發(fā)布時(shí)間：2018-11-12 13:43

【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以持續(xù)性氣流受限為特征的呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)病和多發(fā)病,且因慢性炎癥等因素的持續(xù)存在,其氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展。近年來(lái)隨著大氣污染的加重,其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。全球疾病負(fù)擔(dān)研究項(xiàng)目顯示,預(yù)計(jì)至2020年,COPD將排名第三位,成為全球死亡原因的重要疾病之一,其對(duì)全人類的健康產(chǎn)生重大威脅,并帶來(lái)沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān),故對(duì)其進(jìn)行有效防治也被人們逐漸提上日程。而對(duì)COPD進(jìn)行防治的重點(diǎn)即阻止或減少急性發(fā)作的次數(shù),故對(duì)穩(wěn)定期的治療尤為重要。目前對(duì)COPD穩(wěn)定期的干預(yù)措施除給予西藥化痰、平喘等治療外,還可在此基礎(chǔ)上給予中藥治療,中藥治療COPD已在臨床上取得了顯著成效。然而,鑒于中藥方劑多為復(fù)方制劑,每種中藥含有多種有效成分,且各種藥物成分間可能存在化學(xué)反應(yīng),故對(duì)其作用機(jī)制多不明確。而現(xiàn)代藥理學(xué)的研究方法也只能對(duì)其中單個(gè)有效成分進(jìn)行評(píng)估,無(wú)法對(duì)方劑的整體作用機(jī)制進(jìn)行研究,這也成為阻礙中醫(yī)學(xué)發(fā)展的瓶頸所在。因此,尋找一種適合中醫(yī)學(xué)自身理論特點(diǎn)的研究方法成為急需解決的問(wèn)題。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)之后出現(xiàn)的新的“組學(xué)”,目前已在生命科學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。其通過(guò)分析生物體在外界各種刺激下產(chǎn)生的分子量低于1000的內(nèi)源性小分子代謝物的全面變化,來(lái)分析生物體的生理、病理狀態(tài)。其強(qiáng)調(diào)把生物體做為一個(gè)整體來(lái)看待,這與中藥方劑的組方理念極為相似。其通過(guò)對(duì)比應(yīng)用方劑治療前、后的機(jī)體代謝物的變化,探討復(fù)方中藥起作用的可能機(jī)制。該研究方法拋開(kāi)了對(duì)單味中藥成分及各味藥物成分間相互作用的研究,只針對(duì)方劑整體作用機(jī)制進(jìn)行探討,為傳統(tǒng)中醫(yī)藥的研究提供了嶄新和強(qiáng)有力的技術(shù)手段。本研究選取臨床常見(jiàn)的慢性阻塞性肺疾病(COPD)穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者為研究對(duì)象,應(yīng)用代謝組學(xué)的研究技術(shù),通過(guò)對(duì)疾病組和正常組的血漿差異性代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,推斷出COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證的可能潛在標(biāo)志物。同時(shí),觀察養(yǎng)陰益肺方等干預(yù)后的血漿差異性代謝物的變化,從而對(duì)復(fù)方藥物的作用機(jī)制進(jìn)行研究,以便對(duì)該疾病的防治及臨床治療提供理論依據(jù)。本論文的研究?jī)?nèi)容主要包括以下三個(gè)部分:第一部分養(yǎng)陰益肺方對(duì)慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者臨床療效及血清相關(guān)因子的影響目的:研究養(yǎng)陰益肺方治療COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者的臨床療效,以及對(duì)血清相關(guān)因子白細(xì)胞介素8(IL-8)、白細(xì)胞介素17(IL-17)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白三烯B4(LTB4)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影響。方法:選取符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者65例,按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組33例和觀察組32例。對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療,觀察組在常規(guī)西藥治療的基礎(chǔ)上給予養(yǎng)陰益肺方,兩組均治療1月。分別記錄兩組治療前、后的臨床癥狀積分、總有效率、肺功能、呼吸困難問(wèn)卷(m MRC)、6分鐘步行試驗(yàn)(6MWT),以及血清IL-8、IL-17、TNF-α、LTB4、MMP9、TIMP-1、MDA、SOD的變化。結(jié)果:兩組中醫(yī)證候積分均較治療前降低(P0.05);治療后觀察組氣短、喘息、自汗易感積分優(yōu)于對(duì)照組(P0.05)。對(duì)照組總有效率為54.6%,觀察組總有效率為87.5%,觀察組高于對(duì)照組(P0.05)。觀察組治療后肺功能及6分鐘步行距離較治療前好轉(zhuǎn)并優(yōu)于對(duì)照組(P0.05)。兩組m MRC評(píng)分均較治療前降低(P0.05),兩組治療后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。觀察組治療后血清IL-8、IL-17、TNF-α、LTB4水平較治療前下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),對(duì)照組治療后血清IL-8、TNF-α水平較治療前下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);觀察組治療后血清IL-17、TNF-α、LTB4水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組治療后MMP9均較本組治療前降低(P0.05),且治療后觀察組低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組TIMP1水平治療前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與治療前比較,觀察組治療后MDA降低,SOD活力升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),對(duì)照組治療前后MDA水平、SOD活力變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。