本文關(guān)鍵詞：肝竇內(nèi)皮旁分泌MIF促進肝內(nèi)預(yù)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌細胞的趨化和生長，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的結(jié)直腸癌患者最主要的死亡原因是由于發(fā)生了肝轉(zhuǎn)移,大約有三分之一被確診為結(jié)直腸癌的患者在3年內(nèi)會發(fā)生肝轉(zhuǎn)移¨。只有25%伴有孤立肝轉(zhuǎn)移病灶的結(jié)直腸癌患者能進行有效的手術(shù)切除治療,并且僅有21%-48%的患者術(shù)后生存期超過5年。結(jié)直腸癌患者治療失敗和死亡的主要原因是發(fā)生轉(zhuǎn)移且形成了轉(zhuǎn)移瘤。Paget在1889年提出的“種子與土壤”假說已經(jīng)為我們研究結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移機制提供了指導(dǎo)方向,腫瘤細胞與微環(huán)境中的支持細胞及它們所產(chǎn)生細胞因子的相互作用,共同參與了腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。2003年Fidler修正的“種子與土壤”假說已經(jīng)明確提出了轉(zhuǎn)移瘤的形成是靶器官微環(huán)境相關(guān)因子與轉(zhuǎn)移細胞協(xié)同作用的產(chǎn)物,抗轉(zhuǎn)移治療不僅要靶向阻斷腫瘤細胞的高轉(zhuǎn)移特性,而且應(yīng)該對抗靶器官微環(huán)境中適應(yīng)腫瘤細胞生長、血管發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的多種細胞與細胞因子,才可能防止和對抗惡性腫瘤轉(zhuǎn)移。肝臟被認為是結(jié)直腸癌最常見的轉(zhuǎn)移靶器官,其內(nèi)微環(huán)境非常適合腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移,因此,探討其與結(jié)直腸癌生長和轉(zhuǎn)移之間密切相關(guān)的因素尤為重要。本課題通過比較結(jié)直腸癌腫瘤細胞與轉(zhuǎn)移靶器官(肝)及非靶器官內(nèi)實質(zhì)和間質(zhì)細胞之間相互的趨化作用,篩選和鑒定與腫瘤細胞作用密切的關(guān)鍵細胞和細胞因子,闡明其調(diào)節(jié)腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移行為的分子機制,針對腫瘤細胞和靶器官微環(huán)境協(xié)同作用的細胞因子進行治療,以獲得抗種子和抗土壤的雙重抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療。研究方法1.篩選結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移靶器官(肝)與腫瘤細胞之間起趨化作用的關(guān)鍵細胞。我們首先評估了結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移靶器官(肝)來源的與非靶器官來源的正常細胞對結(jié)直腸癌細胞的趨化作用。應(yīng)用Transwell遷移小室實驗來比較正常細胞對結(jié)直腸癌(CRC)細胞的趨化作用,將人正常的細胞分別置入遷移小室的下層,結(jié)直腸癌細胞(SW480、HCT116和LS 1 74T)分別鋪在遷移小室的上層。人肝內(nèi)的正常細胞包括HHSECs(人肝竇內(nèi)皮細胞)、HL7702(人肝細胞)和LX-2(人肝星狀細胞),非靶器官來源的正常細胞包括HUVECs(人臍靜脈內(nèi)皮細胞)、293A(人胚腎細胞)和BJ(人包皮成纖維細胞)。隨后將正常細胞和腫瘤細胞的位置互換,HHSECs、HUVECs, HL7702和LX-2細胞置于小室的上層,結(jié)直腸癌細胞置于小室的下層,觀察腫瘤細胞是否具有趨化正常細胞遷移的能力。2.篩選轉(zhuǎn)移靶器官肝竇內(nèi)皮細胞(HHSECs)趨化腫瘤細胞遷移的關(guān)鍵細胞因子。收集Transwell、室上室和下室的細胞培養(yǎng)上清液,利用含有1000種人細胞因子抗體芯片篩選出HHSECs趨化腫瘤細胞遷移的關(guān)鍵細胞因子-白細胞游走抑制因子(MIF)。