAK5 可磷酸化DNPEP的 S119 位點(diǎn)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :PAK5介導(dǎo)DNPEP的磷酸化調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移及其作用機(jī)制的研究
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 主要試劑
            7.1.2 細(xì)胞
            7.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        7.2 方法
            7.2.1 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染
            7.2.2 蛋白提取
            7.2.3 Western Blot
            7.2.4 免疫共沉淀
            7.2.5 免疫組化
            7.2.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            7.2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)
            7.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)
            7.2.9 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
            7.2.10 裸鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移模型的建立
    8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        8.1 磷酸化的DNPEP可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖及侵襲
        8.2 USP4為PAK5-DNPEP通路的下游底物
        8.3 PAK5 促進(jìn)DNPEP降解
        8.4 PAK5與USP4 的高表達(dá)可以促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :DNPEP通過(guò)水解CD44 抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和干性
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 主要試劑
            12.1.2 細(xì)胞
            12.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        12.2 方法
            12.2.1 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染
            12.2.2 蛋白提取
            12.2.3 Western Blot
            12.2.4 免疫共沉淀
            12.2.5 免疫組化
            12.2.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            12.2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)
            12.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)
            12.2.9 免疫熒光及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測(cè)
    13 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        13.1 乳腺癌組織DNPEP呈低表達(dá)
        13.2 DNPEP可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲
        13.3 DNPEP與 CD44 相互作用并調(diào)節(jié)CD44 的表達(dá)
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3171745