研究背景年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）、視網(wǎng)膜色素變性（RP）和Stargardt病等視網(wǎng)膜退行性疾病嚴(yán)重危害視功能,最終可能造成不可逆性盲。視網(wǎng)膜退行性疾病的發(fā)病機(jī)制包括多種視網(wǎng)膜功能相關(guān)基因突變和危險(xiǎn)環(huán)境因素。而過度的光照作為其中一種有害的環(huán)境因素,在視網(wǎng)膜退行性疾病的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用。感光細(xì)胞死亡是視網(wǎng)膜退行性疾病的重要的病理特征,然而光誘導(dǎo)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞死亡的具體機(jī)制尚不十分明確。過度的光照可以引起視網(wǎng)膜的光熱損傷、光機(jī)械損傷和光化學(xué)損傷。其中,光化學(xué)損傷在視網(wǎng)膜光損傷中起主導(dǎo)作用。視網(wǎng)膜在暴露于強(qiáng)光后,視紫紅質(zhì)可以吸收光子并激活電離效應(yīng),形成氧化自由基。過度的光照刺激下自由基的合成降解失衡,產(chǎn)生過量的活性氧簇（ROS）導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平上升,此時(shí)失衡的抗氧化系統(tǒng)無法將產(chǎn)生的活性氧簇有效清除,因此內(nèi)部抗氧化系統(tǒng)受損,最終造成哺乳動(dòng)物視網(wǎng)膜中氧化應(yīng)激的超載。在某些刺激作用下,細(xì)胞凋亡的進(jìn)程受到一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)的有序調(diào)節(jié),其中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）依賴途徑是一種經(jīng)典的凋亡途徑,通過活化一系列半胱氨酸蛋白水解酶來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和炎癥,維持體內(nèi)平衡。它可以... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

慢病毒感染661W細(xì)胞中mTOR、PARP-1蛋白的表達(dá)水平

Hoechst/PI染色

為了探究光損傷條件下感光細(xì)胞中m TOR、PARP-1通路的變化,本實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞分為黑暗正常組(661W)、黑暗對(duì)照組(Scramble)、光照對(duì)照組(Lt Scramble)、光照m TOR敲低組(Lt mTOR KD)、光照PARP-1敲低組(Lt PARP-1KD)。采用Western Blot法對(duì)光損傷條件下的感光細(xì)胞中m TOR、PARP-1通路上蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),以β-actin為內(nèi)參基因,采用Image J軟件測(cè)量不同蛋白條帶的灰度值,并通過計(jì)算獲得m TOR、p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1、PARP-1、PAR、AIF蛋白在不同條件下的相對(duì)表達(dá)含量。結(jié)果如圖2.3所示,與Scramble相比,在光損傷條件下Lt Scramble中p-m TOR、p-4EBP1、p-S6K1、PARP-1、PAR的蛋白表達(dá)水平明顯升高,p-m TOR/mTOR比值上升(??:P<0.01,???:P<0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),說明光損傷激活了m TOR、PARP-1信號(hào)通路;與Scramble相比,Lt Scramble組中AIF活化,出現(xiàn)了一條57k Da的裂解帶(???:P<0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。與Lt Scramble相比,Lt mTOR KD、Lt PARP-1KD中AIF 57kDa裂解帶變淺消失(???:P<0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),說明光損傷激活了AIF信號(hào)通路,m TOR、PARP-1的基因敲除抑制了AIF的活化;與Lt Scramble相比,Lt mTOR KD組中m TOR的基因敲除能有效抑制光損傷條件下PARP-1信號(hào)通路的激活,表現(xiàn)為PARP-1、PAR的表達(dá)下降(??:P<0.01,???:P<0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);與Lt Scramble相比,Lt PARP-1 KD組中PARP-1的基因敲除能有效抑制光損傷條件下m TOR信號(hào)通路的激活,表現(xiàn)為p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1表達(dá)下降,p-mTOR/mTOR比值下降(???:P<0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),證明在光損傷條件下m TOR和PARP-1兩條通路之間互相影響,存在相互作用的關(guān)系。2.6 討論


本文編號(hào)：2985036