發(fā)布時間：2017-03-25 13:00

  本文關(guān)鍵詞：miR-214和Sema4D在卵巢癌中的功能作用及相關(guān)的分子生物學(xué)機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：Semaphor in 4D在卵巢癌(癌組織及細胞株SKOV-3)中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系目的檢測卵巢癌組織及卵巢癌細胞株SKOV-3中Sema 4D的表達水平以及與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系,初步探索Sema 4D在卵巢癌進展中的功能作用。方法通過免疫組化方法檢測卵巢正常組織、卵巢良性病變組織、卵巢惡性病變組織中Sema 4D表達水平的差異。通過RT-PCR及Western blot方法檢測卵巢癌細胞株SKOV-3及卵巢正常上皮細胞株IOSE80中Sema 4D的表達水平的差異。并采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進行數(shù)據(jù)處理分析,計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準差(x±SD)表示,免疫組織化學(xué)檢測使用卡方檢驗(Chi-square Test),兩兩間比較采用t檢驗,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。分析在卵巢癌(癌組織及細胞株SKOV-3)中Sema 4D的表達水平與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果1、Sema4D蛋白在卵巢正常組織、卵巢良性腫瘤組織以及卵巢惡性腫瘤組織中的陽性表達率分別為40%、53.3%和90%,組間比較差異有顯著性(x2=32.845,P=0.000,P0.05)。2、Sema4D蛋白在早期(工-ⅡI期)和晚期(Ⅲ-Ⅳ期)卵巢癌組織中的陽性表達率分別為67%和100%,組間比較差異有顯著性(X2=7.938,P=0.047,P0.05)。3、在卵巢癌細胞株SKOV-3和卵巢正常細胞株IOSE80中Sema4D mRNA的2-△△α值分別為：1.828±0.260和0.00317±0.00124(P=0.0022,P0.05),差異有顯著性。4、Western bolt結(jié)果顯示,Sema4D蛋白/β-actin分別為：1.20±0.09和0.0038±0.0009(P=0.0003,P0.05),差異有顯著性。結(jié)論Sema4D在卵巢癌組織和細胞中高表達,卵巢癌組織中Sema4D的表達水平與卵巢病變的惡性程度正相關(guān)。第二部分：miR-214在SKOV-3中的表達及對其生物學(xué)行為的影響目的檢測miR-214在卵巢癌細胞株SKOV-3中的表達水平,并觀察miR-214的異常表達對卵巢癌細胞株SKOV-3增殖、凋亡和侵襲的影響。方法采用RT-PCR方法,檢測并對比正常卵巢上皮細胞株IOSE80和卵巢癌細胞株SKOV-3中miR-214的表達情況。并通過慢病毒感染的方法,獲得持續(xù)過表達miR-214的SKOV-3,采用CCK-8法觀察SKOV-3的增殖變化,流式細胞儀檢測SKOV-3的凋亡變化,Transwell小室實驗觀察侵襲能力的變化。結(jié)果1、在卵巢癌細胞株SKOV-3及正常卵巢上皮細胞株IOSE80中miR-214的相對表達量分別為：0.172±0.023和0.569±0.041,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0011,P0.05)。2、慢病毒感染SKOV-3細胞株作為實驗組、對照序列感染SKOV-3細胞株作為載體對照組以及未作處理的空白對照組,miR-214的相對表達量分別為0.761±0.073,0.249±0.030和0.173±0.023。實驗組miR-214的相對表達量高于載體對照組,兩者之間差異有顯著性(P=0.0029,P0.05)。實驗組miR-214的相對表達量高于空白對照組,兩者之間差異有顯著性(P=0.0016,P0.05)。載體對照組與空白對照組比較,差異沒有顯著性(P=0.1133,P0.05)。3、在不同時間點實驗組與空白對照組以及載體對照組相比,細胞增殖能力明顯減弱,差異有顯著性(P0.05)；空白對照組及載體對照組比較,差異沒有顯著性(P0.05)。4、在三組中凋亡指數(shù)(AI值)分別為：實驗組(12.802±0.284)%高于空白對照組(7.638±0.338)%,差異有顯著性(P0.01)；實驗組高于載體對照組(7.866±0.177)%,差異有顯著性(P0.001)；而空白對照組與載體對照組相比差異沒有顯著性(P0.05)。5、侵襲實驗結(jié)果顯示,實驗組穿入Matrigel基質(zhì)膠的SKOV-3細胞的灰度值為21.253±5.023低于空白對照組59.309±5.132,差異有顯著性(P0.01)；實驗組低于載體對照組55.031±5.238,差異有顯著性(P0.01)�？瞻讓φ战M與載體對照組比較,差異沒有顯著性(P0.05)。結(jié)論miR-214在卵巢癌細胞株SKOV-3中表達水平降低；上調(diào)卵巢癌細胞株SKOV-3中miR-214的表達水平,能夠抑制SKOV-3的增殖和侵襲能力,促進細胞的調(diào)亡。第三部分：miR-214靶向調(diào)控Sema4D蛋白表達及其功能作用目的預(yù)測并驗證Sema4D是miR-214的靶基因,闡述miR-214通過靶向調(diào)控Sema4D的表達來影響SKOV-3細胞的生物學(xué)功能。方法根據(jù)miRNA靶基因數(shù)據(jù)庫來預(yù)測和篩選miR-214的靶基因為Sema4D,通過RT-PCR和Western blot方法檢測上調(diào)和下調(diào)miR-214后卵巢癌細胞株內(nèi)Sema4D mRNA和蛋白表達水平的變化,并通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M行驗證。