本文關(guān)鍵詞：miR-605靶向調(diào)控PSMD10在肝內(nèi)膽管癌中的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌是一種原發(fā)性膽道癌癥,盡管不如其他腫瘤一樣常見,但生物學(xué)行為比肝細(xì)胞肝癌更容易出現(xiàn)淋巴和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,具有極高病死率,而且這幾年它的發(fā)病率還在不斷的上升。盡管部分患者能夠進(jìn)行根治性手術(shù)切除,但預(yù)后效果仍不是十分理想,患者在2年內(nèi)的復(fù)發(fā)率極高。所以需要我們進(jìn)一步對肝內(nèi)膽管癌的分子學(xué)機(jī)制進(jìn)行研究,尋找潛在的靶向治療位點,這樣才可能明顯改善臨床預(yù)后。PSMD10基因在很多腫瘤中存在高表達(dá),被認(rèn)為是一種新的原癌基因。在肝內(nèi)膽管癌的腫瘤組織和細(xì)胞系中也發(fā)現(xiàn)該基因存在過表達(dá),膽管癌的組織分化、TNM分期和轉(zhuǎn)移與其密切相關(guān)。PSMD10基因可能在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的生長轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用,具有成為膽管細(xì)胞癌基因治療的可能靶點。在本研究中,我們進(jìn)一步明確PSMD10基因?qū)Ω蝺?nèi)膽管癌的影響,并篩選到能夠直接靶向調(diào)控PSMD10基因的mi R-605,初步探索二者在肝內(nèi)膽管癌生長轉(zhuǎn)移中的作用及可能的分子機(jī)制。材料與方法1、構(gòu)建PSMD10 sh RNA的表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至膽管癌QBC939和RBE細(xì)胞株中。通過半定量PCR和Western blot來檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的效率;通過MTT和軟瓊脂平板克隆形成實驗檢測膽管癌細(xì)胞的增殖情況;通過Transwell細(xì)胞小室實驗評估膽管癌細(xì)胞的侵襲能力;測定細(xì)胞凋亡的情況。2、利用生物信息學(xué)軟件篩選可能靶向調(diào)控PSMD10的mi RNAs,構(gòu)建mi RNAs過表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至RBE細(xì)胞中,檢測PSMD10的表達(dá)情況,進(jìn)行初步篩選;在臨床樣本中檢測初篩后的mi RNAs在癌組織和正常組織中的表達(dá)情況,進(jìn)行二次篩選;最后,利用雙熒光酶報告系統(tǒng)驗證篩選出的mi RNA同PSMD10的靶向關(guān)系。3、轉(zhuǎn)染篩選出的mi RNA過表達(dá)質(zhì)粒至QBC939和RBE細(xì)胞中,通過MTT、軟瓊脂克隆形成、Transwell細(xì)胞小室實驗檢測膽管癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力,利用動物體內(nèi)成瘤實驗驗證篩選出的mi RNA是否能夠抑制膽管細(xì)胞癌的生長和轉(zhuǎn)移。4、在轉(zhuǎn)染篩選出的mi RNA過表達(dá)質(zhì)粒的QBC939和RBE細(xì)胞中過表達(dá)PSMD10,通過回復(fù)實驗,利用軟瓊脂克隆形成、Transwell細(xì)胞小室實驗明確m RNA的抑制作用是否依賴于PSMD10的表達(dá)。在RBE細(xì)胞中過表達(dá)P53,同時在過表達(dá)P53的REB細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mi RNA ASO,利用熒光定量PCR和western blot方法檢測目標(biāo)mi RNA和PSMD10的表達(dá)水平,初步探索可能存在的信號通路。結(jié)果1、沉默PSMD10基因的表達(dá)能夠促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的凋亡,抑制膽管癌細(xì)胞的增殖和侵襲;2、利用生物信息學(xué)篩選到可能靶向PSMD10基因的mi R-559、mi R-605、mi R-875-3p和mi R-1254;轉(zhuǎn)染后檢測發(fā)現(xiàn)mi R-605和mi R-875-3p能夠顯著降低PSMD10的表達(dá)水平;在臨床樣本中的驗證結(jié)果顯示mi R-605與PSMD10具有負(fù)相關(guān);二者的靶向調(diào)控關(guān)系通過雙熒光素酶報告實驗證實。3、體外細(xì)胞學(xué)實驗,mi R-605的過表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡,顯著抑制膽管細(xì)胞癌的增殖和侵襲;體內(nèi)動物實驗,mi R-605的過表達(dá)顯著抑制了皮下種植腫瘤的生長。4、mi R-605對膽管細(xì)胞癌的抑制作用依賴于PSMD10;PSMD10參與了P53-mi R-605信號通路。結(jié)論mi R-605通過靶向調(diào)控PSMD10表達(dá)在肝內(nèi)膽管癌的生長和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用,P53-mi R-605-PSMD10可能是肝內(nèi)膽管癌中一條信號通路。
【關(guān)鍵詞】：肝內(nèi)膽管癌 miR-605 PSMD10 侵襲和轉(zhuǎn)移 p53
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-7
• 中文摘要7-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 PSMD10沉默表達(dá)對膽管癌細(xì)胞的影響13-35
• 2.1 材料13-16
• 2.2 方法16-27
• 2.3 結(jié)果27-31
• 2.4 討論31-35
• 第三章 miR-605靶向負(fù)調(diào)控PSMD10基因35-50
• 3.1 材料35-38
• 3.2 方法38-44
• 3.3 結(jié)果44-48
• 3.4 討論48-50
• 第四章 miR-605在體內(nèi)外抑制對肝內(nèi)膽管癌的生長轉(zhuǎn)移50-63
• 4.1 材料50-52
• 4.2 方法52-55
• 4.3 結(jié)果55-61
• 4.4 討論61-63
• 第五章 PSMD10拮抗miR-605對膽管癌的抑制作用并參與P53-mi R-605信號網(wǎng)絡(luò)63-79
• 5.1 材料63-66
• 5.2 方法66-71
• 5.3 結(jié)果71-77
• 5.4 討論77-79
• 全文結(jié)論79-80
• 參考文獻(xiàn)80-86
• 文獻(xiàn)綜述 膽管癌研究診治進(jìn)展86-117
• 參考文獻(xiàn)98-117
• 攻讀博士期間發(fā)表的論文117-118
• 致謝118

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Effects of targeting magnetic drug nanoparticles on human cholangiocarcinoma xenografts in nude mice[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年03期

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本文編號：287142