本文關(guān)鍵詞：調(diào)控頭頸鱗癌端粒酶miRNAs的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過廣譜miRNA芯片技術(shù)篩查調(diào)控端粒酶活性的特異性miRNA。方法：選擇端粒酶陽性細(xì)胞株人喉鱗癌細(xì)胞(Hep-2),人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)及端粒酶陰性細(xì)胞株人骨肉瘤細(xì)胞(U-2 OS),正常組織細(xì)胞人肺上皮細(xì)胞(BEAS-2B),抽提所有細(xì)胞總RNA并進(jìn)行Hy3熒光標(biāo)記,在miRCURYTM LNAArray(v.11.0)(Exiqon)芯片上進(jìn)行雜交反應(yīng),同時(shí)采用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證miRNAs芯片結(jié)果的可靠性。結(jié)果：芯片結(jié)果顯示5種miRNA：hsa-miR-301b,hsa-miR-624,hsa-miR-22,hsa-miR-618,hsa-miR-1267在端粒酶陽性細(xì)胞中高表達(dá),7種miRNA：hsa-miR-512-5p, hsa-miR-647, hsa-miR-194, hsa-miR-135a, hsa-miR-621hsa-miR-640,hsa-miR-155在端粒酶陰性細(xì)胞中高表達(dá)。在所有這些表達(dá)差異的miRNA中,miR-512-5P在兩類細(xì)胞中表達(dá)差異最大。結(jié)論：miR-512-5P可能參與了腫瘤細(xì)胞端粒酶活性的內(nèi)在調(diào)控。目的：探討miRNA-512-5P調(diào)控腫瘤端粒酶可能的機(jī)制。方法：通過miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)尋找miR-512-5p可能的靶基因,構(gòu)建miR-512-5p質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞,觀察miR-512-5p對(duì)靶基因的抑制作用,并通過熒光素酶方法驗(yàn)證其作用靶點(diǎn)。結(jié)果：經(jīng)多個(gè)miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)交叉分析后,發(fā)現(xiàn)miR-512-5p可能的靶基因?yàn)槎肆Ｃ改孓D(zhuǎn)錄酶hTERT,在端粒酶陽性細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-512-5p質(zhì)粒后,hTERT蛋白表達(dá)量明顯下降,同時(shí)熒光素酶檢測(cè)發(fā)現(xiàn)熒光素酶活性下降明顯,揭示了miR-512-5p對(duì)hTERT的直接靶向和抑制作用。結(jié)論：miR-512-5p通過直接靶向抑制hTERT蛋白的表達(dá)從而抑制端粒酶活性。目的：探討miR-512-5p對(duì)頭頸部鱗癌細(xì)胞的抑制作用。方法：將miR-512-5p質(zhì)粒轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后,觀察腫瘤細(xì)胞端粒酶、端粒長(zhǎng)度的改變,細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞增殖的的變化情況。同時(shí)建立裸鼠荷瘤模型,在體內(nèi)水平驗(yàn)證miR-512-5p對(duì)腫瘤的抑制作用。結(jié)果：miR-512-5p能有效降低端粒酶的活性、縮短端粒長(zhǎng)度,同時(shí)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)生率增加,體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)導(dǎo)入miR-512-5p后瘤細(xì)胞增殖明顯受限。同時(shí)裸鼠移植瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了miR-512-5p可以明顯減慢腫瘤的生長(zhǎng)速度和瘤內(nèi)hTERT蛋白的表達(dá)。結(jié)論：miR-512-5p在體內(nèi)或者體外均能抑制頭頸部腫瘤的增殖,其作用機(jī)制可能與靶向抑制hTERT蛋白的表達(dá)導(dǎo)致端粒酶活性下降、端粒長(zhǎng)度縮短和細(xì)胞凋亡增加有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：頭頸部鱗癌 小分子RNA 端粒酶 端粒
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.91
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 英漢縮略名詞對(duì)照表12-13
• 引言13-16
• 第一部分 調(diào)控端粒酶miRNAs的篩選及驗(yàn)證16-27
• 前言16
• 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-27
• 第二部分 miR-512-5P調(diào)控端粒酶作用機(jī)制的研究27-39
• 前言27
• 實(shí)驗(yàn)材料27-29
• 實(shí)驗(yàn)方法29-34
• 結(jié)果34-36
• 附圖36-39
• 第三部分 miR-512-5p對(duì)頭頸鱗癌細(xì)胞抑制作用研究39-51
• 前言39-40
• 實(shí)驗(yàn)材料40-42
• 實(shí)驗(yàn)方法42-45
• 結(jié)果45-47
• 附圖47-51
• 討論51-57
• 全文總結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 綜述65-86
• 參考文獻(xiàn)78-86
• 攻讀博士期間發(fā)表文章情況86-87
• 致謝87

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