用含有MIF干擾片段的shRNA構(gòu)建的慢病毒載體包被的病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染HHSECs和結(jié)直腸癌細胞,以建立穩(wěn)定干擾MIF表達的細胞株。利用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)技術(shù)、免疫蛋白印跡實驗(Western Blot)和酶鏈免疫吸附實驗(ELISA)在細胞mRNA和蛋白表達以及外分泌水平檢測干擾效率。最后再通過Transwell小室,利用Mock/HHSECs條件培養(yǎng)基,shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基,Mock/HHSECs條件培養(yǎng)基加入p425(MIF特異性抑制劑)以及shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基中加入rhMIF(重組人白細胞游走抑制因子)分別誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞和干擾了MIF表達的結(jié)直腸癌細胞,驗證在HHSECs趨化腫瘤細胞遷移的過程中是HHSECs旁分泌的ME而非腫瘤細胞來源的MIF起到了關(guān)鍵的作用。3. HHSECs旁分泌MIF對結(jié)直腸癌細胞的生物學(xué)影響。(1)普通光學(xué)顯微鏡觀察用培養(yǎng)了HHSECs細胞的條件培養(yǎng)基再培養(yǎng)腫瘤細胞后,細胞形態(tài)發(fā)生的改變。(2)運用免疫熒光技術(shù)檢測HHSECs趨化腫瘤細胞時發(fā)生遷移和未發(fā)生遷移的細胞是否發(fā)生上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化(EMT)。(3)通過免疫蛋白印跡法驗證HHSECs外分泌的MIF誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞發(fā)生EMT。(4)利用細胞計數(shù)試劑盒(CCK8)和EdU細胞增殖檢測HHSECs旁分泌的MIF對結(jié)直腸癌細胞增殖能力的影響。(5)采用流式細胞儀測定HHSECs旁分泌的MIF對結(jié)直腸癌細胞周期和凋亡的影響。4.體內(nèi)驗證HHSECs旁分泌的MIF對結(jié)直腸癌細胞生長和轉(zhuǎn)移的作用。(1)原位移植裸鼠實驗性轉(zhuǎn)移模型用來確定是否HHSECs分泌的MIF能影響CRC細胞的生長、侵襲和肝轉(zhuǎn)移。CRC細胞,CRC細胞混合Mock/HHSECs,CRC細胞混合shMIF/HHSECs和HHSECs分別接種至裸鼠盲腸漿膜下,觀察HHSECs分泌的MIF對腫瘤生長和遠處轉(zhuǎn)移的影響。(2)將Mock/HHSECs和shMIF/HHSECs分別與干擾了MIF表達的結(jié)直腸癌細胞共同種植于BALB/c-Nude裸鼠背部皮下,進一步證實HHSECs外分泌的MIF對腫瘤發(fā)生和生長的影響。5.分析MIF與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征的相互關(guān)系。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測MIF在229例從南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科收集的結(jié)直腸癌組織樣本中的表達情況,結(jié)合患者的臨床病理特征,探討HHSECs分泌的MIF與結(jié)直腸癌及肝轉(zhuǎn)移瘤的關(guān)系。6.探討HHSECs旁分泌的MIF趨化結(jié)直腸癌細胞遷移的機制。利用免疫蛋白印跡法及免疫熒光技術(shù)檢測HHSECs分泌的MIF刺激結(jié)直腸癌細胞后細胞內(nèi)骨架蛋白及相關(guān)調(diào)節(jié)因子的改變。研究結(jié)果1.肝竇內(nèi)皮細胞是趨化結(jié)直腸癌細胞遷移的關(guān)鍵細胞。我們先評估是否來自肝臟和非特異性靶器官的正常細胞對CRC細胞遷移是否有不同影響。