目的:宮頸癌是全球目前嚴重威脅女性健康且腫瘤惡性程度最高的腫瘤之一,發(fā)達國家的宮頸癌患者在醫(yī)療技術逐漸發(fā)展的今天,其患者的致死率已經(jīng)有了一定的好轉,但對于發(fā)展中國家、經(jīng)濟或醫(yī)療條件欠佳的國家,宮頸癌的發(fā)病率以及致死率仍然居高不下。在我國宮頸癌是女性腫瘤中十分嚴重的惡性腫瘤,嚴重威脅著患者的健康及其家庭的精神以及經(jīng)濟情況。在我國對于宮頸癌的治療主要是通過手術切除腫瘤組織以及癌旁組織,以及結合放化療等的綜合治療。但是,根據(jù)臨床數(shù)據(jù)以及患者的術后隨訪發(fā)現(xiàn),多數(shù)宮頸癌術后復發(fā)的患者面臨著化療藥物耐藥的情況,因此為有效治療宮頸癌帶來了巨大的困難,所以,能夠尋找到新的高效的治療方式或者新的有效治療藥物,對于宮頸癌術后的輔助治療,延緩或避免宮頸癌的復發(fā)以及增加患者的生存時間是目前臨床迫切需要的。本文旨在通過探討多梳蛋白家族(PcG)中的色素框同源蛋白8(CBX8)對宮頸癌的相關生物過程的影響及其潛在的作用機制,為發(fā)現(xiàn)診斷和治療宮頸癌新的分子激活基因、研發(fā)新的抗宮頸癌藥物與臨床應用提供理論依據(jù)。方法:第一部分:首先通過構建CBX8過表達慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細胞SiHa細胞進行轉染,設置實驗組分別為未感染組(Control),感染CBX8過表達空載體慢病毒組(Empty vector)以及感染CBX8過表達慢病毒組(OE-CBX8)。分別采用CCK-8,劃痕實驗以及Transwell實驗檢測CBX8對各實驗組的細胞活力,遷移和侵襲能力的影響;其次,我們進行了裸鼠體內成瘤實驗。最后,分別采用RT-PCR和Western blot法檢測細胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA以及相關蛋白的表達情況,初步探究CBX8的作用機制。第二部分:首先通過構建CBX8過表達慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細胞SiHa細胞轉染后,設置實驗組分別為感染CBX8過表達空載體慢病毒組(Empty vector)、感染CBX8過表達空載體慢病毒+AG490組(Empty vector+AG490)、感染CBX8過表達慢病毒組(OE-CBX8),感染CBX8過表達慢病毒+AG490組(OE-CBX8+AG490)。采用CCK-8,劃痕實驗以及Transwell實驗檢測JAK/STAT3通路抑制劑AG490對各實驗組細胞活力,遷移以及侵襲能力的影響。然后采用RT-PCR和Western blot檢測各組細胞中STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21mRNA以及相關蛋白的表達,明確CBX8與JAK/STAT3通路之間的相互作用以及對宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響。結果:第一部分:結果表明過表達的CBX8轉染宮頸癌SiHa細胞后,其細胞的增殖以及侵襲遷移能力顯著增強(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義,結果證明CBX8的過表達可以顯著增強宮頸癌的細胞活力,促進細胞增殖和轉移。為了證明在體內復雜的環(huán)境下,CBX8對宮頸癌的影響,裸鼠成瘤實驗的結果證明了過表達的CBX8可促進裸鼠體內成瘤的體積和重量顯著上升。為進一步研究其在宮頸癌發(fā)展中的作用,RT-PCR和Western blot的研究結果發(fā)現(xiàn)與Control組相比,Empty vector組宮頸癌SiHa細胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達量均無明顯變化,差異不具有統(tǒng)計學意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組宮頸癌SiHa細胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達量被顯著上調(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。第二部分:結果表明與Empty vector組相比,Empty vector+AG490組宮頸癌細胞SiHa的細胞活力以及侵襲遷移能力顯著下降(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組的宮頸癌細胞SiHa的細胞活力以及侵襲遷移能力顯著增強(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。與OE-CBX8組相比,OE-CBX8+AG490組的宮頸癌細胞活力以及侵襲遷移能力顯著下降(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。分別采用RT-PCR和Western blot檢測各組細胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達,結果顯示,與Empty vector組相比,Empty vector+AG490組宮頸癌細胞SiHa的細胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達量被顯著下調(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義;與Empty vector組相比,OE-CBX8組的宮頸癌SiHa細胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達量顯著被上調(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義;與OE-CBX8組相比,OE-CBX8+AG490組的宮頸癌細胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表達量被顯著下調(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。結論:(1)CBX8可促進宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲,在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用。(2)CBX8可上調宮頸癌細胞中相關JAK/STAT3信號通路STAT3、Bcl-2、p21mRNA以及STAT3、p-STAT3(ser727)Bcl-2、p21蛋白的表達量。(3)JAK/STAT3通路抑制劑AG490可顯著逆轉由CBX8過表達導致的宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的上調。(4)JAK/STAT3通路抑制劑AG490可顯著逆轉CBX8過表達導致的宮頸癌細胞中JAK/STAT3通路相關mRNA以及蛋白質的表達上調。(5)CBX8通過激活JAK/STAT3信號通路促進宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

