【摘要】：研究背景乳腺癌是全世界女性發(fā)生的最常見惡性腫瘤之一,約占女性新發(fā)癌癥總數(shù)的1/4,其死亡率占女性癌癥的15%,位居女性惡性腫瘤死亡率之首,隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢,嚴(yán)重威脅著女性的生命和健康,對經(jīng)濟、社會、家庭及女性的精神及心理方面造成了極大的影響。近年來,乳腺癌的預(yù)防工作受到人們越來越多的關(guān)注,研究工作者通過建立不同用途的乳腺癌動物模型,探討乳腺癌的病因及發(fā)生發(fā)展機制,將對乳腺癌的防治工作具有重要價值。研究表明乳腺癌的發(fā)生是一個連續(xù)的多步驟過程,即從正常組織、普通增生、不典型增生、原位癌至浸潤性癌的過程。學(xué)者們認(rèn)為在癌前病變及其之前階段是可以逆轉(zhuǎn)的,因此,復(fù)制這一連續(xù)變化過程、明確其發(fā)生機制及組織病理學(xué)變化,將有助于人們尋找有效措施及時預(yù)防與控制乳腺癌的發(fā)生。鑒于乳腺是一個激素依賴性器官,雌激素的主要作用是促進(jìn)乳腺導(dǎo)管生長及導(dǎo)管上皮細(xì)胞的增生,孕激素在此基礎(chǔ)上,促進(jìn)了乳腺小葉和腺泡的充分發(fā)育。同時,7,12二甲基苯蒽(7,12-dimethylbenz-(a)anthracene, DMBA)作為一種動物實驗?zāi)Ｐ统Ｓ玫闹掳┱T導(dǎo)劑,在適合激素水平條件下也可特異性地誘導(dǎo)動物乳腺癌的發(fā)生。目前,盡管成功建立了越來越多的乳腺癌實驗動物模型,并且為研究乳腺癌的發(fā)病機制及治療策略奠定了基礎(chǔ),但是系統(tǒng)地觀察和全面分析這些模型的組織形態(tài)學(xué)變化的研究還較少。本研究通過DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導(dǎo)斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague-Dawley, SD)大鼠乳腺癌的發(fā)生,觀察大鼠乳腺的組織病理學(xué)變化,并通過標(biāo)記人類的乳腺病變診斷相關(guān)分子P63、CK5/6、CK34βE12及乳腺癌發(fā)病機制相關(guān)蛋白與基因E-Cadherin、PCNA、Bcl-2等的表達(dá),研究它們在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達(dá)差異性及相關(guān)性分析,探討乳腺癌的癌變過程,不但為以后乳腺癌動物模型的進(jìn)一步研究奠定了組織病理學(xué)基礎(chǔ),同時也為研究人類乳腺癌的發(fā)病機制及治療提供了理論依據(jù)。第一部分DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導(dǎo)大鼠乳腺癌發(fā)生的組織形態(tài)學(xué)觀察目的通過DMBA聯(lián)合雌孕激素誘導(dǎo)SD大鼠乳腺癌的發(fā)生,顯微鏡下觀察大鼠乳腺病變的組織病理學(xué)變化。方法50只21日齡、雌性SD大鼠被隨機分為5組,分別為G0 (Group 0)、G Ⅰ (Group Ⅰ)、GⅡ (Group Ⅱ)、GⅢ (Group Ⅲ)、GⅣ (Group Ⅲ)。G0:空白對照組,GI:DMBA 15mg/kg, GⅡ:DMBA 20mg/kg, GUI:DMBA 25mg/kg, GIV:DMBA 30mg/kg, G Ⅰ-Ⅳ均分別給予雌二醇苯甲酸酯0.5mg/kg和孕酮4mg/kg,5天為一個周期。每組所得大鼠乳腺標(biāo)本均進(jìn)行10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋、常規(guī)4μm厚度切片及蘇木素-伊紅染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察,并記錄實驗第120天、第148天及第180天的每只大鼠乳腺病變類型,包括了乳腺導(dǎo)管增生、小葉增生、間質(zhì)增生、囊性增生、導(dǎo)管不典型增生、小葉非典型增生、原位癌及浸潤性癌,觀察標(biāo)準(zhǔn)均采用人類乳腺病變的WHO系統(tǒng)分類法。結(jié)果1大鼠乳腺病變的改變包括良性病變、癌前病變,原位癌和浸潤性癌,其中良性增生性病變又包括了導(dǎo)管增生,小葉和腺泡的增生,囊性增生,間質(zhì)增生,而癌前病變主要是導(dǎo)管的不典型增生和小葉的不典型增生。2實驗組乳腺病變的發(fā)生率在實驗第120天,第148天,第180天分別為4.38%、14.06%、34.06%,呈遞增趨勢,并且第180天發(fā)生率最高,第180天實驗組乳腺導(dǎo)管增生、導(dǎo)管非典型增生、原位癌到浸潤性癌的發(fā)生率分別為57.5%、45%、32.5%、22.5%,呈遞減趨勢。結(jié)論DMBA聯(lián)合雌孕激素可以誘導(dǎo)大鼠乳腺癌發(fā)生,并且在實驗第12.0天,第148天,第180天可以觀察到大鼠乳腺從良性病變到癌前病變,最后變成癌的多步驟、連續(xù)的過程。第二部分研究P63、CK5/6和CK34 βE12在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達(dá)差異性目的觀察SD大鼠和人類乳腺導(dǎo)管病變中P63、CK5/6和CK34 βE12的表達(dá),探討它們的表達(dá)差異性,比較分析SD大鼠和人類乳腺癌發(fā)生的異同。方法收集本研究的第一部分實驗SD大鼠乳腺及山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2.013-2014年人類乳腺癌手術(shù)切除的存檔石蠟標(biāo)本各10例,每例大鼠和人類乳腺組織的病理結(jié)果均經(jīng)病理醫(yī)師診斷為浸潤性導(dǎo)管癌,并且均可以觀察到導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、導(dǎo)管原位癌及浸潤性導(dǎo)管癌等病變。采用免疫組織化學(xué)染色PV-9000二步法檢測P63、CK5/6和CK34 β E12的蛋白表達(dá)情況,在顯微鏡下觀察計數(shù),采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析：(1)P63、CK5/6和CK34 βE12分別在大鼠和人類乳腺各組病變中的表達(dá)差異性；(2)P63、CK5/6和CK34 βE12在大鼠乳腺各組病變與人類乳腺各組病變間的表達(dá)差異性。