發(fā)布時間：2021-03-21 21:52

　　第一部分腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞對吉西他濱化療抵抗目的:誘導(dǎo)建立腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型并鑒定表型,檢測腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對膽管癌細(xì)胞化療耐藥的影響,驗證其對膽管癌細(xì)胞凋亡過程的調(diào)節(jié)。方法:綜合文獻經(jīng)典方案用細(xì)胞因子誘導(dǎo)人單核細(xì)胞THP-1,使其分化為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）,并通過流式細(xì)胞數(shù)及RT-PCR驗證相應(yīng)標(biāo)志物表達。CCK8、流式及WB用以檢測TAM誘導(dǎo)的膽管癌細(xì)胞對吉西他濱化療耐藥,驗證其對于細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:所有巨噬細(xì)胞分型CD11b均高表達,其中M1型CD80與IL12高表達,而M2型CD206與IL10高表達。CCK8結(jié)果顯示顯示TAM條件培養(yǎng)基（CM）顯著降低膽管癌細(xì)胞對吉西他濱的敏感性;流式細(xì)胞學(xué)證明藥物抗性是通過減少吉西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來介導(dǎo)的;WB顯示在TAM-CM孵育時吉西他濱誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞的活化caspase-3表達顯著減少。結(jié)論:腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型建立成功,其通過減少吉西他濱誘導(dǎo)的膽管癌細(xì)胞凋亡來介導(dǎo)化療抵抗。第二部分a PKCι/NF-κB信號通路介導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞耐藥目的:探討a PKCι介導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞耐... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

流式檢測巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化后相關(guān)標(biāo)志物表達

qRT-PCR結(jié)果顯示M1型巨噬細(xì)胞的CD80和IL12較另外兩種表型明顯增加,而M2型巨噬細(xì)胞的CD206和IL10表達較其他兩種表型明顯(圖1-3)。結(jié)果符合相應(yīng)分型標(biāo)志物表達變化。1.3.3.M2-CM能夠增強膽管癌細(xì)胞對于吉西他濱的化療抵抗

為了證明腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)膽管癌細(xì)胞對吉西他濱耐藥,膽管癌細(xì)胞分別在三種不同條件培養(yǎng)基中培養(yǎng):正常培養(yǎng)基,M0-CM和M2-CM。設(shè)置吉西他濱濃度為0uM、0.1uM、1uM、10uM、100uM 5個濃度梯度。CCK-8檢測結(jié)果顯示(圖1-4),隨著吉西他濱濃度增加,TFK-1及EGI-1在三種培養(yǎng)基中細(xì)胞抑制率均逐漸增加;但M2-CM組相較于正常培養(yǎng)基組和M0-CM組,膽管癌細(xì)胞被抑制率明顯降低,提示M2-CM能夠增強膽管癌細(xì)胞對于吉西他濱的化療抵抗。膽管癌細(xì)胞在不同處理時相對數(shù)目變化趨勢與上述趨勢一致。1.3.4.M2-CM顯著抑制吉西他濱誘導(dǎo)的膽管癌細(xì)胞凋亡


本文編號：3093603