本文關(guān)鍵詞：AMPK在炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：臨床研究發(fā)現(xiàn),炎癥可能參與了非酒精性脂肪肝(NAFLD)早期的脂肪沉積過(guò)程,但機(jī)制尚未闡明。因此,在本部分的研究中,我們旨在構(gòu)建炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積的動(dòng)物與細(xì)胞模型,為進(jìn)一步的機(jī)制研究做準(zhǔn)備。方法：①動(dòng)物模型：酪蛋白是近年來(lái)常用的小鼠慢性炎癥刺激因子,因此,我們將6-8周齡雄性C57BL/6J/、鼠隨機(jī)分為炎癥組(Casein,n=7)和對(duì)照組(NC,n=7)。炎癥組隔日皮下注射0.5 ml10%酪蛋白,對(duì)照組注射相應(yīng)劑量的生理鹽水,總時(shí)間為18周。收集小鼠血清,檢測(cè)炎癥因子MCP-1、TNF-α、IL-6的水平。取小鼠肝臟組織經(jīng)油紅O染色、TG定量檢測(cè)肝臟組織脂質(zhì)沉積情況,qRT-PCR檢測(cè)肝臟脂代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)。②細(xì)胞模型1：在體內(nèi),Kupffer細(xì)胞是肝臟炎癥的主要來(lái)源細(xì)胞,我們利用LPS刺激K.upffer細(xì)胞,檢測(cè)其炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的含量,并用該上清液干預(yù)Hep(G2肝細(xì)胞,模擬體內(nèi)Kupffer細(xì)胞與肝細(xì)胞共生長(zhǎng)環(huán)境,后油紅O染色、TG定量檢測(cè)HepG2肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的變化,qRT-PCR檢測(cè)肝細(xì)胞脂代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)；③細(xì)胞模型2：TNF-α是重要的炎癥因子之一,為了建立更為單純的炎癥干預(yù)的細(xì)胞模型,我們用外源性TNF-α 20ng/mL干預(yù)HepG2細(xì)胞24h后,油紅O染色、TG定量檢測(cè)HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積情況,qRT-PCR以及Western blot方法檢脂質(zhì)合成關(guān)鍵基因的mRNA和蛋白水平的變化。結(jié)果：①動(dòng)物模型：與對(duì)照組相比,酪蛋白注射顯著增加C57BL/6J小鼠血中炎癥因子MCP-1、TNF-α、IL-6的水平,肝臟脂質(zhì)沉積明顯,脂代謝紊亂。②細(xì)胞模型1：LPS刺激明顯增加Kupffer細(xì)胞上清液中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的含量,上清液干預(yù)HepG2細(xì)胞后,細(xì)胞脂質(zhì)含量顯著增加,脂代謝異常。③細(xì)胞模型2：與對(duì)照組相比,TNF-α促進(jìn)HepG2肝細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積,脂質(zhì)合成關(guān)鍵基因SREBP1、FAS的表達(dá)明顯升高。結(jié)論：成功構(gòu)建炎癥誘導(dǎo)的肝脂質(zhì)沉積的動(dòng)物與細(xì)胞模型。目的：腺苷酸活化蛋白激酶(Amp-activated protein kinase,AMPK)是生物體內(nèi)重要的能量感受器,參與脂代謝過(guò)程。在第一部分的研究中,我們已經(jīng)觀察到炎癥誘導(dǎo)肝臟脂質(zhì)沉積。然而,在此過(guò)程中,AMPK通路是否發(fā)揮作用尚不清楚。因此,本部分的研究旨在炎癥誘導(dǎo)的脂質(zhì)沉積模型中,探討AMPK通路的作用以及可能的機(jī)制,為非酒精性脂肪肝的防治提供新的思路。方法：estern blotting檢測(cè)第一部分研究建立的炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積的動(dòng)物與細(xì)胞模型中MPK以及下游ACC的磷酸化水平以反映AMPK通路激活情況；②探討AMPK通路是否介導(dǎo)了炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積：在TNF-a誘導(dǎo)的HepG2肝細(xì)胞模型中,加用AMPK激動(dòng)劑二甲雙胍1mM或AICAR 1mM,或二甲雙胍1mM聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C 40μM,干預(yù)24h后,通過(guò)油紅O染色、TG定量檢測(cè)觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚情況；Western blotting和qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞AMPK/mTOR/SREBP1通路的表達(dá)變化。結(jié)果：①與對(duì)照組相比,炎癥小鼠肝臟組織AMPK以及下游ACC的磷酸化水平降低；Kupffer細(xì)胞上清液干預(yù)肝細(xì)胞后,肝細(xì)胞AMPK以及ACC磷酸化明顯減少；在TNF-α作用下,HepG2細(xì)胞AMPK以及ACC磷酸化顯著降低。②在TNF-α誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型中,加用二甲雙胍或AICAR后,細(xì)胞內(nèi)TG含量顯著降低,脂質(zhì)沉積得到改善,進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),AMPK以及ACC磷酸化水平明顯增加,AMPK激活增多, mTORSer2448以及p70S6K Thr421/Ser424位點(diǎn)的磷酸化水平顯著降低,脂質(zhì)合成關(guān)鍵基因SREBP1、FAS的表達(dá)顯著減少；而加入二甲雙胍聯(lián)合Compound C后,AMPK以及ACC磷酸化水平降低,AMPK激活減少,mTORSer2448以及pThr421/Ser424位點(diǎn)的磷酸化水平顯著增加,SREBP1、FAS的表達(dá)顯著升高,TG含量增加,明顯減弱二甲雙胍對(duì)脂質(zhì)沉積的改善作用。結(jié)論：AMPK磷酸化水平在炎癥誘導(dǎo)的脂質(zhì)沉積過(guò)程中顯著降低,AMPK/mTOR/SREBP1通路可能介導(dǎo)了TNF-α誘導(dǎo)HepG2肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：炎癥 脂質(zhì)沉積 脂代謝 Kupffer細(xì)胞 TNF-α AMPK 炎癥 脂質(zhì)沉積 mTOR SREBP1
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-18
• 第一部分 炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積模型的建立18-48
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-45
• 4 討論45-48
• 第二部分 AMPK在炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用以及可能的機(jī)制48-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料48-49
• 2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-57
• 4 討論57-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 全文總結(jié)64-65
• 文獻(xiàn)綜述65-81
• 參考文獻(xiàn)74-81
• 致謝81-82
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄82

