本文關(guān)鍵詞：miR-1在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2015年

miR-1在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究

姚麗  

【摘要】：【研究背景】食管癌(carcinoma of esophagus)是世界上最常見的八大惡性腫瘤之一,好發(fā)于食管粘膜上皮或腺體,死亡率位居第六。盡管近幾年食管癌的手術(shù)和放化療等治療方法有較大進(jìn)展,但食管癌具有術(shù)后復(fù)發(fā)率高并且預(yù)后差的特點(diǎn)。食管癌的組織學(xué)類型主要為鱗狀細(xì)胞癌和腺癌,約占90%以上,在我國食管癌主要以鱗狀細(xì)胞癌為主。所以,目前針對食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制及治療方法的探索一直是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。Micro RNA(mi RNA)分子是一種單鏈、非編碼的長約17-25 nt小RNA分子,通過與靶基因的3-UTR區(qū)互補(bǔ)配對后對m RNA進(jìn)行切割或者翻譯抑制。Micro RNA分子在多種腫瘤發(fā)生中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用,被認(rèn)為是一組新的致癌基因或抑癌基因。有研究表明micro RNA在食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。如,在食管鱗狀細(xì)胞癌中mi R-21表達(dá)量增高并通過下調(diào)PTEN來調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲性;而mi R-203和mi R-205表達(dá)量降低,并分別通過Np63和ZEB2通路抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖活性。因此micro RNA可以作為一種新的并行之有效的生物標(biāo)志物,對發(fā)現(xiàn)和研究食管鱗狀細(xì)胞癌新的發(fā)生和發(fā)展機(jī)理,尋找早期診斷和治療的新基因靶位具有重要意義�！狙芯磕康摹�1、分析mi R-1差異表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的相互關(guān)系;2、觀察mi R-1對食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,探討mi R-1在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生中的作用,并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步研究�！痉椒ā�1、通過mi RNA基因芯片檢測食管鱗狀細(xì)胞癌組織同正常食管粘膜組織之間的mi RNA表達(dá)譜差異;2、通過實(shí)時定量PCR對芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證并篩選出目的分子mi R-1;3、擴(kuò)大樣本量,應(yīng)用實(shí)時定量PCR觀察mi R-1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性;4、體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測mi R-1在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中的表達(dá);5、將mi R-1的模擬物與抑制物及相應(yīng)對照分別轉(zhuǎn)染ECa109細(xì)胞和KYSE410細(xì)胞,通過MTT、平板克隆實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測mi R-1的生物學(xué)功能;6、裸鼠皮下食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞注射成瘤,原位注射mi R-1激動劑、激動劑對照及生理鹽水,體內(nèi)觀察mi R-1的生物學(xué)功能;7、生物信息學(xué)軟件預(yù)測mi R-1的靶基因并篩選出PREX1基因;8、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證靶基因PREX1同mi R-1的直接作用;9、應(yīng)用實(shí)時熒光PCR檢測食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中PREX1 m RNA的表達(dá)情況;10、ECa109細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染了mi R-1的模擬物及對照,Real-time PCR檢測PREX1的m RNA,Western blot檢測PREX1的蛋白表達(dá)變化;11、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測PREX1在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá),并分析與mi R-1表達(dá)的相關(guān)性�！窘Y(jié)果】1、對食管鱗狀細(xì)胞癌組織及正常食管粘膜組織的mi RNA表達(dá)譜統(tǒng)計分析結(jié)果顯示:將P0.05且表達(dá)差異大于2倍作為篩選標(biāo)準(zhǔn),獲得的mi RNA差異表達(dá)分子共43個,包括27個在癌組織里低表達(dá)mi RNA和16個在癌組織中高表達(dá)mi RNA。表達(dá)差異倍數(shù)大于4倍的mi RNA分子共24個,15個在癌組織中表達(dá)下調(diào)和9個在癌組織中表達(dá)上調(diào)。2、聚類分析結(jié)果顯示mi RNA表達(dá)譜在食管鱗狀細(xì)胞癌組織及正常食管粘膜上皮兩組內(nèi)分類明顯。9個差異表達(dá)mi RNA的實(shí)時定量熒光PCR檢測結(jié)果同其mi RNA芯片檢測結(jié)果一致,說明芯片結(jié)果真實(shí)可靠,經(jīng)過綜合分析后選取mi R-1作為研究對象。3、實(shí)時定量熒光PCR檢測結(jié)果顯示mi R-1在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)量下降明顯。90.6%(58/64)的患者食管鱗狀細(xì)胞癌組織中mi R-1的表達(dá)較正常組織下調(diào)超過50%(下調(diào)倍數(shù)大于2倍),并且統(tǒng)計分析顯示mi R-1的表達(dá)水平與食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤浸潤深度及臨床分期顯著相關(guān)。4、mi R-1在5種ESCC細(xì)胞系中表達(dá)量都顯著降低,轉(zhuǎn)染上調(diào)mi R-1表達(dá)量后,ESCC腫瘤細(xì)胞增殖活性下降,克隆形成能力減弱,而抑制mi R-1的表達(dá),則使腫瘤細(xì)胞的增殖速度上升,克隆形成能力增強(qiáng)。同時提高mi R-1表達(dá)量可以抑制腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲能力,降低mi R-1表達(dá)量,可顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)亦證明mi R-1能顯著抑制食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力。5、三個生物學(xué)軟件預(yù)測得到共同的181個mi R-1下游靶基因,基因功能聚類分析發(fā)現(xiàn),這些mi R-1下游靶基因與轉(zhuǎn)錄因子活性、DNA特異性結(jié)合、信號傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)及血管生成等生命過程密切相關(guān)。6、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)mi R-1可顯著性抑制含有其結(jié)合位點(diǎn)的PREX1野生型質(zhì)粒熒光蛋白的表達(dá),但對于突變型和對照質(zhì)粒熒光蛋白的表達(dá)無明顯影響。7、實(shí)時定量熒光PCR檢測結(jié)果顯示mi R-1與PREX1在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。與對照組相比,轉(zhuǎn)染上調(diào)mi R-1表達(dá)量后PREX1的m RNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平均明顯下降。8、免疫組織化學(xué)染色顯示PREX1蛋白表達(dá)于細(xì)胞胞漿內(nèi),且食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯高于正常的食管粘膜組織,存在顯著性差異,并與mi R-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性�！窘Y(jié)論】mi R-1在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)明顯下調(diào)并且能夠抑制腫瘤的增殖、遷移及侵襲,其作用機(jī)制可能是通過抑制其靶基因PREX1表達(dá),進(jìn)而可能通過Rac通路在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。本研究為食管鱗狀細(xì)胞癌的診斷及個體化治療新的潛在分子標(biāo)志物奠定理論基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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8 孟偉偉;let-7a和長鏈非編碼RNA H19在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2015年

9 聶文佳;MMP-26和p63在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 羅會芹;前列腺素E2受體EP2與EGFR在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其對預(yù)后的影響研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：miR-1在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：234250