應(yīng)用Transwell遷移小室來比較正常細胞對CRC細胞趨化的能力,我們將人類正常細胞放置在下層小室,分別將CRC細胞(SW480,HCT116和LS174T)放置在上層小室。肝臟的正常細胞包括]HHSECs,HL7702(人肝細胞)和LX-2(人肝星狀細胞)和源自非特異性靶器官的對照細胞如：HUVECs(人臍靜脈內(nèi)皮細胞),293A(人胚胎腎細胞)和BJ(人包皮成纖維細胞)進行比較。該模型模擬了肝血竇內(nèi)預(yù)轉(zhuǎn)移的癌細胞被相鄰的細胞趨化的一個過程。結(jié)果表明,HHSECs誘導(dǎo)CRC發(fā)生遷移的細胞數(shù)量是HUVECs誘導(dǎo)的3-14倍(F=1929.169 P0.001),HL7702、LX-2、HL7702、293A、LX-2和BJ細胞誘導(dǎo)CRC細胞的遷移的能力同空白對照組并沒有顯著差異。來源于轉(zhuǎn)移靶器官的細胞,如HL7702和LX-2,對CRC細胞的遷移能力同來自非靶器官的細胞,如293A(F=0.352 P=0.705)和BJ(F=0.071 P=0.931)相比,并沒有積極顯著的促進作用。隨后,我們將Transwell小室中正常細胞和腫瘤細胞的位置發(fā)生對換,置于下層小室的CRC細胞并沒有趨化置于上層小室的]HHSECs(F=2.717 P=0.052), HUVECs (F=0.155 P=0.926),HL7702 ((F=56.366 P0.001,由于細胞遷移數(shù)均數(shù)較少,實際比較的意義并不大)和LX-2(F=1.288 P=0.282)發(fā)生顯著的遷移。此外,當HHSECs. HL7702和LX-2細胞混合培養(yǎng)來誘導(dǎo)CRC細胞遷移時,混合細胞的化學(xué)趨化作用并不強于單獨用HHSECs趨化。另外,我們也把以轉(zhuǎn)移到肝臟為特定目標器官的腫瘤細胞,HCC1937(人類乳腺癌細胞),作為一個陽性對照,把另一基本不轉(zhuǎn)移到肝臟的腫瘤細胞,RL95(子宮內(nèi)膜癌細胞)作為陰性對照,用HHSECs、HL7702和LX-2細胞來分別誘導(dǎo),有趣的是,HHSECs誘導(dǎo)HCC1937(F=687.850 P0.001)遷移的能力顯著強于RL95 (F=1.407 P=0.244),但乳腺癌細胞和子宮內(nèi)膜癌細胞并沒有趨化HHSECs (F=2.753 P=0.072)或HUVECs (F=2.533 P=0.087)遷移的能力。因此,Transwell遷移實驗證明HHSECs是趨化CRC細胞轉(zhuǎn)移到特定目標器官一肝臟的關(guān)鍵細胞。2.肝竇內(nèi)皮細胞旁分泌的MIF是趨化結(jié)直腸癌細胞遷移的重要因子。為了確定HHSECs可能會釋放哪些介導(dǎo)因子誘導(dǎo)CRC細胞發(fā)生明顯遷移,我們收集Transwell上室和下室內(nèi)的細胞培養(yǎng)上清液(條件培養(yǎng)基),用包含1000種抗體的人類細胞因子陣列檢測。我們分析了抗體陣列檢測數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),MIF、 IGFBP-7、Smad 4、SPARC、thrombospondin口Ras的表達在HHSECs培養(yǎng)基中顯著高于HUVECs和CRC細胞培養(yǎng)基(F=583.395 P0.001)。這些蛋白中,HHSECs條件培養(yǎng)基同HUVECs、SW480和HCT116細胞培養(yǎng)基相比,MIF的表達是最高的。兩種MIF特異性的抑制劑(ISO-1和p425)能抑制HHSECs誘導(dǎo)的CRC細胞遷移。作為陽性對照,在培養(yǎng)基中加入rhMIF(人類重組MIF)后,CRC細胞的遷移能力明顯增強。為了評價HHSECs外分泌的MIF介導(dǎo)腫瘤細胞的趨化作用,我們用慢病毒包裝的發(fā)夾式RNA(shRNA)干擾HHSECs內(nèi)MIF的表達。應(yīng)用實時定量PCR(qPCR),蛋白免疫印跡(WB)和酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)驗證干擾細胞內(nèi)和外分泌MIF表達的效率。我們發(fā)現(xiàn),Mock/HHSECs條件培養(yǎng)基中加入MIF的抑制劑p425(100 nM)或shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基能抑制HHSECs誘導(dǎo)的遷移作用,但這種抑制作用可以通過補充rhMIF(50 nM)得到恢復(fù)。