目的:宮頸癌是全球目前嚴(yán)重威脅女性健康且腫瘤惡性程度最高的腫瘤之一,發(fā)達(dá)國家的宮頸癌患者在醫(yī)療技術(shù)逐漸發(fā)展的今天,其患者的致死率已經(jīng)有了一定的好轉(zhuǎn),但對于發(fā)展中國家、經(jīng)濟(jì)或醫(yī)療條件欠佳的國家,宮頸癌的發(fā)病率以及致死率仍然居高不下。在我國宮頸癌是女性腫瘤中十分嚴(yán)重的惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅著患者的健康及其家庭的精神以及經(jīng)濟(jì)情況。在我國對于宮頸癌的治療主要是通過手術(shù)切除腫瘤組織以及癌旁組織,以及結(jié)合放化療等的綜合治療。但是,根據(jù)臨床數(shù)據(jù)以及患者的術(shù)后隨訪發(fā)現(xiàn),多數(shù)宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的患者面臨著化療藥物耐藥的情況,因此為有效治療宮頸癌帶來了巨大的困難,所以,能夠?qū)ふ业叫碌母咝У闹委煼绞交蛘咝碌挠行е委熕幬?對于宮頸癌術(shù)后的輔助治療,延緩或避免宮頸癌的復(fù)發(fā)以及增加患者的生存時間是目前臨床迫切需要的。本文旨在通過探討多梳蛋白家族(PcG)中的色素框同源蛋白8(CBX8)對宮頸癌的相關(guān)生物過程的影響及其潛在的作用機(jī)制,為發(fā)現(xiàn)診斷和治療宮頸癌新的分子激活基因、研發(fā)新的抗宮頸癌藥物與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:第一部分:首先通過構(gòu)建CBX8過表達(dá)慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細(xì)胞SiHa細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,設(shè)置實驗組分別為未感染組(Control),感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組(Empty vector)以及感染CBX8過表達(dá)慢病毒組(OE-CBX8)。分別采用CCK-8,劃痕實驗以及Transwell實驗檢測CBX8對各實驗組的細(xì)胞活力,遷移和侵襲能力的影響;其次,我們進(jìn)行了裸鼠體內(nèi)成瘤實驗。最后,分別采用RT-PCR和Western blot法檢測細(xì)胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA以及相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,初步探究CBX8的作用機(jī)制。第二部分:首先通過構(gòu)建CBX8過表達(dá)慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細(xì)胞SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,設(shè)置實驗組分別為感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組(Empty vector)、感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒+AG490組(Empty vector+AG490)、感染CBX8過表達(dá)慢病毒組(OE-CBX8),感染CBX8過表達(dá)慢病毒+AG490組(OE-CBX8+AG490)。采用CCK-8,劃痕實驗以及Transwell實驗檢測JAK/STAT3通路抑制劑AG490對各實驗組細(xì)胞活力,遷移以及侵襲能力的影響。然后采用RT-PCR和Western blot檢測各組細(xì)胞中STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21mRNA以及相關(guān)蛋白的表達(dá),明確CBX8與JAK/STAT3通路之間的相互作用以及對宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響。結(jié)果:第一部分:結(jié)果表明過表達(dá)的CBX8轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細(xì)胞后,其細(xì)胞的增殖以及侵襲遷移能力顯著增強(qiáng)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,結(jié)果證明CBX8的過表達(dá)可以顯著增強(qiáng)宮頸癌的細(xì)胞活力,促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。為了證明在體內(nèi)復(fù)雜的環(huán)境下,CBX8對宮頸癌的影響,裸鼠成瘤實驗的結(jié)果證明了過表達(dá)的CBX8可促進(jìn)裸鼠體內(nèi)成瘤的體積和重量顯著上升。為進(jìn)一步研究其在宮頸癌發(fā)展中的作用,RT-PCR和Western blot的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)與Control組相比,Empty vector組宮頸癌SiHa細(xì)胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量均無明顯變化,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組宮頸癌SiHa細(xì)胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量被顯著上調(diào)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。第二部分:結(jié)果表明與Empty vector組相比,Empty vector+AG490組宮頸癌細(xì)胞SiHa的細(xì)胞活力以及侵襲遷移能力顯著下降(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組的宮頸癌細(xì)胞SiHa的細(xì)胞活力以及侵襲遷移能力顯著增強(qiáng)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與OE-CBX8組相比,OE-CBX8+AG490組的宮頸癌細(xì)胞活力以及侵襲遷移能力顯著下降(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。分別采用RT-PCR和Western blot檢測各組細(xì)胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示,與Empty vector組相比,Empty vector+AG490組宮頸癌細(xì)胞SiHa的細(xì)胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量被顯著下調(diào)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組的宮頸癌SiHa細(xì)胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量顯著被上調(diào)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與OE-CBX8組相比,OE-CBX8+AG490組的宮頸癌細(xì)胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量被顯著下調(diào)(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:(1)CBX8可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用。(2)CBX8可上調(diào)宮頸癌細(xì)胞中相關(guān)JAK/STAT3信號通路STAT3、Bcl-2、p21mRNA以及STAT3、p-STAT3(ser727)Bcl-2、p21蛋白的表達(dá)量。(3)JAK/STAT3通路抑制劑AG490可顯著逆轉(zhuǎn)由CBX8過表達(dá)導(dǎo)致的宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的上調(diào)。(4)JAK/STAT3通路抑制劑AG490可顯著逆轉(zhuǎn)CBX8過表達(dá)導(dǎo)致的宮頸癌細(xì)胞中JAK/STAT3通路相關(guān)mRNA以及蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào)。(5)CBX8通過激活JAK/STAT3信號通路促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

