骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）在機體內(nèi)具有潛在的多方向分化能力,可作為種子細胞參與生物體的組織構(gòu)建與再生,然而怎樣調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞向特定的功能細胞分化仍然存在許多不確定因素,只有充分闡明間骨髓充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化明確的分子調(diào)節(jié)機制,才能對其的誘導(dǎo)分化方向進行特定性地干預(yù)。研究表明轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是現(xiàn)階段傳統(tǒng)的調(diào)控手段,其中表觀遺傳修飾在骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化調(diào)控的進程中起著至關(guān)重要的作用,研究中常用的表觀遺傳方式的調(diào)控主要是蛋白DNA的甲基化修飾。蓬松蛋白（Dishevelled）是涉及典型和非典型Wnt信號通路的蛋白質(zhì)家族。蓬松蛋白是直接作用于卷曲受體下游的細胞質(zhì)磷蛋白,其在胚胎和成年人之間都發(fā)揮重要作用,影響著從細胞分化和細胞極性到社會行為的整個過程。研究目的:本論文通過構(gòu)建人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化模型,利用特異性的DNA甲基化抑制劑（5-氮雜-2’-脫氧胞嘧啶）來研究蓬松蛋白中DNA啟動子區(qū)CpG島的甲基化修飾對骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化的進程影響和調(diào)控作用,并探討甲基化修飾對差異表達性基因表達水平的影... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

通過茜紅素染色檢測人骨髓間充質(zhì)干細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)分化狀態(tài)，時間分別為0、7、10、14、21天

蓬松蛋白的DNA甲基化修飾調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的研究31圖1-2.BMSCs成骨分化過程中AKP檢測，時間分別為0、7、10、14、21天。1.3.2骨髓間充質(zhì)干細胞中蓬松蛋白的表達在4組骨髓間充質(zhì)干細胞在成骨培養(yǎng)基中分別誘導(dǎo)分化培養(yǎng)0、7、14和21天后，通過逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)檢測細胞分化過程中蓬松蛋白基因的mRNA表達水平，蛋白印跡法用來檢測蓬松蛋白中蛋白的表達量（圖1-3），實驗結(jié)果顯示隨著骨髓間充質(zhì)干細胞的分化程度不斷加深，其細胞內(nèi)的蓬松蛋白的表達水平隨著成骨誘導(dǎo)分化的過程加深而升高，并且在干細胞分化的第21天達到表達的峰值。圖1-3.RT-PCR和蛋白印跡法檢測BMSCs成骨誘導(dǎo)分化過程中蓬松蛋白基因的表達水平，檢測時間分別為0,7,14,21天。

蓬松蛋白的DNA甲基化修飾調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的研究31圖1-2.BMSCs成骨分化過程中AKP檢測，時間分別為0、7、10、14、21天。1.3.2骨髓間充質(zhì)干細胞中蓬松蛋白的表達在4組骨髓間充質(zhì)干細胞在成骨培養(yǎng)基中分別誘導(dǎo)分化培養(yǎng)0、7、14和21天后，通過逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)檢測細胞分化過程中蓬松蛋白基因的mRNA表達水平，蛋白印跡法用來檢測蓬松蛋白中蛋白的表達量（圖1-3），實驗結(jié)果顯示隨著骨髓間充質(zhì)干細胞的分化程度不斷加深，其細胞內(nèi)的蓬松蛋白的表達水平隨著成骨誘導(dǎo)分化的過程加深而升高，并且在干細胞分化的第21天達到表達的峰值。圖1-3.RT-PCR和蛋白印跡法檢測BMSCs成骨誘導(dǎo)分化過程中蓬松蛋白基因的表達水平，檢測時間分別為0,7,14,21天。


本文編號：3134084