本文關(guān)鍵詞：ITP中IL-27抑制血小板破壞和地西他濱促進(jìn)血小板生成的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》 2015年

地西他濱對(duì)急性髓系白血病多藥耐藥及免疫調(diào)控的機(jī)制研究

丁潔  

【摘要】：目的：白血病為全球十大高發(fā)惡性腫瘤之一,我國(guó)發(fā)病率為2.1-6.9/10萬(wàn),死亡率高,在35歲以下的惡性腫瘤患者中高居首位。腫瘤相關(guān)抗原表達(dá)沉默從而形成免疫逃逸,這與白血病的發(fā)生、復(fù)發(fā)密切相關(guān)。地西他濱(Decitabine, DAC)是DNA去甲基化酶抑制劑,能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性,強(qiáng)化機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答,與自身或過(guò)繼性輸注免疫細(xì)胞發(fā)揮協(xié)同作用。我們據(jù)此設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)(NCT01690507),應(yīng)用地西他濱與CAG方案化療聯(lián)合HLA半相合供者淋巴細(xì)胞輸注(Donor Lymphocyte Infusion, DLI)治療老年急性髓系白血病,緩解率達(dá)到目前治療手段中的較高水平。本研究旨在探索基于地西他濱的化療方案聯(lián)合供者淋巴細(xì)胞輸注是否能夠發(fā)揮協(xié)同作用,并進(jìn)一步探討作用機(jī)制。方法：首先,探索不含地西他濱的供者淋巴細(xì)胞輸注是否有效。我們?cè)诘?天給予Balb/c小鼠(7-8W,♀)腹腔接種白血病細(xì)胞WEHI-3共1×105/只,分為四組PBS組、DLI組、DAC組、DAC+DLI組,后兩組第1-5天予第一周期DAC腹腔注射,DLI組和DAC+DLI組在第7天和第17天分別予以兩次尾靜脈輸注C57×Balb/c F1(CB6F1)小鼠MHC半相合脾臟單個(gè)核細(xì)胞,模擬臨床供者淋巴細(xì)胞輸注,第19天開(kāi)始第二周期的治療,方法同第一周期,每隔兩天觀察小鼠存活情況,小鼠瀕死狀態(tài)下實(shí)施安樂(lè)死；其次,證實(shí)基于地西他濱的化療方案聯(lián)合DLI能夠延長(zhǎng)生存時(shí)間。我們根據(jù)用藥情況分為三組,分別是PBS組、DAC+Ara-C組和DAC+Ara-C+DLI組,第0天處理方式同前,后兩組均于第1-5天連續(xù)腹腔注射DAC和Ara-C, DAC+Ara-C+DLI組于第7天進(jìn)行小鼠脾臟細(xì)胞輸注,觀察小鼠生存時(shí)間；最后,采用實(shí)時(shí)定量PCR的方法,對(duì)參與DCAG+DLI方案受試者的外周血嵌合情況進(jìn)行分析。結(jié)果：DLI組與PBS組小鼠生存時(shí)間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;相對(duì)于PBS組,DAC能夠明顯延長(zhǎng)AML小鼠生存時(shí)間(P0.0001),聯(lián)合DLI發(fā)揮協(xié)同作用,進(jìn)一步延長(zhǎng)AML小鼠生存期(P=0.01)。受試者外周血嵌合分析表明,供者淋巴細(xì)胞輸注第3-4天,受試者體內(nèi)檢測(cè)到的供者細(xì)胞數(shù)量最多,后逐漸降低,第20天未檢測(cè)到供者細(xì)胞。結(jié)論：在本研究所采用的小鼠AML模型中,與地西他濱聯(lián)合阿糖胞苷化療相比,供者脾臟單個(gè)核細(xì)胞輸注聯(lián)合地西他濱及阿糖胞苷化療可顯著延長(zhǎng)AML荷瘤小鼠生存時(shí)間,其中,含地西他濱的聯(lián)合化療是MHC半相合脾臟單個(gè)核細(xì)胞輸注發(fā)揮抗白血病效應(yīng)所必須的。供者淋巴細(xì)胞輸注增強(qiáng)患者自身抗白血病免疫應(yīng)答可能是供者單個(gè)核細(xì)胞輸注的抗白血病作用機(jī)制之一,但有待進(jìn)一步的深入研究。目的：白血病是全球十大高發(fā)惡性腫瘤之一,在35歲以下惡性腫瘤患者中,死亡率高居首位,其中難治復(fù)發(fā)白血病是治療失敗的主要原因之一,導(dǎo)致難治復(fù)發(fā)白血病的根本原因則是多藥耐藥性(Multi-drug Resistance, MDR)的產(chǎn)生。多藥耐藥的產(chǎn)生往往導(dǎo)致化療療效減低甚至化療失敗,逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性已成為近年研究的焦點(diǎn)之一。目前已有研究表明地西他濱(Decitabine, DAC)可能逆轉(zhuǎn)部分實(shí)體瘤及血液系統(tǒng)惡性疾病的耐藥性,但仍處于探索階段。本研究旨在對(duì)比觀察地西他濱對(duì)慢粒急變白血病細(xì)胞系K562及其多藥耐藥株K562/A02增殖的影響,并進(jìn)行相關(guān)機(jī)制的研究,為地西他濱在逆轉(zhuǎn)耐藥領(lǐng)域的研究提供新的思路。方法：我們用CCK-8法和ATP法(Microplate Adenosine Triphosphate Assay, ATP)檢測(cè)K562和K562/A02細(xì)胞株的IC50,用qPCR法驗(yàn)證K562/A02的多藥耐藥基因MDR-1的表達(dá)水平,從而證明K562/A02為多藥耐藥細(xì)胞性；采用Illumina Human HT-12 BeadChip技術(shù)檢測(cè)K562與耐藥株K562/A02的基因表達(dá)差異,并對(duì)差異基因進(jìn)行基因功能、信號(hào)通路和共表達(dá)分析,構(gòu)建基因相互作用網(wǎng)絡(luò)及信號(hào)通路相互作用網(wǎng)絡(luò)；通過(guò)PharmMapper Server分析地西他濱可能作用靶點(diǎn),結(jié)合芯片分析結(jié)果尋找差異基因中的關(guān)鍵基因,并檢測(cè)關(guān)鍵基因在地西他濱處理前后的變化情況,明確地西他濱對(duì)多藥耐藥細(xì)胞株K562/A02增值抑制的作用機(jī)制。結(jié)果：K562/A02細(xì)胞具有多藥耐藥性,其對(duì)地西他濱的敏感性較K562更強(qiáng)。這一現(xiàn)象與地西他濱下調(diào)FAM64A基因表達(dá)有關(guān),但與基因組甲基化水平和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA Methyltransferases, DNMTs)表達(dá)水平無(wú)關(guān),可能涉及的信號(hào)通路包括細(xì)胞周期、HIF-1信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路和VEGF信號(hào)通路等。結(jié)論：地西他濱能夠通過(guò)顯著下調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)基因FAM64A的表達(dá)水平,抑制多藥耐藥細(xì)胞株K562/A02的細(xì)胞增殖(P0.05)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

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