結(jié)果1 P63蛋白表達(dá)陽性率在大鼠和人類乳腺導(dǎo)管病變之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；P63在大鼠和人類乳腺導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、原位癌、浸潤性癌中的表達(dá)陽性率逐漸減少,組間差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2大鼠和人類乳腺組織中,CK5/6、CK34βE12蛋白表達(dá)陽性率在導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、原位癌、浸潤性癌中逐漸減少,組間差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；而大鼠乳腺病變與人類乳腺病變中的表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1 P63、CK5/6和CK34 βE12蛋白在大鼠乳腺各組病變的表達(dá)與人類乳腺相似,提示大鼠乳腺癌變過程與人類乳腺癌發(fā)生基本一致,包括了乳腺導(dǎo)管普通型增生、非典型增生、原位癌到浸潤性癌的多步驟的連續(xù)過程。2 P63、CK5/6和CK34 βE12作為臨床病理診斷常用的人類乳腺肌上皮分子標(biāo)記,在研究大鼠乳腺病變中具有相同的診斷價值。3大鼠乳腺與人類乳腺有類似的組織形態(tài)學(xué)變化,為乳腺癌模型研究提供了組織病理學(xué)基礎(chǔ),并且可能成為乳腺癌預(yù)防與治療策略研究的理想模型。第三部分研究E-Cadherin、PCNA和Bcl-2在大鼠與人類乳腺癌變過程中的表達(dá)差異性及相關(guān)性分析目的觀察E-Cadherin、PCNA和Bcl-2蛋白在大鼠和人類乳腺導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、原位癌、浸潤性癌及正常乳腺組織中的表達(dá),探討它們在大鼠和人類乳腺病變中的表達(dá)差異性及相關(guān)性分析。方法收集本研究第一部分實驗的SD大鼠乳腺導(dǎo)管病變石蠟標(biāo)本和山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院人類乳腺癌石蠟標(biāo)本各10例,標(biāo)本篩選標(biāo)準(zhǔn)同本研究的第二部分實驗,采用免疫組織化學(xué)染色PV-9000二步法檢測E-Cadherin、PCNA和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平,分別采用PCNA表達(dá)的陽性率標(biāo)記細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferation index,PI)和Bcl-2表達(dá)的陽性率標(biāo)記抗細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI),觀察染色結(jié)果并計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù),采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析：(1) E-Cadherin、 PCNA和Bcl-2分別在大鼠和人類乳腺各組病變中的表達(dá)差異性；(2) PCNA的表達(dá)與E-Cadherin的相關(guān)性分析；(3)細(xì)胞增殖指數(shù)與抗細(xì)胞凋亡指數(shù)相關(guān)性分析。結(jié)果1 E-Cadherin蛋白表達(dá)水平在大鼠正常乳腺導(dǎo)管、導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、原位癌及浸潤性癌中逐漸減少,組間差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);E-Cadherin蛋白在人類乳腺病變組織的表達(dá)趨勢與大鼠一致,并且差異也有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。2 PCNA蛋白表達(dá)陽性率在大鼠乳腺正常導(dǎo)管、導(dǎo)管普通型增生、不典型增生、原位癌及浸潤性癌逐漸增加,組間差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),并且正常導(dǎo)管、導(dǎo)管普通型增生、不典型增生與原位癌之間,兩兩比較差異有顯著性(P0.01),PCNA蛋白在人類乳腺各組病變的表達(dá)水平與大鼠中呈相同的趨勢,差異也有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。3 Bcl-2蛋白表達(dá)水平在大鼠各組乳腺病變中呈遞增趨勢,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),而在人類乳腺各組病變中的表達(dá)趨勢類似于大鼠,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4大鼠和人類乳腺病變中,PCNA蛋白的表達(dá)強度分?jǐn)?shù)與E-Cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.05),而PI與Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論1乳腺病變由普通型增生、不典型增生、原位癌發(fā)展到浸潤性癌的過程中E-Cadherin表達(dá)逐漸減少,提示E-Cadherin蛋白失表達(dá)可能與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。2 PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞凋亡指數(shù)隨著乳腺病變發(fā)展過程呈上升趨勢,并且細(xì)胞增殖指數(shù)與抗細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān),推測細(xì)胞增殖和細(xì)胞抗凋亡的相互作用可能促使了乳腺癌的發(fā)生。3 PCNA蛋白的表達(dá)強度分?jǐn)?shù)與E-Caadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),提示細(xì)胞增殖程度與細(xì)胞粘附性可能有關(guān),參與乳腺細(xì)胞的癌變。4大鼠乳腺病變中E-Caadherin、PCNA和Bcl-2蛋白的表達(dá)與人類有高度一致性,提示大鼠乳腺的癌變過程與人類乳腺癌的發(fā)生類似。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊黎;朱霞;冉立;;HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax在乳腺癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[J];癌癥;2007年07期

本文編號：2806238