為了闡明HHSECs分泌的MIF還是CRC細胞的MIF在趨化遷移過程中起主要作用,我們干擾了SW480和HCT116細胞內(nèi)MIF的表達。Mock/HHSECs趨化shMIF/SW480和shMIF/HCT116遷移能力顯著強于shMIF/HHSECs和Mock/HHSECs加上p425的誘導(dǎo)作用(F=1653.369 P0.001)。我們也運用WB和ELISA檢測是否在其他轉(zhuǎn)移性微環(huán)境中的細胞也表達或外分泌MIF,包括HL7702、LX-2和HUVECs。 HL7702,LX-2和HUVECs在細胞內(nèi)也表達MIF,但是外分泌少量的MIF。我們運用RT-PCR擴增并檢測了MIF在HHSECs、SW480、HCT116和HUVECs由mRNA的編碼序列,發(fā)現(xiàn)它們的序列是一致的。因此,HHSECs分泌的MIF是介導(dǎo)HHSECs趨化CRC細胞遷移的一個關(guān)鍵因子。3.肝竇內(nèi)皮細胞分泌的MIF促進結(jié)直腸癌細胞發(fā)生EMT,增殖以及凋亡抵抗。當CRC細胞用HHSECs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后,CRC細胞胞質(zhì)突起形成海星樣的形狀。Transwell遷移模型用來展示HHSECs趨化CRC細胞發(fā)生遷移的過程中是否發(fā)生了EMT。我們發(fā)現(xiàn)HHSECs誘導(dǎo)發(fā)生遷移的CRC細胞同未發(fā)生遷移的CRC細胞相比,強表達間質(zhì)細胞標志物,如N-鈣粘著蛋白(N-ca)和波形蛋白(VIM),弱表達上皮細胞標志物E-鈣粘著蛋白(E-ca)。為了確認EMT的發(fā)生是否由HHSECs分泌的MIF介導(dǎo),我們用各種不同的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)CRC細胞24小時,WB檢測表明,在包含更多的可溶性MIF的條件培養(yǎng)基中,CRC細胞N-ca和VIM表達增強,E-ca表達減弱。運用CCK8實驗檢測旁分泌的MIF對CRC細胞增殖能力的影響,SW480和HCT116細胞用不同的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)。CCK8測定結(jié)果表明,含有較高濃度外分泌的MIF條件培養(yǎng)基有利于CRC細胞的增殖,這與EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)細胞增殖檢測結(jié)果相一致。為了探討旁分泌的MIF促進CRC細胞增殖的相關(guān)機制,我們通過流式細胞術(shù)檢測了MIF對細胞周期的影響。旁分泌的MIF能顯著增加G2期的細胞比例(F=79.827 P0.001),但對細胞G1期和S期影響不明顯。此外,我們運用膜聯(lián)蛋白V染色作為凋亡的指標用來衡量凋亡對增殖的影響�？扇苄訫IF能夠抑制5-氟尿嘧啶(5-FU)誘導(dǎo)CRC細胞的凋亡(F=205.862 P0.001)�？偟膩碚f,這些數(shù)據(jù)提示HHSECs旁分泌的MIF在誘導(dǎo)CRC細胞遷移時能激活EMT,促進腫瘤的細胞增殖和凋亡抵抗。4.HHSECs旁分泌的MIF有利于結(jié)直腸癌在體內(nèi)生長和轉(zhuǎn)移。原位移植裸鼠實驗性轉(zhuǎn)移模型用來確定HHSECs旁分泌的MIF對CRC細胞生長、侵襲和肝轉(zhuǎn)移的影響。CRC細胞,CRC細胞混合Mock/HHSECs,CRC細胞混合shMIF/HHSECs和HHSECs分別接種至裸鼠盲腸漿膜下,觀察8周。裸鼠被安樂死后,進行大體標本和顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示,CRC細胞混合Mock/HHSECs接種組,結(jié)直腸原位瘤的大小、腫瘤生長的速度、體積、重量和形成腫瘤結(jié)節(jié)的數(shù)量,以及在大體和顯微鏡下觀察,肝和肺內(nèi)形成的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量(x2=11.356 P0.001)都比單獨接種CRC細胞組,或CRC細胞與shMIF/ HHSECs混合接種組顯著增加。