本文關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素-18及相關(guān)標(biāo)志物在深靜脈血栓形成中的表達(dá)變化與作用機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：課題研究主要就白細(xì)胞介素-18、核轉(zhuǎn)錄因子-κB、血管性血友病因子等標(biāo)志物,在深靜脈血栓形成中的作用及相互關(guān)系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。通過動(dòng)物造模實(shí)驗(yàn)、臨床檢測(cè)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等方式,結(jié)合分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段,就上述關(guān)鍵標(biāo)志物與深靜脈血栓形成的相關(guān)機(jī)理進(jìn)行探討。目的：1、狹窄法進(jìn)行瘀滯型SD大鼠下腔靜脈血栓造模,分組對(duì)比不同時(shí)間點(diǎn)大鼠下腔靜脈血栓形成情況,檢測(cè)IL-18、NF-κB、vWFGPIb-α等標(biāo)志物的表達(dá)狀態(tài)；同時(shí)在臨床患者血液中檢測(cè)上述指標(biāo)的變化。結(jié)合探討研究所關(guān)注檢測(cè)指標(biāo)與DVT的臨床聯(lián)系及意義;2、體外構(gòu)建有效的IL-18慢病毒過表達(dá)載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒抑制載體,作用HUVECs提取總RNA進(jìn)行基因芯片分析,觀察HUVECs整體功能變化；大鼠尾靜脈注謝IL-18過表達(dá)／抑制質(zhì)粒載體病毒并行IVC血栓造模,比較血栓形成情況,檢測(cè)局部靜脈壁IL-18及相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)變化,進(jìn)一步討論過表達(dá)／抑制IL-18對(duì)血栓形成和下游標(biāo)志物的影響；3、針對(duì)IL-18與內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙標(biāo)志物間的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行實(shí)驗(yàn),深入探討IL-18影響內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用途徑,以及該途徑對(duì)靜脈血栓形成造成影響的機(jī)理。方法：1、120只SPF級(jí)SD大鼠,按隨機(jī)分組原則分為3組：DVT模型組(n=40)、假手術(shù)組(n=40)和對(duì)照組(n=40),參考課題組歷年研究經(jīng)驗(yàn)和經(jīng)典文獻(xiàn)報(bào)道,在造模后設(shè)立2h、8h、24h、72h等不同時(shí)間點(diǎn)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組分別取10只大鼠進(jìn)行解剖對(duì)照觀察血栓形成情況,ELISA檢測(cè)血液樣本中IL-18、NF-κB、vWF和GPIb-α的表達(dá)情況；2、采集篩選臨床血樣,分為深靜脈血栓組患者30例、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組患者20例、正常對(duì)照組20例,ELISA檢測(cè)血中IL-18、NF-κB、vWF 和 GPIb-α的表達(dá),對(duì)照動(dòng)物造模結(jié)果進(jìn)行初步探討；3、構(gòu)建人和大鼠IL-18慢病毒過表達(dá)載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒抑制載體,real-time PCR、Western blot等方法對(duì)過表達(dá)／抑制效率進(jìn)行檢測(cè)；提取IL-18過表達(dá)／抑制后HUVECs的總RNA進(jìn)行基因芯片分析,觀察過表達(dá)／抑制IL-18對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞正常功能的影響；4、將兩種載體轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞293T后所產(chǎn)生的病毒,分別通過大鼠尾靜脈注射的方式對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行分組預(yù)處理；大鼠DVT造模后對(duì)IVC血栓段組織進(jìn)行取材,對(duì)血栓形成情況進(jìn)行對(duì)比,real-time PCR、Western blot檢測(cè)靜脈壁組織中IL-18及相關(guān)基因的表達(dá)變化；5、體外培養(yǎng)HUVECs并添加外源性IL-18進(jìn)行預(yù)處理,通過real-time PCR、 Western blot、免疫熒光、流式細(xì)胞儀等手段,檢測(cè)IL-18是否通過激活NF-κB介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)通路,對(duì)HUVECs存活狀態(tài)和vWF、P-selectin、t-PA等內(nèi)皮細(xì)胞功能標(biāo)記物表達(dá)產(chǎn)生影響,結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)DVT發(fā)生機(jī)理進(jìn)行綜合分析。