【摘要】：竹蓀(Dictyophora indusiata)屬于鬼筆科竹蓀屬真菌,廣泛分布于我國貴州、云南、四川、江西、福建等地。竹蓀味道鮮美,營養(yǎng)價值豐富,是一種珍貴的食藥用真菌。本文以竹蓀子實(shí)體為原料,對竹蓀多糖DP1的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定、免疫活性、抗溶血活性等進(jìn)行了研究。同時對竹蓀多糖DP1進(jìn)行功能改性,成功制備出竹蓀多糖納米硒DP1-Se NPs和竹蓀多糖鋅DP1-Zn兩種新型配合物,并對DP1-Se NPs和DP1-Zn的抗腫瘤活性及相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究,結(jié)果表明:采用“水提醇沉”法從竹蓀子實(shí)體提取水溶性粗多糖,竹蓀粗多糖經(jīng)陰離子交換柱層析DEAE-52和葡聚糖凝膠柱層析G200分離純化后得到DP1和DP2兩個組分。竹蓀多糖DP1的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析表明DP1的分子量為1131726 Da,竹蓀多糖DP1中單糖組成及比例為:半乳糖14.1%、葡萄糖56.2%、甘露糖29.7%。DP1單糖殘基間連接的糖苷鍵類型主要包括(1→2)、(1→3)、(1→4)和(1→6)鍵。此外,DP1中還含有α型呋喃糖和α型吡喃糖;DP1中單糖殘基類型包括(1→3)-α-甘露糖,(1→3)-α-半乳糖,(1→2,6)-α-葡萄糖,(1→6)-β-D-葡萄糖,(1→6)-β-D-半乳糖,(1→6)-β-D-甘露糖等。DP1具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性,能夠特異性地與小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞膜表面受體CR3相互作用,通過一系列可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(PI3K/Akt/MAPK/NF-κB)激活免疫應(yīng)答,促進(jìn)免疫因子NO、TNF-α和IL-6的分泌。此外,DP1具有良好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性,經(jīng)高溫(145℃)、強(qiáng)酸(p H=2)和強(qiáng)堿(p H=10)的處理后,仍然具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性。DP1能抑制AAPH誘導(dǎo)的人血紅細(xì)胞氧化性溶血,抑制紅細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS的過量產(chǎn)生,使紅細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶系(谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px、過氧化氫酶CAT和超氧化物歧化酶SOD)保持在正常的生理范圍,抑制脂質(zhì)過氧化,維持紅細(xì)胞內(nèi)“氧化應(yīng)激-抗氧化防御”系統(tǒng)的動態(tài)平衡。此外,DP1還能抑制Cu Cl2誘導(dǎo)血清中共軛二烯的生成,防止血清過氧化。通過氧化還原反應(yīng)成功制備出竹蓀多糖納米硒DP1-Se NPs配合物,DP1-Se NPs粒子形貌為規(guī)則的球狀、分散性良好、平均粒徑為89 nm左右,是一種良好納米硒新材料。DP1-Se NPs具有顯著的抗腫瘤活性,能夠通過介導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。DP1-Se NPs能促進(jìn)死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白FADD的表達(dá),增強(qiáng)Caspase-3、-8和-9的活性,通過死亡受體介導(dǎo)的外源性凋亡通路和線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路兩條途徑介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。利用竹蓀多糖DP1與鋅螯合成功制備出新型多糖鋅配合物DP1-Zn。DP1與鋅螯合后抗腫瘤活性顯著提高。DP1-Zn能有效地抑制多種腫瘤細(xì)胞如人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人宮頸癌細(xì)胞Hela、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人肝癌細(xì)胞Hep G2、人肺癌細(xì)胞A549、和人前列腺癌PC3等腫瘤細(xì)胞的增殖。DP1-Zn處理能使MCF-7細(xì)胞核皺縮,DNA復(fù)制和合成受阻,細(xì)胞周期發(fā)生阻滯,細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位下降,線粒體功能紊亂等,最終誘發(fā)細(xì)胞早期凋亡。本研究表明竹蓀多糖是一個良好的免疫增強(qiáng)劑和抗氧化劑,可作為保健食品或藥品應(yīng)用于免疫低下及氧化應(yīng)激相關(guān)疾病的防治。同時,竹蓀多糖納米硒DP1-Se NPs和竹蓀多糖鋅DP1-Zn配合物具有“高效低毒”的特點(diǎn),為新型抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)研發(fā)提供了新材料和研究思路,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R284;TS201.2

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本文編號：2804535