腸道菌群在人類健康和疾病中起著重要的作用。腸黏膜表面的黏膜層是腸細(xì)胞與腸道菌群相互作用的場(chǎng)所,對(duì)維持腸道健康和腸道微生態(tài)平衡至關(guān)重要。黏蛋白2（Muc2）是腸黏膜層的主要成分。黏蛋白基因家族中有17個(gè)人類黏蛋白基因,根據(jù)其不同的結(jié)構(gòu)主要分為分泌型黏蛋白和膜結(jié)合型黏蛋白兩大類,其中Muc2是第一個(gè)被克隆并完全測(cè)序的人類分泌型黏蛋白基因,它主要由人結(jié)腸和小腸的杯狀細(xì)胞表達(dá),是小腸和大腸黏液的主要成分。Muc2已被證明是對(duì)抗外部病原體的重要保護(hù)屏障,與多種癌癥疾病相關(guān),如結(jié)直腸癌（CRC）、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌。在CRC中Muc2過表達(dá)有助于腫瘤細(xì)胞逃避抗腫瘤免疫效應(yīng)分子的識(shí)別從而促進(jìn)CRC的發(fā)展。Akkermansia muciniphila是腸道菌群的重要組成部分,具有多種生物學(xué)功能,如通過自身的蛋白水解酶調(diào)節(jié)Muc2的水平。Akkermansia muciniphila利用黏蛋白作為其生長(zhǎng)唯一的碳源和氮源,還能產(chǎn)生多種降解黏蛋白的蛋白,但目前尚不清楚哪些蛋白可以降解黏蛋白。本論文工作主要包括三個(gè)部分:第一部分,從Akkermansia muciniphila基因庫(kù)中選擇一個(gè)編碼... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

Akkermansia muciniphila及其衍生物對(duì)宿主代謝的影響[40]

通過MTT法檢測(cè)重組蛋白Amuc-1434對(duì)LS174T細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。本實(shí)驗(yàn)中,選擇不表達(dá)Muc2的人正常黑色素細(xì)胞HEM作為對(duì)照。將鋪板的細(xì)胞用不同濃度的重組蛋白Amuc-1434處理24 h,再加入MTT孵育4 h,其檢測(cè)原理為外源性MTT在活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的作用下還原成藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細(xì)胞中,DMSO可以將細(xì)胞的沉積物完全溶解,通過酶標(biāo)儀測(cè)OD492 nm即可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。細(xì)胞存活率為經(jīng)重組蛋白Amuc-1434處理的實(shí)驗(yàn)組和未經(jīng)重組蛋白Amuc-1434處理的對(duì)照組各自減去空白組后的比值。結(jié)果如圖4.1(A)所示,重組蛋白Amuc-1434隨著濃度的增高,抑制LS174T細(xì)胞生長(zhǎng)的能力越強(qiáng)。當(dāng)2μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細(xì)胞后,細(xì)胞存活率基本不受影響。當(dāng)8μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細(xì)胞后,細(xì)胞存活率為82%。當(dāng)64μg/mL重組蛋白Amuc-1434處理LS174T細(xì)胞后,細(xì)胞存活率為70%。由此可見,重組蛋白Amuc-1434能夠抑制LS174T細(xì)胞的增殖。在圖4.1(B)中,當(dāng)不同濃度的重組蛋白Amuc-1434處理HEM細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)HEM細(xì)胞的存活率都保證在95%以上,并不受重組蛋白Amuc-1434濃度的影響,由此說明重組蛋白Amuc-1434對(duì)人正常黑色素細(xì)胞HEM無(wú)細(xì)胞毒性作用。此外,由于HEM細(xì)胞不表達(dá)Muc2,因此,重組蛋白Amuc-1434對(duì)LS174T細(xì)胞增殖的抑制作用可能與其降解Muc2的能力有關(guān)。4.4.2 重組蛋白Amuc-1434對(duì)LS174T細(xì)胞周期的影響

由于在MTT檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中8μg/mL重組蛋白Amuc-1434開始對(duì)LS174T細(xì)胞的增殖有抑制作用,而64μg/mL重組蛋白Amuc-1434對(duì)LS174T細(xì)胞的增殖有最好的抑制效果,因此在接下來的所有實(shí)驗(yàn)中,設(shè)置重組蛋白Amuc-1434低濃度組和高濃度組的濃度分別為8μg/mL和64μg/mL,同時(shí)設(shè)置的對(duì)照組不經(jīng)過重組蛋白Amuc-1434處理。機(jī)體對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控作用影響細(xì)胞增殖的快慢。反過來,細(xì)胞增殖一旦受到影響,也往往表現(xiàn)為細(xì)胞周期構(gòu)成的變化。前面的研究已經(jīng)證實(shí)重組蛋白Amuc-1434影響LS174T細(xì)胞增殖,因此我們采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重組蛋白Amuc-1434對(duì)LS174T細(xì)胞周期的影響。圖4.2(A)顯示經(jīng)ModFit LT 5.0分析的對(duì)照組、低濃度組和高濃度組的細(xì)胞周期圖。在圖4.2(B)和(C)中可以看出,對(duì)照組G1期占整個(gè)細(xì)胞周期的52.97%,低濃度組G1期占整個(gè)細(xì)胞周期的57.37%,高濃度組G1期占整個(gè)細(xì)胞周期的63.53%。由此可見,和對(duì)照組相比,隨著重組蛋白Amuc-1434濃度的增高,LS174T細(xì)胞周期的G1期占整個(gè)細(xì)胞周期的比例增大。因此,重組蛋白Amuc-1434可以誘導(dǎo)LS174T細(xì)胞發(fā)生G1期細(xì)胞周期阻滯。除此之外,我們還檢測(cè)了重組蛋白Amuc-1434對(duì)p53(控制細(xì)胞周期啟動(dòng)的腫瘤抑制因子)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果如圖4.3所示,和對(duì)照組相比,重組蛋白Amuc-1434處理組中p53蛋白表達(dá)上調(diào),并且p53蛋白表達(dá)量的變化和重組蛋白Amuc-1434濃度呈正相關(guān)。圖4.3重組蛋白Amuc-1434對(duì)細(xì)胞周期啟動(dòng)因子p53蛋白表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Colorectal carcinogenesis:Insights into the cell death and signal transduction pathways:A review[J]. Ashok kumar Pandurangan,Thomas Divya,Kalaivani Kumar,Vadivel Dineshbabu,Bakthavatchalam Velavan,Ganapasam Sudhandiran.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2018(09)
[2]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[3]Colorectal carcinogenesis-update and perspectives[J]. Hans Raskov,Hans-Christian Pommergaard,Jakob Burcharth,Jacob Rosenberg.  World Journal of Gastroenterology. 2014(48)
[4]Early stage colon cancer[J]. Hugh James Freeman.  World Journal of Gastroenterology. 2013(46)
[5]粘蛋白和上皮鈣粘附蛋白在結(jié)直腸腫瘤組織中的表達(dá)及其意義[J]. 于秀文,榮瑋,徐鳳琳,徐廣有,孫玉榮,馮美燕.  癌癥. 2007(11)
[6]線粒體途徑在腫瘤壞死因子凋亡誘導(dǎo)配體誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的調(diào)節(jié)作用[J]. 郝繼輝,俞鳴,李強(qiáng),史玉榮,楊毅,郝希山.  中華胃腸外科雜志. 2006(06)



本文編號(hào)：2940095