本文關(guān)鍵詞：Hsa-microRNA-138-5p靶向調(diào)控FOXC1和Vimentin抑制胰腺癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Hsa-micro RNA-138-5p在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義目的:篩選胰腺癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中差異表達(dá)的micro RNA(mi RNA),擴(kuò)大樣本數(shù)量,判斷目標(biāo)mi RNA在胰腺癌組織、胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。方法:采用mi RNA表達(dá)譜芯片分析3對(duì)胰腺癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中mi RNA的差異性表達(dá);實(shí)時(shí)定量PCR檢測目標(biāo)mi RNA(hsa-mi R-138-5p)在擴(kuò)大樣本量的18對(duì)胰腺癌、對(duì)應(yīng)癌旁組織及8株胰腺癌細(xì)胞、正常胰腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況;收集臨床病例資料,分析mi R-138-5p的表達(dá)水平與胰腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果:胰腺癌組織差異性表達(dá)mi RNAs 80條,其中高表達(dá)68條、低表達(dá)12條,其中mi R-138-5p在3對(duì)胰腺癌中總體低表達(dá),而對(duì)應(yīng)癌旁組織高表達(dá),差異倍數(shù)3.64倍。擴(kuò)大樣本顯示,mi R-138-5p在胰腺癌組織中的表達(dá)比癌旁低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其表達(dá)水平與胰腺癌病理分化程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān);mi R-138-5p在8株胰腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)分別比正常胰腺細(xì)胞低1~10倍,且分化、增殖侵襲能力不同的胰腺癌細(xì)胞mi R-138-5p表達(dá)水平也有所差異。結(jié)論:mi R-138-5p在原發(fā)性胰腺癌組織及胰腺癌細(xì)胞系中呈低表達(dá)水平,與胰腺癌病理分化程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān)。第二部分Hsa-micro RNA-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖能力的影響目的:探討mi RNA-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞體內(nèi)、外增殖能力的影響。方法:構(gòu)建mi R-138-5p過表達(dá)慢病毒載體、抑制載體,感染胰腺癌細(xì)胞株,實(shí)時(shí)定量PCR檢測感染效率;CCK-8、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Ed U細(xì)胞增殖法檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞周期的影響;構(gòu)建裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞裸鼠皮下成瘤能力的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建mi R-138-5p慢病毒載體,CCK-8、平板克隆實(shí)驗(yàn)、Ed U細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)胰腺癌細(xì)胞mi R-138-5p表達(dá)可顯著降低胰腺癌細(xì)胞株增殖能力、下調(diào)mi R-138-5p表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞的增殖能力明顯加強(qiáng),相對(duì)于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);FCM結(jié)果顯示,上調(diào)胰腺癌細(xì)胞mi R-138-5p表達(dá)可阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期;裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)顯示,mi R-138-5p可抑制胰腺癌細(xì)胞皮下成瘤能力。結(jié)論:mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用,抑制胰腺癌細(xì)胞裸鼠皮下成瘤能力,其作用至少部分是通過阻滯細(xì)胞于G0/G1期而實(shí)現(xiàn)的。第三部分Hsa-micro RNA-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲性和化療敏感性的影響目的:探討mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞體、內(nèi)外侵襲轉(zhuǎn)移能力和化療敏感性的影響。方法:細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移能力的影響;Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響;選擇胰腺癌臨床常用化療藥物(吉西他濱和5-氟尿嘧啶),CCK-8檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響;構(gòu)建裸鼠胰腺癌肝轉(zhuǎn)移模型,檢測mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果:上調(diào)mi R-138-5p表達(dá)可顯著降低胰腺癌細(xì)胞株遷移和侵襲轉(zhuǎn)移能力、下調(diào)mi R-138-5p表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲轉(zhuǎn)移能力下降,相對(duì)于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);mi R-138-5p可增加胰腺癌細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的化療敏感性,其24h、48h及72h實(shí)驗(yàn)組IC50值較陰性對(duì)照組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);裸鼠胰腺癌肝臟轉(zhuǎn)移模型顯示,mi R-138-5p可抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞在肝臟微轉(zhuǎn)移灶的形成,相對(duì)于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:mi R-138-5p能降低胰腺癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力,增加胰腺癌細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的化療敏感性,減少裸鼠體內(nèi)胰腺癌肝轉(zhuǎn)移模型中肝臟遠(yuǎn)處微轉(zhuǎn)移灶的形成。第四部Hsa-micro RNA-138-5p的靶基因鑒定及其調(diào)控人胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制目的:明確mi R-138-5p抑制胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的作用靶點(diǎn)及機(jī)制,闡明mi R-138-5p作用靶基因的生物學(xué)功能。