結(jié)果：1、利用狹窄法可成功制作瘀滯型SD大鼠IVC血栓模型,狹窄法殘余管腔橫截面積比控制在10%左右可得到良好成栓率、成活率;造模后8h開始有完全性血栓形成,24h血栓形成穩(wěn)定；2、IL-18、NF-κB、vWF和GPIb-α等ELISA檢測(cè)結(jié)果示：大鼠造模后血中蛋白檢測(cè)隨血栓的發(fā)生、發(fā)展逐漸呈現(xiàn)高表達(dá),24h(病檢顯示為血栓形成高峰期)各指標(biāo)明顯上調(diào)(P0.05)；臨床下肢深靜脈血栓患者,血液中相關(guān)蛋白表達(dá)高于無DVT的健康人和血栓高危因素患者(P0.05),各指標(biāo)表達(dá)基本符合動(dòng)物造模表達(dá)情況；3、利用慢病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,可成功構(gòu)建高效的IL-18基因過表達(dá)／抑制載體；基因芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-18過表達(dá)可對(duì)HUVECs正常生理功能產(chǎn)生明顯影響,并出現(xiàn)大量的差異表達(dá)基因；而抑制IL-18表達(dá)可產(chǎn)生不同效應(yīng)；4、IL-18過表達(dá)慢病毒和IL-18抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒,預(yù)處理大鼠行DVT造模后各組血栓形成的重量、質(zhì)量和重量／質(zhì)量比等指標(biāo),均顯示IL-18的表達(dá)變化對(duì)深靜脈血栓形成有明顯影響(P0.05)；造模段靜脈組織中NF-κB和vWF的基因和蛋白表達(dá)水平,均隨IL-18表達(dá)變化出現(xiàn)調(diào)控性改變；5、IL-18可激活HUVECs中NF-κB介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,使HUVECs損傷及早期凋亡現(xiàn)象明顯增多；促使內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物vWF、P-selectin發(fā)生表達(dá)上調(diào)、t-PA合成產(chǎn)生量明顯減少。結(jié)論：1、炎性反應(yīng)和內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)標(biāo)志物：IL-18、NF-κB、vWF、P-selectin、t-PA與深靜脈血栓形成的發(fā)生、發(fā)展過程相關(guān)；2、IL-18高表達(dá)可使]HUVECs存活狀態(tài)及凋亡異常,選擇性抑制NF-κB激活可明顯減少該途徑所致的細(xì)胞損傷；3、IL-18介導(dǎo)內(nèi)皮損傷可促使vWF、P-selectin表達(dá)上調(diào)、t-PA合成量明顯減少,導(dǎo)致靜脈易栓性；4、IL-18調(diào)控NF-κB引起的內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷和功能異常,可能是深靜脈血栓形成的相關(guān)機(jī)理之一。
【關(guān)鍵詞】：白細(xì)胞介素18 核轉(zhuǎn)錄因子κB 血管性血友病因子 血小板膜糖蛋白Ibα 深靜脈血栓形成 靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R543.6
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 中英文符號(hào)說明13-17
• 前言17-19
• 第一部分：深靜脈血栓形成中IL-18及相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)及意義19-69
• 研究一 大鼠深靜脈血栓模型IL-18、NF-κB、vWF及GPIb-α的表達(dá)變化19-45
• 一、材料和方法19-37
• 二、結(jié)果37-45
• 研究二 下肢深靜脈血栓患者IL-18等標(biāo)志物的表達(dá)與意義45-59
• 一、研究對(duì)象和方法45-54
• 二、結(jié)果54-59
• 討論59-68
• 結(jié)論68-69
• 第二部分：過表達(dá)/抑制白介素-18在深靜脈血栓形成中的作用69-129
• 研究一 IL-18過表達(dá)/抑制載體構(gòu)建及對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的功能影響69-106
• 1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料69-72
• 2 實(shí)驗(yàn)方法72-86
• 3.結(jié)果86-106
• 研究二 過表達(dá)/抑制IL-18對(duì)大鼠深靜脈血栓形成的影響106-122
• 1.實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料106
• 2.實(shí)驗(yàn)方法106-115
• 3.結(jié)果115-122
• 討論122-128
• 結(jié)論128-129
• 第三部分：IL-18激活NF-κB影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用129-154
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備129-130
• 2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟130-137
• 3 結(jié)果137-148
• 討論148-153
• 結(jié)論153-154
• 參考文獻(xiàn)154-163
• 附錄-1163-165
• 附錄-2165-166
• 附錄-3166-176
• 論文相關(guān)綜述176-185
• 參考文獻(xiàn)181-185
• 攻讀學(xué)位期間基本情況185-186
• 致謝186

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張鵬;施海彬;劉圣;李麟蓀;;犬下肢深靜脈血栓模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];介入放射學(xué)雜志;2006年05期

  本文關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素-18及相關(guān)標(biāo)志物在深靜脈血栓形成中的表達(dá)變化與作用機(jī)理研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：287416