機體代謝和免疫系統(tǒng)是維持生命存活的根本,兩者密不可分,任一功能紊亂都會導(dǎo)致機體慢性代謝障礙。越來越多的研究表明慢性炎癥與代謝性疾病的關(guān)聯(lián)密切,尤其在肥胖和胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要,而巨噬細胞對于慢性炎癥的調(diào)節(jié)及其可塑性被認為在這復(fù)雜的病理生理環(huán)境中起了決定性的作用。類泛素化Neddylation作為一種嶄新的蛋白質(zhì)翻譯后修飾途徑已經(jīng)逐漸成為細胞分子生物學的研究熱點,UBE2M是類泛素化修飾過程中關(guān)鍵的E2結(jié)合酶,從類泛素化角度探索巨噬細胞在慢性炎癥反應(yīng)和相關(guān)代謝性疾病中的新功能,尋找其內(nèi)源性調(diào)控分子成為治療相關(guān)代謝性疾病的關(guān)鍵。本課題的研究發(fā)現(xiàn),UBE2M在調(diào)控巨噬細胞慢性炎癥反應(yīng),影響機體肥胖和胰島素抵抗等病理過程中發(fā)揮重要作用。在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖疾病模型中,UBE2M巨噬細胞特異性敲除的小鼠肥胖程度較輕,胰島素抵抗減弱,機體對胰島素敏感性更強。與此同時,UBE2M的敲除減輕了脂肪組織和肝臟中炎癥反應(yīng)強度,并減少了肝臟中脂滴的沉積緩解了肝臟脂肪變性和肝損傷。體內(nèi)體外機制研究表明,UBE2M敲除對慢性炎癥的減輕以及相關(guān)代謝性疾病的緩解與IL-1β的轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)。進一步研究發(fā)現(xiàn),... 

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第一部分 類泛素化Neddylation E2 UBE2M在肥胖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗中的作用及其機制研究
    1. 引言
    2. 實驗材料及方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 細胞系
            2.1.3 載體和菌株
            2.1.4 常規(guī)試劑
            2.1.5 實驗抗體
            2.1.6 主要溶液及其配制
            2.1.7 實驗耗材
            2.1.8 主要設(shè)備和軟件
        2.2 實驗方法
            2.2.1 小鼠基因組提取和基因型鑒定
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 腹腔巨噬細胞誘導(dǎo)
            2.2.4 骨髓來源巨噬細胞培養(yǎng)
            2.2.5 分子克隆
            2.2.6 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取
            2.2.7 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.8 組織細胞RNA提取和熒光定量PCR檢測
            2.2.9 組織細胞總蛋白提取
            2.2.10 蛋白質(zhì)印跡
            2.2.11 免疫共沉淀
            2.2.12 流式細胞術(shù)分析
            2.2.13 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）
            2.2.14 葡萄糖耐受實驗（GTT）
            2.2.15 胰島素耐受實驗（ITT）
            2.2.16 石蠟切片
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 UBE2M巨噬細胞特異性敲除小鼠基因型和細胞表型的鑒定
        3.2 UBE2M缺陷緩解高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖和胰島素抵抗
        3.3 UBE2M缺陷減輕高脂飲食誘導(dǎo)的炎癥性反應(yīng)
        3.4 UBE2M缺陷減輕高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性肝臟脂肪變性
        3.5 UBE2M通過轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控pro-IL-1β前體的表達
        3.6 UBE2M通過調(diào)控VHL E3泛素連接酶復(fù)合物影響HIF-Iα的蛋白穩(wěn)定性以及pro-IL-1β的表達
        3.7 UBE2M對VHL E3泛素連接酶的調(diào)控作用依賴于BRCC3
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第二部分 Fas信號介導(dǎo)的TH9細胞分化促進腸道炎癥和抗腫瘤作用
    1. 引言
    2. 實驗材料及方法
    3. 實驗結(jié)果
    4. 討論
    5. 小結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：3162943