近幾年,嵌合抗原受體（CAR）免疫療法在B細胞惡性腫瘤的臨床研究中展現(xiàn)出非常好的臨床療效,但是,針對T細胞腫瘤的CAR-T療法仍然面臨著很大的挑戰(zhàn),我們很難找到一個針對T細胞腫瘤的合適靶點,大部分在T細胞腫瘤細胞上高表達的抗原,在正常T細胞上也會表達,這會導(dǎo)致CAR-T細胞產(chǎn)生自相殘殺的現(xiàn)象。CD7分子在大部分的T淋巴細胞白血病細胞中是高表達的,但在一小群正常T淋巴細胞中是不表達的,有研究表明CD7不會對T細胞的發(fā)育和功能產(chǎn)生關(guān)鍵的影響。暗示CD7分子可能是T淋巴細胞白血病的一個理想靶點,但是,由于CD7分子在大部分正常T細胞上也表達,在制備過程中CD7-CAR-T細胞也會產(chǎn)生自殺現(xiàn)象,因此在體外很難制備成功。另外,我們也很難從T淋巴細胞白血病患者的體內(nèi)獲得足夠的沒有被腫瘤細胞污染的正常T細胞來制備CD7-CAR-T細胞。雖然最近有報道顯示,在動物模型中,可以通過同時敲除了CD7和T細胞受體的異體CD7-CAR-T來治療T細胞惡性腫瘤,但在臨床實際應(yīng)用中不能保證100%的基因編輯效率,因此,異體CD7-CAR-T仍然存在移植物抗宿主�。℅VHD）的風(fēng)險。自然殺傷（NK）細胞在對抗惡性細... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２．?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２Ｍ丨和ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ的細胞表面Ｆｃ的表達：ＮＫ－９２ＭＩ為未轉(zhuǎn)染??ＣＡＲ的陰性對照細胞

第一部分?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ鈿胞靶向治療Ｔ細胞腫瘤及雙特異ＣＡＲ－Ｔ細胞靶向治療Ｂ細胞腫瘤??ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細胞中有特異性ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ的表達。??１２?３??ａｎｔｉ－ＣＤ３?Ｉ?＞?＾——８３ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３《?＞?＾——６８ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３?＾??１６ｋＤａ??圖３．ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ表達的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測：在變性條件下通過ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分離??ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?１）?，?ＣＤ７－ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?２）和?ｄＣＤ７－ＮＫ－９２Ｍｌ?（泳道?３）細胞的裂解物。??用ＣＤ３＾Ｉ特弄性抗體進行免疫印跡分析，然后用ＨＲＰ偶聯(lián)的抗體檢測。圖中標出的是內(nèi)源??（１６ＫＤ）和外源嵌合ＣＤ３Ｃ融合蛋白（６８ＫＤ，８３ＫＤ）的位置。??（３）我們通過細胞流式檢測了?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ??細胞表面ＣＤ７的表達。結(jié)果顯示，未轉(zhuǎn)染ＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細胞中ＣＤ７的??陽性率為８．４２?％，而轉(zhuǎn)染了?ＣＤ７－ＣＡＲ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細胞??（ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ）中的?ＣＤ７?陽性率顯著降低，基本??檢測不到ＣＤ７的表達，陽性率都低于１％?（圖４）。這說明了我們構(gòu)建的??ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細胞對ＣＤ７陽性細胞具有靶向性，可??以特異性殺死ＣＤ７陽性的ＮＫ－９２ＭＩ細胞。??ＮＫ－９２ＭＩ?ＣＤ７?ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ?ｄＣＤ７－ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ??Ａ

）和外源嵌合ＣＤ３Ｃ融合蛋白（６８ＫＤ，８３ＫＤ）的位置。??（３）我們通過細胞流式檢測了?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ??細胞表面ＣＤ７的表達。結(jié)果顯示，未轉(zhuǎn)染ＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細胞中ＣＤ７的??陽性率為８．４２?％，而轉(zhuǎn)染了?ＣＤ７－ＣＡＲ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細胞??（ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ）中的?ＣＤ７?陽性率顯著降低，基本??檢測不到ＣＤ７的表達，陽性率都低于１％?（圖４）。這說明了我們構(gòu)建的??ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細胞對ＣＤ７陽性細胞具有靶向性，可??以特異性殺死ＣＤ７陽性的ＮＫ－９２ＭＩ細胞。??ＮＫ－９２ＭＩ?ＣＤ７?ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ?ｄＣＤ７－ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ??Ａ?－１?Ｓｊ??Ｓｉ???Ｓ＇?Ｓ?２??Ｐ?Ｚ－??Ｅ?．．?８Ｒｋ?８，?Ｊ?＾〇－９２％?＾?〇Ｒｌ？?〇－５１％??〇?■?ｆ??—？???１????ｏ?４?■?Ｉ?Ｉ?Ｏ?－－１?Ｉ?，?１?????１０１１?１０２?１０３?１０４?１０ｓ＂４?Ｉ０１１?ｔｏ２?１０３?１０４?１０Ｍ?１０１１?Ｉ０？?１０３?１０４?１０５４???＞??ＣＤ７??圖４．?ＣＤ７－ＣＡＲ轉(zhuǎn)染后ＮＫ－９２ＭＩ細胞后檢測的細胞表面ＣＤ７分子的變化。分別用細胞流式檢??２８??


本文編號：3100225