本研究通過構(gòu)建CBX8過表達(dá)慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細(xì)胞SiHa細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,設(shè)置實驗組分別為未感染組(Control),感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組(Empty vector)以及感染CBX8過表達(dá)慢病毒組(OE-CBX8)。采用CCK-8檢測CBX8對各組細(xì)胞活力的影響,Control組,Empty vector組和OE-CBX8組的OD值分為(0.63±0.10)、(0.74±0.08)、(1.16±0.10)。結(jié)果如圖1-1所示:與Control組相比,感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組宮頸癌細(xì)胞SiHa的細(xì)胞活力無明顯變化,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組相比,感染CBX8過表達(dá)慢病毒組的宮頸癌細(xì)胞SiHa的細(xì)胞活力顯著增強(qiáng)(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,結(jié)果證明CBX8的過表達(dá)可以顯著增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞活力,促進(jìn)細(xì)胞增殖。2.2 劃痕實驗檢測細(xì)胞的遷移能力

劃痕實驗檢測CBX8對宮頸癌細(xì)胞遷移能力的影響。未感染(Control)組、感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒(Empty vector)組、感染CBX8過表達(dá)慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌細(xì)胞SiHa的遷移率分別為(52.00±8.19)%、(56.33±9.07)%、(83.00±3.60)%。結(jié)果如圖1-2所示:與未感染(Control)組相比,感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒(Empty vector)組宮頸癌細(xì)胞SiHa的遷移能力無明顯變化(P>0.05),差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義;與感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒(Empty vector)組相比,感染CBX8過表達(dá)慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌細(xì)胞SiHa的遷移能力顯著增強(qiáng)(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,結(jié)果證明CBX8的過表達(dá)可以顯著增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的遷移能力。2.3 Transwell實驗檢測細(xì)胞侵襲的能力

Transwell實驗檢測CBX8對宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響。未感染(Control)組、感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒(Empty vector)組、感染CBX8過表達(dá)慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌SiHa細(xì)胞的數(shù)量分別為(155.67±9.61)、(157.67±13.20)、(236.33±15.70)。結(jié)果如圖1-3所示:與未感染組相比,感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組穿出Transwell小室的宮頸癌SiHa細(xì)胞的數(shù)量無明顯變化(P>0.05),差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義;與感染CBX8過表達(dá)空載體慢病毒組相比,感染CBX8過表達(dá)慢病毒組穿出Transwell小室的宮頸癌SiHa細(xì)胞的數(shù)量顯著增高(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,結(jié)果證明CBX8的過表達(dá)可以顯著增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力。2.4 RT-PCR檢測各組細(xì)胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA的表達(dá)
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本文編號：2874401