[研究背景及目的]前列腺癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤之一,在歐美國家,其發(fā)病率居男性惡性腫瘤之首,死亡率僅次于肺癌,在我國,前列腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢。前列腺癌患者早期無明顯癥狀,近一半患者初診時已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移,喪失根治手術(shù)機會。目前針對轉(zhuǎn)移性前列腺癌臨床首選雄激素剝奪治療,但大多數(shù)患者雄激素剝奪治療后2年左右轉(zhuǎn)變成轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌。而針對轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌患者臨床有效治療方法有限,患者預(yù)后也差。成為臨床治療難題。因此,深入研究和探討前列腺癌轉(zhuǎn)移的分子機制,找到新的分子標記物或治療靶標,是當(dāng)前的一個研究熱點。這些科研成果也將加強和促進臨床問題的解決。我們結(jié)合網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫以及自己實驗中的發(fā)現(xiàn),想通過已有的分子生物學(xué)研究方法,深入發(fā)掘轉(zhuǎn)移性前列腺癌細胞中EN1調(diào)控的關(guān)鍵靶基因,構(gòu)建EN1基因表達調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并闡明其分子機制。為臨床治療轉(zhuǎn)移性前列腺癌提供新思路。[方法]1.對來自美國紐約“紀念斯隆-凱特林癌癥中心（MSKCC）和匹茲堡大學(xué)的2個的前列腺癌樣本庫mRNA表達譜芯片分析EN1在前列腺癌轉(zhuǎn)移灶中的表達水平,比較轉(zhuǎn)移性前列腺癌與局限性前列腺癌中EN1的表達差異。2.通過小... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程??

第２章轉(zhuǎn)錄因子ＥＮ１可以促進前列腺癌細胞的侵襲??此時的轉(zhuǎn)染效率（熒光／總體的比例）應(yīng)達到７０％以上為最佳。??第四天：??１．收集轉(zhuǎn)染４８?ｈ后的病毒液并換新鮮培養(yǎng)基１０?ｍｌ，待７２?ｈ后再次收集病毒液。??２．?３?０００?ｒ／ｍｉｎ離心２０?ｍｉｎ，０．４５?ｌａｍ濾膜過濾，去除細胞沉淀。??３．?１２?００〇１７〇１；１１離心濃縮細胞、分裝－８０°０貯存。??２．３實驗結(jié)果??首先，我們對來自美國紐約紀念斯�。瓌P特林癌癥中心（ＭＳＫＣＣ）和匹茲堡??大學(xué)的２個的前列腺癌樣本ｍＲＮＡ表達譜芯片分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性前列腺癌細胞??組織中表達的轉(zhuǎn)錄因子ＥＮ１要高于局限性的前列腺癌細胞組織（ｐ＜０．０５），但??在正常的前列腺組織中，轉(zhuǎn)錄因子ＥＮ１的表達量非常相近（圖２－１）。??？?ｔｉｓｓｕｅ?ａｄｊａｃｅｎｔ?ｔｏ?ｔｕｍｏｒ?？?Ｔｕｍｏｒ?？?Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ??＊＊??’〇５??０．００６０???４?１?０．０２７３?Ｑ．Ｑ４５３?１??１０．０－?１?＾??Ｉ?９－５＊?°－０３７１?ｔ?丨去感??＾?＿?９．０－?＇?０．９８６８?０．０１２４?＿?Ｓ－Ｖ?士??〇?１?Ｍ?１?Ｖ?？！??８．５－?？？?ｉ??ｒ?－ｉ：?Ｍ?ｉｉ?？?？??７?０＇?＊＊＊＊＊?＊?Ｐ＜０．０５，?＊？?Ｐ＜０．０１??６．５?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??ｎ＝?２９?１３０?１９?６０?６６?２３??ＧＳＥ＝?２１０３２?６９６１??圖２－１各組別中ＥＮＩ的表達量統(tǒng)計分析??３６??

４００．?ｈ?〇?風(fēng)咖以??．＊？？？＇；?ｒ?．．；？?，．．．＇？、、“：?＇?．?Ｖ?｜?３００．?■一＊??．ＵＷ?Ｃ４－２?ＰＣ－３??ｃ??ｐＬＫＯ－ｌｕｃ?ｓｈＥＮｌ＃ｌ?ｓｈＥＮｌ＃２??８０?＂Ｉ?★??３?｜｜６０＊?Ｉ?廠?Ｈ??＾?■�。�，《－’－?■§．?ｇ?４０?－?￣??ｒ－ｒ?＝?ｉＴｉ??ｒｎ?Ｓ?１２０－??＾?＾■〇１１」＿１螽?１，１＿蠢??Ｃ４－２?ＰＣ－３??．＾?ｖ？ｎＳｒｔ＜Ｋ－ｏ－＇??圖２－２敲低ＥＮＩ顯著抑制Ｃ４－２和ＰＣ３細胞的遷移能力??Ａ．在Ｃ４－２和ＰＣ３細胞中，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ＥＮ１蛋白質(zhì)水平的相對表達量，驗證ｓｌｉＲＮＡ??敲低ＥＮ１的皴果。Ｂ．?Ｃ４－２和ＰＣ３細胞敲低ＥＮ１后，鋪細胞于ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室中，培養(yǎng)３６??小時后對穿過ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的細胞進行結(jié)晶紫染色后計數(shù)（放大倍數(shù)１００Ｘ，Ｂａｒ：２００?ｕ?ｍ）。??結(jié)果顯示三次獨立實驗的平均值±標準誤。Ｃ．?Ｃ４－２和ＰＣ３細胞中敲低ＥＮ１后，基質(zhì)膠３Ｄ??培養(yǎng)１１天后，評估細胞球偽足數(shù)量（放大倍數(shù)２００Ｘ，Ｂａｒ２００ｕｍ）。＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，??＊＊＊ｐ＜〇＿〇〇ｌ，ｎｓ：?ｎｏｎ－ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ?／ｔｅｓｔ）。??３８??


本文編號：3101685