手足口�。℉and,Foot and Mouth Disease,HFMD）是主要在夏秋季節(jié)流行的病毒性疾病,由多種腸道病毒感染引起,曾經(jīng)在全世界范圍內(nèi)多次暴發(fā)。目前,臨床前研發(fā)的預(yù)防HFMD的主要候選疫苗為細(xì)胞基質(zhì)全病毒滅活疫苗和病毒樣顆粒（VLP）疫苗。然而,滅活疫苗中除EV-A71和CV-A16外,其它主要血清型病毒難于在人用疫苗基質(zhì)細(xì)胞中生長(zhǎng)。VLP具有產(chǎn)量大、易富集和易純化的特點(diǎn),是疫苗發(fā)展的主要趨勢(shì)之一,目前在人用疫苗和獸用疫苗的研究領(lǐng)域都應(yīng)用廣泛。因此研究昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng),制備CV-A2 VLPs,具有重要的應(yīng)用意義。腸道病毒對(duì)熱極其敏感,溫度升高容易誘導(dǎo)病毒粒子衣殼構(gòu)象改變,從而影響疫苗的免疫原性和保護(hù)效力。因此,研發(fā)一種具備較好耐熱特性的手足口病疫苗,將有效提升手足口疫苗的質(zhì)量。本論文是由兩個(gè)部分構(gòu)成的,主要討論了利用昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)構(gòu)建病毒顆粒以及免疫學(xué)研究和疫苗候選株熱穩(wěn)定株的篩選及免疫學(xué)的初步研究。第一部分:昆蟲(chóng)病毒桿狀系統(tǒng)兼有真核表達(dá)系統(tǒng)和原核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì),最大的優(yōu)點(diǎn)是,可以產(chǎn)生大量的重組蛋白,另外還可以同時(shí)在一個(gè)載體上表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：武漢生物制品研究所湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖0紅色0-1[31]

粒(V毒難也使表達(dá)11.1逆轉(zhuǎn)體系軟件全長(zhǎng)第二章目前，預(yù)VLPs)疫苗難于在人用使得其逐漸達(dá)系統(tǒng)，表實(shí)驗(yàn)結(jié)果目的基因的提取CV-轉(zhuǎn)錄成cDN系后，進(jìn)行將PCR擴(kuò)件拼接測(cè)序長(zhǎng)7401nt，武漢章 柯薩預(yù)防HFMD。然而，滅疫苗基質(zhì)細(xì)漸廣泛應(yīng)用于表達(dá)重組桿狀果的獲得A2-1580R4NA。以cDN行PCR擴(kuò)增注：MFig擴(kuò)增結(jié)果送上序結(jié)果，獲得非編碼區(qū)漢生物制品研究奇病毒A的主要候選滅活疫苗中細(xì)胞中生長(zhǎng)于疫苗領(lǐng)域狀病毒，純4/CHNXY/NA為模板，擴(kuò)增產(chǎn)物：Marker；圖2-1CV-g.2-1CV-A2上海生工生得CV-A2-15’-UTR、3究所2020屆博382病毒選疫苗為細(xì)除EV-A71長(zhǎng)。VLP具有域。本研究的純化獲得rCV/2017株基，加入設(shè)計(jì)物經(jīng)1%的瓊1-5CV-A2部-A2部分序列2partialseque生物工程股份1580R4/CH3’-UTR在基士研究生畢業(yè)毒樣顆粒的細(xì)胞基質(zhì)全病和CV-A1有產(chǎn)量大、易的目的在于利V-A2VLPs因組，使用計(jì)的全基因組瓊脂糖電泳部分序列PC列PCR結(jié)果encePCRres份有限公司NXY/201基因組的核論文的構(gòu)建及病毒滅活疫6外，其它易富集和易利用桿狀病s(insect)。OligodT/R組測(cè)序引物泳檢驗(yàn)，見(jiàn)圖CR結(jié)果sults司測(cè)序，利用7株基因組核苷酸位置分及鑒定疫苗和病毒樣它主要血清型易純化的特點(diǎn)病毒Bac-to-Random引物物，配制好擴(kuò)圖2-1。用SeqMan（7組全序列。序分別為1-74樣顆型病點(diǎn)，-Bac物，擴(kuò)增7.1.0）序列47nt

和（K(Pol和31.2Ⅰ/S和3注：F1.31.3.腸桿IPT說(shuō)明7321-7401X595281.1lyprotein)長(zhǎng)3CD序列位重組質(zhì)粒對(duì)重組質(zhì)SpeⅠ和Xh3CD克隆至a.BamHⅠ/S1:Bamig.2-2IdentCV-A2P1/.1DH10Ba以pFastB桿菌中桿狀TG及X-Ga明2個(gè)目的武漢nt，其中1），3’-U長(zhǎng)度為2191位置，P1：pFastBacD質(zhì)粒的pFastBhoⅠ/SphⅠ至pFastBacDSpeⅠ酶切后mHⅠ/SpeⅠ酶圖2-2：tifiedtargetg/3CD重組cTME.coliBacDual-P1/狀病毒的穿梭al的篩選，基因重組到漢生物制品研究中5’-UTRTR后帶長(zhǎng)1個(gè)氨基酸748-3324nDual-P1/3CBacDual-P1雙酶切，結(jié)Dual質(zhì)粒中后P1片段;b.酶切后，P1片CV-A2P1(agenesofCV-ABacmid的感受態(tài)DN/3CD質(zhì)粒轉(zhuǎn)梭質(zhì)粒發(fā)生培養(yǎng)48h后到了工程菌究所2020屆博39的1-24n長(zhǎng)度未確定殘基，CV-nt，3CD：5CD的鑒定1片段和pF結(jié)果如圖2中。XhoⅠ/Sph片段；2:Xhoa)和CV-A2A2P1(a)and的構(gòu)建A轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化DH10生同源重組，后可見(jiàn)白色菌里的Bacm士研究生畢業(yè)nt極末端序定的多聚A-A2-1580R5383-7317nFastBacDua2-2，片段大Ⅰ酶切后3CDoⅠ/SphⅠ酶23CD(b)基dCV-A23CD0Bac大腸桿經(jīng)慶大霉色菌落和少許mid質(zhì)粒內(nèi)。論文序列為19尾，編碼4/CHNXYnt。al-3CD片段大小符合預(yù)估Dpian段。M酶切后，3CD因鑒定圖D(b)byEnzy桿菌，質(zhì)粒與霉素、四環(huán)素許藍(lán)色菌落。9F引物序碼的多聚蛋Y/2017株的段分別用Ba估值，說(shuō)明：蛋白Mark片段。ymedigestio與DH10Ba素、卡那霉落生長(zhǎng)，圖序列蛋白的P1amH明P1ker；nac大霉素、2-3。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：2998186