近幾年,嵌合抗原受體（CAR）免疫療法在B細(xì)胞惡性腫瘤的臨床研究中展現(xiàn)出非常好的臨床療效,但是,針對(duì)T細(xì)胞腫瘤的CAR-T療法仍然面臨著很大的挑戰(zhàn),我們很難找到一個(gè)針對(duì)T細(xì)胞腫瘤的合適靶點(diǎn),大部分在T細(xì)胞腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)的抗原,在正常T細(xì)胞上也會(huì)表達(dá),這會(huì)導(dǎo)致CAR-T細(xì)胞產(chǎn)生自相殘殺的現(xiàn)象。CD7分子在大部分的T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞中是高表達(dá)的,但在一小群正常T淋巴細(xì)胞中是不表達(dá)的,有研究表明CD7不會(huì)對(duì)T細(xì)胞的發(fā)育和功能產(chǎn)生關(guān)鍵的影響。暗示CD7分子可能是T淋巴細(xì)胞白血病的一個(gè)理想靶點(diǎn),但是,由于CD7分子在大部分正常T細(xì)胞上也表達(dá),在制備過(guò)程中CD7-CAR-T細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生自殺現(xiàn)象,因此在體外很難制備成功。另外,我們也很難從T淋巴細(xì)胞白血病患者的體內(nèi)獲得足夠的沒(méi)有被腫瘤細(xì)胞污染的正常T細(xì)胞來(lái)制備CD7-CAR-T細(xì)胞。雖然最近有報(bào)道顯示,在動(dòng)物模型中,可以通過(guò)同時(shí)敲除了CD7和T細(xì)胞受體的異體CD7-CAR-T來(lái)治療T細(xì)胞惡性腫瘤,但在臨床實(shí)際應(yīng)用中不能保證100%的基因編輯效率,因此,異體CD7-CAR-T仍然存在移植物抗宿主�。℅VHD）的風(fēng)險(xiǎn)。自然殺傷（NK）細(xì)胞在對(duì)抗惡性細(xì)... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：144 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２．?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２Ｍ丨和ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ的細(xì)胞表面Ｆｃ的表達(dá)：ＮＫ－９２ＭＩ為未轉(zhuǎn)染??ＣＡＲ的陰性對(duì)照細(xì)胞

第一部分?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ鈿胞靶向治療Ｔ細(xì)胞腫瘤及雙特異ＣＡＲ－Ｔ細(xì)胞靶向治療Ｂ細(xì)胞腫瘤??ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞中有特異性ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ的表達(dá)。??１２?３??ａｎｔｉ－ＣＤ３?Ｉ?＞?＾——８３ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３《?＞?＾——６８ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３?＾??１６ｋＤａ??圖３．ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ表達(dá)的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)：在變性條件下通過(guò)ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分離??ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?１）?，?ＣＤ７－ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?２）和?ｄＣＤ７－ＮＫ－９２Ｍｌ?（泳道?３）細(xì)胞的裂解物。??用ＣＤ３＾Ｉ特弄性抗體進(jìn)行免疫印跡分析，然后用ＨＲＰ偶聯(lián)的抗體檢測(cè)。圖中標(biāo)出的是內(nèi)源??（１６ＫＤ）和外源嵌合ＣＤ３Ｃ融合蛋白（６８ＫＤ，８３ＫＤ）的位置。??（３）我們通過(guò)細(xì)胞流式檢測(cè)了?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ??細(xì)胞表面ＣＤ７的表達(dá)。結(jié)果顯示，未轉(zhuǎn)染ＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞中ＣＤ７的??陽(yáng)性率為８．４２?％，而轉(zhuǎn)染了?ＣＤ７－ＣＡＲ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞??（ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ）中的?ＣＤ７?陽(yáng)性率顯著降低，基本??檢測(cè)不到ＣＤ７的表達(dá)，陽(yáng)性率都低于１％?（圖４）。這說(shuō)明了我們構(gòu)建的??ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞對(duì)ＣＤ７陽(yáng)性細(xì)胞具有靶向性，可??以特異性殺死ＣＤ７陽(yáng)性的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞。??ＮＫ－９２ＭＩ?ＣＤ７?ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ?ｄＣＤ７－ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ??Ａ

）和外源嵌合ＣＤ３Ｃ融合蛋白（６８ＫＤ，８３ＫＤ）的位置。??（３）我們通過(guò)細(xì)胞流式檢測(cè)了?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ??細(xì)胞表面ＣＤ７的表達(dá)。結(jié)果顯示，未轉(zhuǎn)染ＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞中ＣＤ７的??陽(yáng)性率為８．４２?％，而轉(zhuǎn)染了?ＣＤ７－ＣＡＲ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞??（ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ）中的?ＣＤ７?陽(yáng)性率顯著降低，基本??檢測(cè)不到ＣＤ７的表達(dá)，陽(yáng)性率都低于１％?（圖４）。這說(shuō)明了我們構(gòu)建的??ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞對(duì)ＣＤ７陽(yáng)性細(xì)胞具有靶向性，可??以特異性殺死ＣＤ７陽(yáng)性的ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞。??ＮＫ－９２ＭＩ?ＣＤ７?ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ?ｄＣＤ７－ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ??Ａ?－１?Ｓｊ??Ｓｉ???Ｓ＇?Ｓ?２??Ｐ?Ｚ－??Ｅ?．．?８Ｒｋ?８，?Ｊ?＾〇－９２％?＾?〇Ｒｌ？?〇－５１％??〇?■?ｆ??—？???１????ｏ?４?■?Ｉ?Ｉ?Ｏ?－－１?Ｉ?，?１?????１０１１?１０２?１０３?１０４?１０ｓ＂４?Ｉ０１１?ｔｏ２?１０３?１０４?１０Ｍ?１０１１?Ｉ０？?１０３?１０４?１０５４???＞??ＣＤ７??圖４．?ＣＤ７－ＣＡＲ轉(zhuǎn)染后ＮＫ－９２ＭＩ細(xì)胞后檢測(cè)的細(xì)胞表面ＣＤ７分子的變化。分別用細(xì)胞流式檢??２８??


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