腸道菌群在人類健康和疾病中起著重要的作用。腸黏膜表面的黏膜層是腸細胞與腸道菌群相互作用的場所,對維持腸道健康和腸道微生態(tài)平衡至關重要。黏蛋白2（Muc2）是腸黏膜層的主要成分。黏蛋白基因家族中有17個人類黏蛋白基因,根據(jù)其不同的結(jié)構(gòu)主要分為分泌型黏蛋白和膜結(jié)合型黏蛋白兩大類,其中Muc2是第一個被克隆并完全測序的人類分泌型黏蛋白基因,它主要由人結(jié)腸和小腸的杯狀細胞表達,是小腸和大腸黏液的主要成分。Muc2已被證明是對抗外部病原體的重要保護屏障,與多種癌癥疾病相關,如結(jié)直腸癌（CRC）、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌。在CRC中Muc2過表達有助于腫瘤細胞逃避抗腫瘤免疫效應分子的識別從而促進CRC的發(fā)展。Akkermansia muciniphila是腸道菌群的重要組成部分,具有多種生物學功能,如通過自身的蛋白水解酶調(diào)節(jié)Muc2的水平。Akkermansia muciniphila利用黏蛋白作為其生長唯一的碳源和氮源,還能產(chǎn)生多種降解黏蛋白的蛋白,但目前尚不清楚哪些蛋白可以降解黏蛋白。本論文工作主要包括三個部分:第一部分,從Akkermansia muciniphila基因庫中選擇一個編碼... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

Akkermansia muciniphila及其衍生物對宿主代謝的影響[40]

通過MTT法檢測重組蛋白Amuc-1434對LS174T細胞生長的影響。本實驗中,選擇不表達Muc2的人正常黑色素細胞HEM作為對照。將鋪板的細胞用不同濃度的重組蛋白Amuc-1434處理24 h,再加入MTT孵育4 h,其檢測原理為外源性MTT在活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的作用下還原成藍紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細胞中,DMSO可以將細胞的沉積物完全溶解,通過酶標儀測OD492 nm即可間接反映活細胞數(shù)量。細胞存活率為經(jīng)重組蛋白Amuc-1434處理的實驗組和未經(jīng)重組蛋白Amuc-1434處理的對照組各自減去空白組后的比值。結(jié)果如圖4.1(A)所示,重組蛋白Amuc-1434隨著濃度的增高,抑制LS174T細胞生長的能力越強。當2μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細胞后,細胞存活率基本不受影響。當8μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細胞后,細胞存活率為82%。當64μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細胞后,細胞存活率為70%。由此可見,重組蛋白Amuc-1434能夠抑制LS174T細胞的增殖。在圖4.1(B)中,當不同濃度的重組蛋白Amuc-1434處理HEM細胞時,發(fā)現(xiàn)HEM細胞的存活率都保證在95%以上,并不受重組蛋白Amuc-1434濃度的影響,由此說明重組蛋白Amuc-1434對人正常黑色素細胞HEM無細胞毒性作用。此外,由于HEM細胞不表達Muc2,因此,重組蛋白Amuc-1434對LS174T細胞增殖的抑制作用可能與其降解Muc2的能力有關。4.4.2 重組蛋白Amuc-1434對LS174T細胞周期的影響

由于在MTT檢測實驗中8μg/mL重組蛋白Amuc-1434開始對LS174T細胞的增殖有抑制作用,而64μg/mL重組蛋白Amuc-1434對LS174T細胞的增殖有最好的抑制效果,因此在接下來的所有實驗中,設置重組蛋白Amuc-1434低濃度組和高濃度組的濃度分別為8μg/mL和64μg/mL,同時設置的對照組不經(jīng)過重組蛋白Amuc-1434處理。機體對細胞周期的調(diào)控作用影響細胞增殖的快慢。反過來,細胞增殖一旦受到影響,也往往表現(xiàn)為細胞周期構(gòu)成的變化。前面的研究已經(jīng)證實重組蛋白Amuc-1434影響LS174T細胞增殖,因此我們采用流式細胞術檢測重組蛋白Amuc-1434對LS174T細胞周期的影響。圖4.2(A)顯示經(jīng)ModFit LT 5.0分析的對照組、低濃度組和高濃度組的細胞周期圖。在圖4.2(B)和(C)中可以看出,對照組G1期占整個細胞周期的52.97%,低濃度組G1期占整個細胞周期的57.37%,高濃度組G1期占整個細胞周期的63.53%。由此可見,和對照組相比,隨著重組蛋白Amuc-1434濃度的增高,LS174T細胞周期的G1期占整個細胞周期的比例增大。因此,重組蛋白Amuc-1434可以誘導LS174T細胞發(fā)生G1期細胞周期阻滯。除此之外,我們還檢測了重組蛋白Amuc-1434對p53(控制細胞周期啟動的腫瘤抑制因子)蛋白表達的影響。結(jié)果如圖4.3所示,和對照組相比,重組蛋白Amuc-1434處理組中p53蛋白表達上調(diào),并且p53蛋白表達量的變化和重組蛋白Amuc-1434濃度呈正相關。圖4.3重組蛋白Amuc-1434對細胞周期啟動因子p53蛋白表達的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Colorectal carcinogenesis:Insights into the cell death and signal transduction pathways:A review[J]. Ashok kumar Pandurangan,Thomas Divya,Kalaivani Kumar,Vadivel Dineshbabu,Bakthavatchalam Velavan,Ganapasam Sudhandiran.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2018(09)
[2]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[3]Colorectal carcinogenesis-update and perspectives[J]. Hans Raskov,Hans-Christian Pommergaard,Jakob Burcharth,Jacob Rosenberg.  World Journal of Gastroenterology. 2014(48)
[4]Early stage colon cancer[J]. Hugh James Freeman.  World Journal of Gastroenterology. 2013(46)
[5]粘蛋白和上皮鈣粘附蛋白在結(jié)直腸腫瘤組織中的表達及其意義[J]. 于秀文,榮瑋,徐鳳琳,徐廣有,孫玉榮,馮美燕.  癌癥. 2007(11)
[6]線粒體途徑在腫瘤壞死因子凋亡誘導配體誘導結(jié)腸癌細胞凋亡中的調(diào)節(jié)作用[J]. 郝繼輝,俞鳴,李強,史玉榮,楊毅,郝希山.  中華胃腸外科雜志. 2006(06)



本文編號：2940095