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李娟娟;凌文華;;AMPK與肥胖[J];國(guó)際內(nèi)科學(xué)雜志;2007年11期

2 劉文倩;艾華;;AMPK與肥胖和減肥關(guān)系研究進(jìn)展[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

3 蔡明春,黃慶愿,高鈺琪;AMPK與能量代謝[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年01期

4 葛斌;謝梅林;顧振綸;周文軒;郭次儀;;AMPK作為治療2型糖尿病新靶點(diǎn)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2008年05期

5 徐靜;劉毅;完強(qiáng);賈振華;王榮;;高糖環(huán)境對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)及活性的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

6 宮克城;丁樹(shù)哲;;AMPK與2型糖尿病的關(guān)系及其在運(yùn)動(dòng)介導(dǎo)下的研究[J];遼寧體育科技;2009年03期

7 羅招凡;李芳萍;丁鶴林;程樺;;AMPKα2基因克隆及其野生型和突變型真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年28期

8 丁曉潔;王佑民;王麗萍;;高脂飲食對(duì)大鼠肝臟組織AMPK表達(dá)及其活性的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

9 程媛;王佑民;丁曉潔;;肥胖大鼠骨骼肌AMPK表達(dá)及其與糖脂代謝的關(guān)系[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

10 黃德強(qiáng);羅凌玉;王麗麗;羅時(shí)文;呂農(nóng)華;羅志軍;;AMPK在胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2011年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;Co-commitment and Interplay between Akt and AMPK in the Regulation of Endothelial NO Synthase Phosphorylation by Reactive Oxygen Species[A];第九屆全國(guó)心血管藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

2 Paul M Vanhoutte;;SIRT1 and AMPK:the Seesaw Effect in Regulating Endothelial Sene-scence[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 李瑾;朱海波;;新結(jié)構(gòu)類型調(diào)血脂化合物與靶蛋白AMPK分子間相互作用初步解析[A];全國(guó)第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

4 宋海燕;李強(qiáng);孫玉倩;張巾超;鄔艷慧;;AMPK結(jié)合蛋白的篩選及其與2型糖尿病的關(guān)系研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

