本文關(guān)鍵詞：海水浸泡大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2015年

海水浸泡大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實驗研究

王海峰  

【摘要】：周圍神經(jīng)損傷常導(dǎo)致不同程度的永久性的功能障礙。周圍神經(jīng)損傷后神經(jīng)纖維內(nèi)環(huán)境隨之變化,各種局部因素(包括細(xì)胞、細(xì)胞因子)可影響這種微環(huán)境,直接或間接影響周圍神經(jīng)的損傷反應(yīng)和再生反應(yīng)。相對于人體的體液,海水是一種高滲、高鈉和高堿的環(huán)境。既往研究結(jié)果表明海水浸泡能加重人體多種器官組織的損傷。肢體開放性損傷所造成的受損神經(jīng)組織直接與海水發(fā)生接觸,海水浸泡在某種程度上可能參與并影響神經(jīng)損傷后的病理生理發(fā)展過程。本實驗建立一種大鼠坐骨神經(jīng)鉗夾傷合并海水浸泡傷動物模型,觀察海水浸泡對大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)運動功能的影響、電生理學(xué)變化、腓腸肌濕重恢復(fù)率及病理形態(tài)學(xué)變化：觀察早期使用甲基強(qiáng)的松龍對復(fù)合海水浸泡坐骨神經(jīng)損傷的治療作用；通過檢測損傷局部神經(jīng)組織中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、白細(xì)胞介素-1β(IL-ip)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-a(TNF-α)含量的變化,探討海水浸泡加重坐骨神經(jīng)繼發(fā)性損傷的機(jī)制及早期使用甲基強(qiáng)的松龍的保護(hù)作用機(jī)制,為下一步有針對性的進(jìn)行臨床治療提供了重要的理論基礎(chǔ)。本研究共分為兩部分。在實驗一中,我們?nèi)?34只雄性健康清潔級SD大鼠,隨機(jī)分成：假手術(shù)組(A組)、鉗夾損傷對照組(B組)和鉗夾損傷+海水浸泡組(C組),每組各78只。分別于術(shù)前、術(shù)后1d、1w-6w采用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)評分(sciatic functional index, SFI)評定神經(jīng)運動功能；術(shù)后6周通過復(fù)合肌肉動作電位(compound muscle action potentials, CMAP)觀察電生理學(xué)變化；蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色法、鍍銀染色法及堅固藍(lán)染色法觀察病理形態(tài)變化；分別于術(shù)前、術(shù)后2h、6h、4h、48h、1w采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測大鼠坐骨神經(jīng)組織中ROS、MDA含量,實時熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測iNOS mRNA表達(dá),免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry, IHC)檢測iNOS蛋白質(zhì)表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：A組大鼠術(shù)后坐骨神經(jīng)功能指數(shù)無變化,C組大鼠術(shù)后坐骨神經(jīng)功能指數(shù)在各時間點均低于B組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。C組的復(fù)合肌肉動作電位與其他兩組相比,潛伏期延長、振幅和神經(jīng)傳導(dǎo)速度減小,各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。HE染色、鍍銀染色及堅固藍(lán)染色顯示C組神經(jīng)纖維再生劣于B組。A組各時間點ROS、MDA含量無明顯變化,B組、C組坐骨神經(jīng)ROS、MDA含量傷后隨時間延長逐漸升高,在術(shù)后48h達(dá)到高峰,C組在術(shù)后各時間點含量均高于其他兩組,各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。A組坐骨神經(jīng)中iNOS mRNA及iNOS蛋白表達(dá)在各時間點都較低,B組、C組坐骨神經(jīng)組織中iNOS mRNA及iNOS蛋白表達(dá)隨時間延長逐漸升高,在術(shù)后48h到達(dá)高峰,組間各時間點比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01)。實驗結(jié)果提示：大鼠坐骨神經(jīng)損傷合并海水浸泡后,神經(jīng)損傷程度進(jìn)一步加重,神經(jīng)功能恢復(fù)劣于單純坐骨神經(jīng)損傷,其機(jī)制可能與海水浸泡使損傷的神經(jīng)組織內(nèi)活性氧、活性氮增加,從而引起神經(jīng)組織氧化應(yīng)激、硝化應(yīng)激加重有關(guān)。