金黃色葡萄球菌是一種重要的人類病原體,能夠引發(fā)多種社區(qū)和醫(yī)院獲得性感染,從相對(duì)輕微的皮膚和軟組織感染到威脅生命的肺炎、骨髓炎和心內(nèi)膜炎等嚴(yán)重感染性疾病。金黃色葡萄球菌的致病性主要與其產(chǎn)生的多種毒力因子有關(guān),如胞外毒素、胞外酶類和表面蛋白粘附因子等。這些毒力因子的表達(dá)受到Agr群體感應(yīng)系統(tǒng)、SarA蛋白家族以及SaeRS二元信號(hào)系統(tǒng)等全局性調(diào)控子的協(xié)同調(diào)控,從而賦予細(xì)菌在不同環(huán)境中生存以及引發(fā)感染的能力。AraC/XylS家族蛋白是一類轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白,其最典型的特征是C末端含有高度保守的、大小為99個(gè)氨基酸殘基的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。該家族蛋白廣泛存在于各種細(xì)菌中,主要參與調(diào)控細(xì)菌碳源代謝、壓力應(yīng)激和致病過程。目前已知在金黃色葡萄球菌中存在6種AraC/XylS家族蛋白,其中Rsp被報(bào)道以agr依賴的方式調(diào)控毒力基因的表達(dá),然而這些靶基因是否受到Rsp的直接調(diào)控尚不清楚。本論文主要研究了金黃色葡萄球菌NCTC8325中Rsp的調(diào)控機(jī)制。首先,我們通過β-半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn)和凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證明Rsp能夠與自身啟動(dòng)子序列結(jié)合,從而正向調(diào)控rsp的表達(dá)。隨后發(fā)現(xiàn)rsp的敲除能夠明顯抑制金黃色葡萄球菌的溶血... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 金黃色葡萄球菌的概述
        1.1.1 金黃色葡萄球菌的簡介
        1.1.2 金黃色葡萄球菌的分布
        1.1.3 金黃色葡萄球菌的基因組及進(jìn)化
        1.1.4 金黃色葡萄球菌分子分型的方法
    1.2 金黃色葡萄球菌的耐藥性及形成機(jī)制
        1.2.1 金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的合成
        1.2.2 PRSA菌株的耐藥機(jī)制
        1.2.3 MRSA菌株的耐藥機(jī)制
        1.2.4 VISA菌株的耐藥機(jī)制
        1.2.5 VRSA菌株的耐藥機(jī)制
    1.3 金黃色葡萄球菌的生物被膜
        1.3.1 生物被膜的簡介
        1.3.2 生物被膜胞外基質(zhì)的成分
        1.3.3 生物被膜的發(fā)育過程
        1.3.4 生物被膜形成的調(diào)控
    1.4 金黃色葡萄球菌的毒力因子及調(diào)控系統(tǒng)
        1.4.1 金黃色葡萄球菌致病性簡介
        1.4.2 金黃色葡萄球菌的毒力因子
        1.4.3 金黃色葡萄球菌毒力因子的表達(dá)調(diào)控
    1.5 AraC/XylS家族蛋白
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所用質(zhì)粒
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)所用試劑
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)所用儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大腸桿菌的培養(yǎng)
        2.2.2 金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)
        2.2.3 大腸桿菌和金黃色葡萄球菌質(zhì)粒抽提
        2.2.4 金黃色葡萄球菌基因組抽提
        2.2.5 目的基因片段的擴(kuò)增
        2.2.6 目的基因片段的純化與回收
        2.2.7 目的基因片段和質(zhì)粒的酶切與連接
        2.2.8 大腸桿菌感受態(tài)制備
        2.2.9 大腸桿菌的化學(xué)轉(zhuǎn)化
        2.2.10 金黃色葡萄球菌感受態(tài)制備
        2.2.11 金黃色葡萄球菌的電轉(zhuǎn)化
        2.2.12 大腸桿菌蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.13 金黃色葡萄球菌質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.14 金黃色葡萄球菌突變菌株的誘導(dǎo)和篩選
        2.2.15 金黃色葡萄球菌總RNA的抽提
        2.2.16 金黃色葡萄球菌mRNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.17 金黃色葡萄球菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.18 蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.19 聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.2.20 蛋白濃度測定
        2.2.21 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)
        2.2.22 Western blot
        2.2.23 生長曲線的測定
        2.2.24 β-半乳糖苷酶的顯色反應(yīng)
        2.2.25 金黃色葡萄球菌溶血活性檢測
        2.2.26 mRNA半衰期測定
        2.2.27 靜態(tài)條件下生物被膜形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.28 細(xì)菌抗生素MIC的檢測
        2.2.29 自溶實(shí)驗(yàn)
        2.2.30 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.31 倫理聲明
        2.2.32 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 金黃色葡萄球菌Rsp參與Hla和PSMs表達(dá)調(diào)控的機(jī)制研究
        3.1.1 Rsp的自我調(diào)控
        3.1.2 Rsp促進(jìn)金黃色葡萄球菌NCTC8325的溶血能力
        3.1.3 Rsp促進(jìn)毒力基因的表達(dá)
        3.1.4 Rsp以agr非依賴的方式調(diào)控金黃色葡萄球菌的溶血能力以及毒力基因的表達(dá)
        3.1.5 Rsp介導(dǎo)的agr非依賴毒力調(diào)控方式不具有菌株特異性
        3.1.6 Rsp直接結(jié)合hla、psma和psmβ的啟動(dòng)子序列
        3.1.7 Rsp促進(jìn)金黃色葡萄球菌在小鼠皮下膿腫模型中的致病性
        3.1.8 Rsp不影響agr突變株在小鼠皮下膿腫模型中的致病性
        3.1.9 Rsp抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成
    3.2 金黃色葡萄球菌AraC/XylS蛋白調(diào)控萬古霉素抗性的研究
1530和SAXN108₂546突變株的構(gòu)建">        3.2.1 SAXN108₁530和SAXN108₂546突變株的構(gòu)建
1530和SAXN108₂546突變株對(duì)萬古霉素的抗性降低">        3.2.2 SAXN108₁530和SAXN108₂546突變株對(duì)萬古霉素的抗性降低
2546突變株對(duì)替考拉寧和達(dá)托霉素的抗性降低">        3.2.3 SAXN108₂546突變株對(duì)替考拉寧和達(dá)托霉素的抗性降低
2546突變株自溶速率增加">        3.2.4 SAXN108₂546突變株自溶速率增加
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與總結(jié)
    4.1 Rsp的自我調(diào)控機(jī)制
    4.2 Rsp介導(dǎo)的agr非依賴毒力調(diào)控機(jī)制
2546調(diào)控萬古霉素抗性的研究">    4.3 SAXN108₂546調(diào)控萬古霉素抗性的研究
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號(hào)：3149832