然而,HHSECs單獨接種,本身并不產(chǎn)生任何腫塊。此外,shMIF/SW480細胞,shMIF/SW480細胞混合Mock/HHSECs,或shMIF/SW480細胞混合shMIF/HHSECs接種至裸鼠皮下,結(jié)果表明,Mock/ HHSECs細胞分泌的MIF能促進腫瘤的發(fā)生和腫瘤的生長 (F=13.909P=0.004)。總之,這些結(jié)果表明HHSECs分泌MIF能促進CRC細胞在體內(nèi)形成腫瘤和轉(zhuǎn)移。5.MIF與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移瘤的生長相關(guān)。我們用免疫組織化學(xué)染色檢測MIF蛋白在CRC病人原位瘤樣本的表達情況,229例CRC患者的樣本來源于南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院病理科。結(jié)果顯示,MIF在原位瘤的表達水平與腫瘤的侵襲、組織學(xué)分期、患者的生存時間、淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移并沒有顯著相關(guān)性。因此,原位瘤微環(huán)境中CRC細胞來源的MIF或其它不確定細胞來源的MIF對腫瘤的預(yù)轉(zhuǎn)移并沒有起到重要的作用。我們還利用免疫組織化學(xué)檢測了MIF在29位CRC患者原發(fā)腫瘤和肝轉(zhuǎn)移管狀腺癌的配對樣本中的表達。根據(jù)MIF在原位腫瘤和肝轉(zhuǎn)移瘤中表達的不同,我們將所有配對的樣本分為兩組。A組包括MIF的表達水平在原位瘤中低于肝轉(zhuǎn)移瘤,而B組包括MIF的表達水平的樣本在原位瘤中高于或等于肝轉(zhuǎn)移瘤。29對配對樣本分析,A組中0例(0%)和B組中5例(45%)患者的肝轉(zhuǎn)移瘤最大直徑小于3 cm(P0.05)：A組中18例(100%)和B組中6例(55%)患者的肝轉(zhuǎn)移瘤最大直徑大于或等于3 cm(P0.05)。這些結(jié)果表明,肝轉(zhuǎn)移瘤的大小和MIF的表達呈正相關(guān),提示HHSECs對腫瘤的生長有促進作用。6. HHSECs旁分泌的MIF誘導(dǎo)CRC細胞遷移通過磷酸化cofilin調(diào)節(jié)F-actin。闡明旁分泌MIF誘導(dǎo)CRC細胞遷移所涉及的信號通路是至關(guān)重要的。我們用之前的方法將CRC細胞用條件培養(yǎng)基來培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),用Mock/HHSECs的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)與其他條件培養(yǎng)基(shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基、Mock/ HHSECs條件培養(yǎng)基加入p425和基礎(chǔ)培養(yǎng)基)相比,CRC細胞內(nèi)p-cofilin的表達顯著增多。然而,在shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基中加入rhMIF后,細胞內(nèi)p-cofilin的表達也會增強。cofilin磷酸化使其失去活性,導(dǎo)致肌動蛋白細絲的聚合[12]。如WB和免疫熒光結(jié)果所示,F-actin的表達在Mock/HHSECs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后明顯增強,但用shMIF/HHSECs條件培養(yǎng)基或Mock/HHSECs條件培養(yǎng)基中加上p425培養(yǎng)后,增強的表達會被抵消。為了驗證外分泌的MIF信號通路是否會導(dǎo)致CRC細胞內(nèi)cofilin磷酸化以及參與調(diào)節(jié)F-action,我們用不同濃度的rhMIF來刺激CRC細胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn),50 nM rhMIF會導(dǎo)致p-cofilin和F-action表達顯著增加,如果rhMIF濃度超過50 nM, p-cofilin和F-action的表達并沒有進一步增加。