結(jié)果1、通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測Sema4D是miR-214的潛在靶基因之一。成功建立高表達miR-214的細胞株SKOV-3 mimics及低表達miR-214的細胞株SKOV-3 inhibitor。2、RT-PCR檢測結(jié)果顯示SKOV-3 mimics和SKOV-3 mimics control組Sema4D mRNA的相對表達量分別為：0.067±0.011和0.390±0.095,mimics組較control組明顯下降,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.028,P0.05)。3、SKOV-3 inhibitor和SKOV-3 inhibitor control組Sema4D mRNA的相對表達量分別為：0.955±0.039和0.532±0.131,inhibitor組較inhibitor control組明顯升高,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037,P0.05)。4、Western blot法檢測結(jié)果顯示,SKOV-3 mimics組Sema 4D蛋白表達水平較SKOV-3 mimics control組顯著降低,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5、SKOV-3 inhibitor組Sema4D蛋白表達水平較inhibitor control組顯著增高,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示：在卵巢癌細胞株SKOV-3中共轉(zhuǎn)染miR-214 mimics和野生型3’-UTR區(qū)重組載體時,細胞的熒光素酶活性較單獨轉(zhuǎn)染野生型組明顯受到抑制,Gluc/seAP比值分別為0.411±0.013和3.408±0.211,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0001,P0.05)。7、共轉(zhuǎn)染miR-214 inhibitor組和野生型3’-UTR區(qū)重組載體時,細胞的熒光素酶活性較單獨轉(zhuǎn)染野生型組明顯增強,Gluc/seAP比值分別為8.777±0.421和3.408±0.211,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0003,P0.05)。8、共轉(zhuǎn)染miR-214 mimics和突變型3’-UTR區(qū)的重組載體的細胞,細胞的熒光素酶活性較單獨轉(zhuǎn)染突變型組無明顯變化Gluc/seAP比值分別為7.107±0.317和7.260±0.086,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.667,P0.05)。9、共轉(zhuǎn)染miR-214 inhibitor和突變型3’-UTR區(qū)的重組載體的細胞,細胞的熒光素酶活性較單獨轉(zhuǎn)染突變型組無明顯變化,Gluc/seAP比值分別為7.654±0.196和7.260±0.086,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.139,P0.05)。結(jié)論miR-214是通過在翻譯及轉(zhuǎn)錄水平上靶向調(diào)節(jié)Sema4D蛋白水平的表達,miR-214對Sema4D有負性調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：Sema4D miR-214 mimics 卵巢癌 慢病毒感染 雙熒光素酶 靶向調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 一、中英文術(shù)語對照6-8
• 二、中文摘要8-14
• 1、第一部分：Semaphorin4D在卵巢癌（癌組織及細胞株SK0V-3)中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系8-10
• 2、第二部分：miR-214在SK0V-3中的表運及對其生物學(xué)行為的巧響10-12
• 3、第三部分：miR-214靶向調(diào)控Sema4D蛋白表達及其功能作用12-14
• 三、英文摘要14-20
• 1、第一部分 Semaphorin4D在卵巢癌(癌組織及細胞株SKOV-3)中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系14-16
• 2、第二部分 miR-214在SKOV-3中的表達及對其生物學(xué)行為的影響16-18
• 3、第三部分 miR-214靶向調(diào)控Sema 4D蛋白表達及其功能作用18-20
• 四、研究背景和立題依據(jù)20-23
• 五、第一部分：Semaphorin4D在卵巢癌(癌組織及細胞株SKOV-3)中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系23-51
• 1、材料與方法23-39
• 2、結(jié)果及分析39-47
• 3、討論47-49
• 4、小結(jié)49-50
• 5、結(jié)論50-51
• 六、第二部分：miR-214在SKOV-3中的表達及對其生物學(xué)行為的影響51-75
• 1、材料與方法51-60
• 2、結(jié)果60-71
• 3、討論71-74
• 4、小結(jié)74
• 5、結(jié)論74-75
• 七、第三部分：miR-214靶向調(diào)控Sema 4D蛋白表達及其功能作用75-94
• 1、材料與方法75-86
• 2、結(jié)果及分析86-91
• 3、討論91-93
• 4、小結(jié)93
• 5、結(jié)論93-94
• 八、全文總結(jié)94-95
• 九、參考文獻95-102
• 十、綜述102-117
• 1、CD100的相關(guān)性研究進展102-110
• S每嘉南，
  
  本文編號：267204
  boshi