阿帕替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌氨基酸代謝及免疫微環(huán)境的影響及機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-03-22 21:37
第一部分:阿帕替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌氨基酸代謝的影響及機(jī)制探討目的:探索阿帕替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌氨基酸代謝的影響及相應(yīng)的調(diào)控機(jī)制。方法:將阿帕替尼作用于人源性非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）細(xì)胞系A(chǔ)549及H460。使用CCK8、Ed U試劑盒及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖;Annexin V/PI流式雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡;周期試劑盒檢測(cè)細(xì)胞周期分布;Cyto-ID試劑盒、Western blot、GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及透射電鏡檢測(cè)細(xì)胞自噬水平;GC-FID及LC-MS檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氨基酸含量;2-NBDG攝取實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞糖攝取水平;Seahorse實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞糖酵解代謝水平;RNA-seq測(cè)序檢測(cè)相關(guān)調(diào)控通路,并使用si RNA沉默關(guān)鍵基因ATF4（Activating transcription factor4）后進(jìn)行驗(yàn)證;通過(guò)sh RNA沉默H460細(xì)胞中的ATF4表達(dá)后構(gòu)建裸鼠移植瘤模型,根據(jù)移植瘤生長(zhǎng)曲線檢測(cè)阿帕替尼與ATF4沉默的體內(nèi)協(xié)同作用。結(jié)果:（1）阿帕替尼致NSCLC細(xì)胞株增殖被顯著抑制,呈劑量及時(shí)間依賴:中高濃度阿帕替尼可以誘導(dǎo)細(xì)胞...
【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
阿帕替尼對(duì)NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549及H460增殖的影響
華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文24實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿帕替尼作用后兩種細(xì)胞的克隆形成能力均降低，呈劑量依賴性。圖2：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞克隆形成能力的影響。左為克隆圖片，右為克隆數(shù)目統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低濃度阿帕替尼對(duì)A549及H460細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用不顯著藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用常常是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)達(dá)成的。我們使用Annexin-V和PI雙染，流式檢測(cè)不同濃度的阿帕替尼作用于兩種細(xì)胞48h后的凋亡細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在中高濃度藥物（40μM及以上）作用下才出現(xiàn)顯著的凋亡，而在可以抑制細(xì)胞增殖的濃度（20μM）并未出現(xiàn)明顯的凋亡，提示低濃度的阿帕替尼對(duì)腫瘤的抑制作用可能不是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡導(dǎo)致的。圖3：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞凋亡的影響。上為流式圖，下為凋亡細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；NS：無(wú)顯著性差異；***P<0.001。
華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文24實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿帕替尼作用后兩種細(xì)胞的克隆形成能力均降低，呈劑量依賴性。圖2：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞克隆形成能力的影響。左為克隆圖片，右為克隆數(shù)目統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低濃度阿帕替尼對(duì)A549及H460細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用不顯著藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用常常是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)達(dá)成的。我們使用Annexin-V和PI雙染，流式檢測(cè)不同濃度的阿帕替尼作用于兩種細(xì)胞48h后的凋亡細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在中高濃度藥物（40μM及以上）作用下才出現(xiàn)顯著的凋亡，而在可以抑制細(xì)胞增殖的濃度（20μM）并未出現(xiàn)明顯的凋亡，提示低濃度的阿帕替尼對(duì)腫瘤的抑制作用可能不是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡導(dǎo)致的。圖3：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞凋亡的影響。上為流式圖，下為凋亡細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；NS：無(wú)顯著性差異；***P<0.001。
本文編號(hào)：3094519
【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
阿帕替尼對(duì)NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549及H460增殖的影響
華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文24實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿帕替尼作用后兩種細(xì)胞的克隆形成能力均降低，呈劑量依賴性。圖2：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞克隆形成能力的影響。左為克隆圖片，右為克隆數(shù)目統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低濃度阿帕替尼對(duì)A549及H460細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用不顯著藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用常常是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)達(dá)成的。我們使用Annexin-V和PI雙染，流式檢測(cè)不同濃度的阿帕替尼作用于兩種細(xì)胞48h后的凋亡細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在中高濃度藥物（40μM及以上）作用下才出現(xiàn)顯著的凋亡，而在可以抑制細(xì)胞增殖的濃度（20μM）并未出現(xiàn)明顯的凋亡，提示低濃度的阿帕替尼對(duì)腫瘤的抑制作用可能不是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡導(dǎo)致的。圖3：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞凋亡的影響。上為流式圖，下為凋亡細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；NS：無(wú)顯著性差異；***P<0.001。
華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文24實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿帕替尼作用后兩種細(xì)胞的克隆形成能力均降低，呈劑量依賴性。圖2：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞克隆形成能力的影響。左為克隆圖片，右為克隆數(shù)目統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；***P<0.001。2.3低濃度阿帕替尼對(duì)A549及H460細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用不顯著藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用常常是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)達(dá)成的。我們使用Annexin-V和PI雙染，流式檢測(cè)不同濃度的阿帕替尼作用于兩種細(xì)胞48h后的凋亡細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在中高濃度藥物（40μM及以上）作用下才出現(xiàn)顯著的凋亡，而在可以抑制細(xì)胞增殖的濃度（20μM）并未出現(xiàn)明顯的凋亡，提示低濃度的阿帕替尼對(duì)腫瘤的抑制作用可能不是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡導(dǎo)致的。圖3：阿帕替尼對(duì)A549、H460細(xì)胞凋亡的影響。上為流式圖，下為凋亡細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)圖。Ap：阿帕替尼；NS：無(wú)顯著性差異；***P<0.001。
本文編號(hào)：3094519
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/yxlbs/3094519.html
最近更新
教材專著