所以,HHSECs分泌的MIF對cofilin/F-action的影響特點提示,它可能通過調(diào)節(jié)細胞骨架重構(gòu)促進CRC細胞的遷移。結(jié)論1.結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移靶器官肝竇內(nèi)皮細胞是肝內(nèi)趨化結(jié)直腸癌細胞遷移能力增強的關(guān)鍵細胞。2.肝竇內(nèi)皮細胞旁分泌的MIF是趨化結(jié)直腸癌細胞遷移的關(guān)鍵細胞因子。3.肝竇內(nèi)皮細胞旁分泌的MIF促進肝內(nèi)預(yù)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌細胞的趨化和生長。4.MIF刺激結(jié)直腸癌細胞內(nèi)p-cofilin表達增多與抑制F-actin解聚有關(guān)。5.結(jié)直腸癌原發(fā)癌MIF的表達與患者預(yù)后無關(guān),但與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤的生長相關(guān)。本研究的創(chuàng)新之處1.展現(xiàn)了腫瘤特異性轉(zhuǎn)移器官內(nèi)基質(zhì)細胞參與調(diào)節(jié)腫瘤生長的旁分泌通路。2.確定HHSECs是趨化預(yù)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌細胞遷移的主要誘餌細胞。3.證明HHSECs分泌的MIF而非腫瘤細胞自身的MIF在腫瘤發(fā)生、生長以及轉(zhuǎn)移中起到關(guān)鍵的促進作用。4. HHSECs以及其旁分泌的MIF有可能成為抗土壤和抗種子治療的共同靶點,為對抗預(yù)轉(zhuǎn)移狀態(tài)下腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移治療提供理論支持。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 肝竇內(nèi)皮細胞 MIF 旁分泌 趨化 預(yù)轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-25
• 前言25-28
• 第一章 結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移靶器官(肝)與腫瘤細胞之間趨化作用的關(guān)鍵細胞篩選28-42
• 1. 材料28-29
• 2. 方法29-30
• 3. 結(jié)果30-38
• 4. 討論38-42
• 第二章 篩選和驗證HHSECs趨化結(jié)直腸癌細胞遷移的關(guān)鍵細胞因子42-64
• 1. 材料42-43
• 2. 方法43-52
• 3. 結(jié)果52-60
• 4. 討論60-64
• 第三章 HHSECs旁分泌MIF對結(jié)直腸癌細胞生物學(xué)特性的影響64-79
• 1. 材料64-65
• 2. 方法65-68
• 3. 結(jié)果68-75
• 4. 討論75-79
• 第四章 HHSECs旁分泌MIF對結(jié)直腸癌細胞生長和轉(zhuǎn)移作用的體內(nèi)驗證79-95
• 1. 材料79-80
• 2. 方法80-83
• 3. 結(jié)果83-92
• 4. 討論92-95
• 第五章 HHSECs旁分泌的MIF誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞遷移的機制探討95-105
• 1. 材料95-96
• 2. 方法96-98
• 3. 結(jié)果98-102
• 4. 討論102-105
• 全文小結(jié)105-107
• 參考文獻107-120
• 附錄 中英文縮略對照表120-121
• 致謝121-124
• 統(tǒng)計學(xué)審稿證明124

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：肝竇內(nèi)皮旁分泌MIF促進肝內(nèi)預(yù)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌細胞的趨化和生長，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：257557