在實驗二中,我們?nèi)?92只健康清潔級SD大鼠,隨機(jī)分成：假手術(shù)組(A組),損傷對照組(B組),損傷+海水浸泡組(C組),甲基強(qiáng)的松龍治療組(D組)。每組各48只。分別于術(shù)后3d、1w、2w、4w,采用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)評定神經(jīng)運動功能；計算腓腸肌濕重的恢復(fù)率來評定肌肉重新獲得坐骨神經(jīng)支配而減輕肌肉萎縮的程度；HE染色觀察神經(jīng)病理形態(tài)變化；實時熒光RT-PCR檢測IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)；免疫組織化學(xué)法檢測IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)；并對結(jié)果進(jìn)行分析、比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：A組坐骨神經(jīng)功能指數(shù)在各時間點無變化,B、C、D組在3d、 1w、2w、4w功能指數(shù)逐漸升高,且C組低于B組、D組高于C組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；A組腓腸肌濕重的恢復(fù)率在各時間點差異無統(tǒng)計學(xué)意義,腓腸肌肌肉濕重恢復(fù)最好的是B組,D組次之,C組最差。術(shù)后3天、1周D組同A、B、C組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,術(shù)后2周、4周D組同A、B、C組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。HE染色結(jié)果顯示B、C、D組均有呈不規(guī)則圓環(huán)狀的神經(jīng)纖維再生,粗細(xì)不等,密度和數(shù)量不同。C組神經(jīng)纖維密度較B、D組稀疏且紊亂,形態(tài)也不一致,D神經(jīng)纖維密度高于C組。A組坐骨神經(jīng)中IL-1β、IL-6、 TNF-α mRNA表達(dá)在各時間點都較低；B、C、D組IL-1β、IL-6 mRNA表達(dá)量在3d、1w、2w、4w逐漸下降,各組3d、1w、2w表達(dá)比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),在4w時各組表達(dá)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05); B、C、D組TNF-α mRNA表達(dá)量在3d、1w、2w逐漸下降,各組3d、1w表達(dá)比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),在2w、4w時各組表達(dá)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。A組坐骨神經(jīng)中IL-1β IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)的陽性產(chǎn)物平均積分光密度值最低。B、C、D組在3天、1周時IL-1β、IL-6、 TNF-α蛋白表達(dá)陽性產(chǎn)物平均積分光密度值最高；2周時IL-1β、IL-6蛋白表達(dá)平均積分光密度值降低,TNF-α蛋白表達(dá)最低,術(shù)后4周IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)呈低水平。實驗結(jié)果提示：海水浸泡增加了損傷的坐骨神經(jīng)組織中IL-1β、IL-6和TNF-α基因和蛋白質(zhì)的表達(dá),導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加重,阻礙了神經(jīng)功能恢復(fù)。甲基強(qiáng)的松龍促進(jìn)海水浸泡大鼠坐骨神經(jīng)的再生,可能是通過抑制炎性反應(yīng)起作用。綜上所述,大鼠坐骨神經(jīng)損傷合并海水浸泡后,神經(jīng)損傷程度進(jìn)一步加重,神經(jīng)功能恢復(fù)更差。其機(jī)制之一可能與海水浸泡使損傷的神經(jīng)組織內(nèi)活性氧、活性氮增加致氧化應(yīng)激、硝化應(yīng)激加重有關(guān)；機(jī)制之二可能與海水浸泡增加了損傷的坐骨神經(jīng)組織IL-1β、IL-6和TNF-α基因和蛋白質(zhì)的表達(dá),導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加重有關(guān)。早期使用甲基強(qiáng)的松龍能促進(jìn)海水浸泡大鼠坐骨神經(jīng)的再生,其可能是通過抑制炎癥反應(yīng)起作用的。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R745.4
【目錄】：

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