5 ;AMPK mediated an apoptotic response to combined effect of hypoxia stress and ER stress[A];2012全國(guó)發(fā)育生物學(xué)大會(huì)摘要集[C];2012年

6 ZHANG Jian-wei;MA Xiao-wei;DENG Rui-fen;DING Shan;GU Nan;GUO Xiao-hui;;Genetic variability in AMPKαl gene may have synergetic effect with smoking on risk of coronary artery disease in chinese type 2 diabetics[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

7 姚遠(yuǎn);周京軍;裴建明;;AMPK介導(dǎo)無(wú)鈣預(yù)處理心肌保護(hù)作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2011年

8 季樂(lè)樂(lè);Haifeng Zhang;Feng Gao;;A novel mechanism of preconditioning:Attenuating reperfusion injury through enhanced myocardial glucose uptake via insulin-stimulated Akt and AMPK activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2013年

9 WU Qiao;;The orphan nuclear receptor Nur77 regulates AMPK activity through LKB1 subcellular localization in glucose metabolism[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

10 Jia-Wei Wu;;Conserved elements in allosteric regulation of AMPK[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十一次會(huì)員代表大會(huì)暨2014年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——專題報(bào)告二[C];2014年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 黃敏;精力充沛基因決定?[N];新華每日電訊;2011年

2 實(shí)習(xí)生 程鳳;不愛(ài)鍛煉可能與基因缺失有關(guān)[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳雷;AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機(jī)制的研究[D];清華大學(xué);2010年

2 張秀娟;TSH調(diào)節(jié)肝臟HMG-CoA還原酶磷酸化修飾的研究[D];山東大學(xué);2014年

3 趙順玉;消積飲聯(lián)合CIK通過(guò)AMPKα/Sp1/EZH2/DNMT1相關(guān)通路抗肺癌生長(zhǎng)的作用機(jī)制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 王紅亮;AMPK-α在鹵蟲(chóng)胚胎發(fā)育過(guò)程中對(duì)細(xì)胞有絲分裂調(diào)控的研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 周錫紅;三甲基甘氨酸通過(guò)AMPK途徑影響脂肪沉積的研究[D];浙江大學(xué);2015年

6 劉效磊;AMPK/mTOR介導(dǎo)有氧運(yùn)動(dòng)提高骨骼肌胰島素敏感性的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉書東;AICAR誘導(dǎo)激活的AMPK在肝臟抑制TSH/SREBP-2/HMGCR通路[D];山東大學(xué);2015年

8 杜宇;AMPK調(diào)控組蛋白糖基化修飾的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

9 李知行;電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠肝臟AMPK、ACC的干預(yù)機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

10 尉娜;AMPK通過(guò)mTOR促進(jìn)腦缺氧條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究[D];鄭州大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柯志強(qiáng);AMPK信號(hào)通路在白藜蘆醇改善高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞損傷中的作用[D];湖北科技學(xué)院;2015年

2 肖瑤;AMPK對(duì)低氧誘導(dǎo)血管生成作用的研究[D];湖北科技學(xué)院;2015年

3 王玉兵;HIF-1α、AMPK、E-cadherin在前列腺癌組織中的表達(dá)及意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 魏蘇玉;乙醇對(duì)H4-ⅡE細(xì)胞脂質(zhì)代謝及AMPK表達(dá)的影響[D];延邊大學(xué);2015年

5 陳婷;肌肉特異敲除AMPKα2對(duì)小鼠脂代謝的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 張二東;銅離子及模擬太空環(huán)境通過(guò)ROS/AMPK信號(hào)誘導(dǎo)人B淋巴母細(xì)胞凋亡[D];蘭州大學(xué);2015年

7 徐英秀;硫化氫通過(guò)AMPK激活調(diào)控腦缺血后小膠質(zhì)細(xì)胞的極化狀態(tài)[D];蘇州大學(xué);2015年

8 黃艷;AMPK和SIRT-1參與定時(shí)高脂飲食對(duì)小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究[D];蘇州大學(xué);2015年

9 楊霞;AMPK參與線粒體通路介導(dǎo)的氟致H9c2心肌細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 閆旭紅;胰島素對(duì)1型糖尿病大鼠睪丸脂聯(lián)素及其受體、AMPK、AKT和eNOS表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：AMPK在炎癥誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)沉積中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：266492