本研究通過構建CBX8過表達慢病毒載體以及其空載體,對人宮頸癌細胞SiHa細胞進行轉染,設置實驗組分別為未感染組(Control),感染CBX8過表達空載體慢病毒組(Empty vector)以及感染CBX8過表達慢病毒組(OE-CBX8)。采用CCK-8檢測CBX8對各組細胞活力的影響,Control組,Empty vector組和OE-CBX8組的OD值分為(0.63±0.10)、(0.74±0.08)、(1.16±0.10)。結果如圖1-1所示:與Control組相比,感染CBX8過表達空載體慢病毒組宮頸癌細胞SiHa的細胞活力無明顯變化,差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05);與感染CBX8過表達空載體慢病毒組相比,感染CBX8過表達慢病毒組的宮頸癌細胞SiHa的細胞活力顯著增強(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學意義,結果證明CBX8的過表達可以顯著增強宮頸癌細胞活力,促進細胞增殖。2.2 劃痕實驗檢測細胞的遷移能力

劃痕實驗檢測CBX8對宮頸癌細胞遷移能力的影響。未感染(Control)組、感染CBX8過表達空載體慢病毒(Empty vector)組、感染CBX8過表達慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌細胞SiHa的遷移率分別為(52.00±8.19)%、(56.33±9.07)%、(83.00±3.60)%。結果如圖1-2所示:與未感染(Control)組相比,感染CBX8過表達空載體慢病毒(Empty vector)組宮頸癌細胞SiHa的遷移能力無明顯變化(P>0.05),差異不具有統(tǒng)計學意義;與感染CBX8過表達空載體慢病毒(Empty vector)組相比,感染CBX8過表達慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌細胞SiHa的遷移能力顯著增強(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學意義,結果證明CBX8的過表達可以顯著增強宮頸癌細胞的遷移能力。2.3 Transwell實驗檢測細胞侵襲的能力

Transwell實驗檢測CBX8對宮頸癌細胞侵襲能力的影響。未感染(Control)組、感染CBX8過表達空載體慢病毒(Empty vector)組、感染CBX8過表達慢病毒(OE-CBX8)組宮頸癌SiHa細胞的數(shù)量分別為(155.67±9.61)、(157.67±13.20)、(236.33±15.70)。結果如圖1-3所示:與未感染組相比,感染CBX8過表達空載體慢病毒組穿出Transwell小室的宮頸癌SiHa細胞的數(shù)量無明顯變化(P>0.05),差異不具有統(tǒng)計學意義;與感染CBX8過表達空載體慢病毒組相比,感染CBX8過表達慢病毒組穿出Transwell小室的宮頸癌SiHa細胞的數(shù)量顯著增高(P<0.01),差異具有統(tǒng)計學意義,結果證明CBX8的過表達可以顯著增強宮頸癌細胞的侵襲能力。2.4 RT-PCR檢測各組細胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA的表達
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本文編號：2874401