方法:運(yùn)用Target Scan,mi Randa,Micro Cosm等多個(gè)mi RNAs靶基因的數(shù)據(jù)庫對(duì)mi R-138-5p靶基因進(jìn)行預(yù)測,初步篩選出2個(gè)與腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的潛在靶基因——叉頭框蛋白C1(fork head box C1,FOXC1)和波形蛋白(Vimentin,VIM),采用雙熒光素酶報(bào)告基因分別驗(yàn)證mi R-138-5p與FOXC1的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)及VIM的3’UTR存在靶向序列,確定它們的直接靶向調(diào)控關(guān)系,實(shí)時(shí)定量PCR及western blot進(jìn)一步驗(yàn)證mi R-138-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞FOXC1和VIM基因m RNA及蛋白水平表達(dá)影響;利用小干擾RNA(si RNA)檢測靶基因FOXC1和VIM對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。最后,采用western blot及免疫熒光對(duì)相關(guān)通路蛋白進(jìn)行初步探討。結(jié)果:熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)顯示,mi R-138-5p可直接結(jié)合于FOXC1、VIM的3’UTR,實(shí)時(shí)定量PCR、western blot也觀察到mi R-138-5p可明顯抑制FOXC1、VIM基因m RNA和蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);FOXC1、VIM在胰腺癌組織中明顯低表達(dá);si RNA下調(diào)胰腺癌細(xì)胞FOXC1表達(dá)后(模擬mi R-138-5p的作用)胰腺癌細(xì)胞增殖能力減弱;si RNA下調(diào)胰腺癌細(xì)胞VIM表達(dá)后(模擬mi R-138-5p的作用)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱,當(dāng)同時(shí)抑制胰腺癌細(xì)胞mi R-138-5p和FOXC1的表達(dá)后,CCK-8結(jié)果顯示,單獨(dú)轉(zhuǎn)染FOXC1 si RNA組細(xì)胞數(shù)目明顯減少,單獨(dú)轉(zhuǎn)染mi R-138-5p inhibitor組細(xì)胞數(shù)目明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而兩者同時(shí)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞數(shù)目基本恢復(fù)至對(duì)照組水平,與對(duì)照組比較,差異統(tǒng)無計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明抑制FOXC1表達(dá)能減少mi R-138-5p inhibitor引起的促進(jìn)細(xì)胞增殖的效應(yīng);當(dāng)同時(shí)抑制細(xì)胞中mi R-138-5p和VIM的表達(dá)后,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,單獨(dú)轉(zhuǎn)染VIM si RNA組細(xì)胞數(shù)目明顯減少,單獨(dú)轉(zhuǎn)染mi R-138-5p inhibitor組細(xì)胞數(shù)目明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而兩者同時(shí)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞侵襲數(shù)目基本恢復(fù)至對(duì)照組水平,與對(duì)照組比較,差異統(tǒng)無計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明抑制VIM表達(dá)能減少mi R-138-5p inhibitor引起的促進(jìn)細(xì)胞侵襲效應(yīng)。Western blot對(duì)FOXC1下游可能作用基因進(jìn)行了探討,結(jié)果顯示,細(xì)胞周期蛋白CNND1的表達(dá)顯著降低;Western blot結(jié)果顯示上調(diào)胰腺癌細(xì)胞mi R-138-5p表達(dá)后,細(xì)胞上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)增強(qiáng),而間質(zhì)標(biāo)志物VIM表達(dá)降低,免疫熒光檢測也得到同樣的結(jié)果。結(jié)論:mi R-138-5p通過直接靶向調(diào)控FOXC1的表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞增殖,可能部分由于抑制了周期蛋白CNND1的表達(dá)而實(shí)現(xiàn);mi R-138-5p通過直接靶向調(diào)控VIM的表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,可能部分由于調(diào)控細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)進(jìn)程而實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 基因芯片 微小RNA 胰腺癌 mi R-138-5p 增殖 皮下成瘤 胰腺癌 mi R-138-5p 侵襲與轉(zhuǎn)移 化療敏感性 胰腺癌 mi R-138-5p 叉頭框蛋白C1 波形蛋白
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-17
• 略縮詞表17-19
• 第一部分 Hsa-micro RNA-138-5p 在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義19-34
• 引言19-20
• 1.1 材料與方法20-28
• 1.2 結(jié)果28-31
• 1.3 討論31-33
• 1.4 小結(jié)33-34
• 第二部分 Hsa-micro RNA-138-5p 對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖能力的影響34-54
• 引言34
• 2.1 材料與方法34-43
• 2.2 結(jié)果43-51
• 2.3 討論51-53
• 2.4 小結(jié)53-54
• 第三部分 Hsa-micro RNA-138-5p 對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及化療耐藥的影響54-64
• 引言54
• 3.1 材料與方法54-58
• 3.2 結(jié)果58-61
• 3.3 討論61-63
• 3.4 小結(jié)63-64
• 第四部分 Hsa-micro RNA-138-5p 靶基因鑒定及其調(diào)控人胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制64-88
• 引言64-65
• 4.1 材料與方法65-72
• 4.2 結(jié)果72-84
• 4.3 討論84-86
• 4.4 小結(jié)86-88
• 全文總結(jié)88-89
• 參考文獻(xiàn)89-95
• 綜述95-104
• 參考文獻(xiàn)101-104
• 作者簡歷104-106
• 致謝106-107
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集107

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;MicroRNAs in neural cell development and brain diseases[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

  本文關(guān)鍵詞：Hsa-microRNA-138-5p靶向調(diào)控FOXC1和Vimentin抑制胰腺癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：257734