第二部分慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者血漿代謝組學(xué)特征研究目的:應(yīng)用代謝組學(xué)的技術(shù)研究COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者的血漿代謝組學(xué)特征,尋找該證型的潛在生物標(biāo)志物;對(duì)該證型的潛在生物標(biāo)志物進(jìn)行代謝通路分析。方法:選擇符合COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者65例,設(shè)為疾病組,同時(shí)選取來(lái)院的健康體檢者30例,設(shè)為正常組。分別空腹采集疾病組及正常組靜脈血,進(jìn)行抗凝、離心等相關(guān)處理,得到血漿。然后,采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)檢測(cè)兩組血漿的差異性代謝物,并利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)差異性代謝物進(jìn)行定性,并進(jìn)行代謝通路分析。結(jié)果:在正離子模式下,與正常組相比,疾病組的代謝圖譜出現(xiàn)顯著差異,初步推測(cè)出肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)、神經(jīng)酰胺、葡萄糖神經(jīng)酰胺、L-苯丙氨酸、組氨酸、甘氨酸、3-甲基組氨酸、抗壞血酸、α-亞麻酸、二十四烷酸、鯊烯等可能為COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證的潛在標(biāo)志性代謝物;其中,肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)、組氨酸、甘氨酸、3-甲基組氨酸、抗壞血酸、α-亞麻酸、二十四烷酸、鯊烯呈現(xiàn)下降趨勢(shì),其余三種呈上升趨勢(shì)。所涉及主要異常的代謝通路有氮代謝、氨基酰-t RNA生物合成、嘌呤代謝、谷胱甘肽代謝、組氨酸代謝、α-亞麻酸代謝、苯丙氨酸代謝以及甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝。第三部分基于代謝組學(xué)的慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證方藥干預(yù)機(jī)制研究目的:應(yīng)用代謝組學(xué)的技術(shù),通過(guò)查找觀察組治療前、后的血漿差異性代謝物,分析與其相關(guān)的代謝通路,推測(cè)養(yǎng)陰益肺方聯(lián)合常規(guī)西藥治療的可能作用機(jī)制;并對(duì)觀察組和對(duì)照組治療后的代謝物進(jìn)行對(duì)比,查找兩組間的差異性代謝物及所涉及的異常代謝通路,從而推測(cè)出養(yǎng)陰益肺方聯(lián)合常規(guī)西藥治療較單純常規(guī)西藥治療的優(yōu)勢(shì)所在。方法:將符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證患者65例,按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組33例和觀察組32例。對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療,觀察組在常規(guī)西藥治療的基礎(chǔ)上給予養(yǎng)陰益肺方,兩組均治療1月;并分別對(duì)比觀察組治療前、后以及兩組治療后的血漿差異性代謝產(chǎn)物,并尋找與差異性代謝產(chǎn)物相關(guān)的代謝通路。結(jié)果:在正離子模式下,與治療前相比,觀察組治療后的代謝圖譜出現(xiàn)顯著差異,初步推測(cè)出肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷、葡萄糖神經(jīng)酰胺、3-甲基組氨酸、α-亞麻酸、二十四烷酸、20羧基白三烯E4、溶血磷脂酰膽堿等可能為對(duì)觀察組進(jìn)行養(yǎng)陰益肺方聯(lián)合常規(guī)西藥干預(yù)后的差異性血漿代謝物。其中,肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷、3-甲基組氨酸、α-亞麻酸、二十四烷酸呈現(xiàn)上升趨勢(shì),其余三種物質(zhì)則出現(xiàn)下降趨勢(shì)。所涉及主要異常代謝通路可能有α-亞麻酸代謝、嘌呤代謝、核黃素代謝、組氨酸代謝、磷脂代謝等。將兩組治療后相比,共找出5種差異性代謝產(chǎn)物,分別為肌苷酸、3-甲基組氨酸、二十四烷酸、20羧基白三烯E4、20-三羥基白三烯B4。其中,肌苷酸、3-甲基組氨酸、二十四烷酸在觀察組治療后呈現(xiàn)升高趨勢(shì),其余兩種呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。所涉及主要異常代謝通路可能有嘌呤代謝、組氨酸代謝及花生四烯酸類代謝。結(jié)論:1養(yǎng)陰益肺方可以改善患者咳嗽、喘息、氣短、自汗易感、口渴等臨床癥狀,降低m MRC評(píng)分,改善肺功能,提高6分鐘步行試驗(yàn)距離,療效確切。2養(yǎng)陰益肺方可以降低血清IL-8、IL-17、TNF-α、LTB4、MMP9、MDA水平,提高SOD活力,通過(guò)改善機(jī)體炎癥水平、蛋白酶/抗蛋白酶系統(tǒng)失衡、氧化應(yīng)激狀態(tài)三方面起作用。3在正離子模式下,肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)、神經(jīng)酰胺、葡萄糖神經(jīng)酰胺、L-苯丙氨酸、組氨酸、甘氨酸、3-甲基組氨酸、抗壞血酸、α-亞麻酸、二十四烷酸、鯊烯等可能為COPD穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證的標(biāo)志性代謝物。所涉及主要異常代謝通路有氮代謝、氨基酰-t RNA生物合成、嘌呤代謝、谷胱甘肽代謝、組氨酸代謝、α-亞麻酸代謝、苯丙氨酸代謝以及甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝。4在正離子模式下,與治療前相比,初步推測(cè)出肌苷酸、三磷酸鳥(niǎo)苷、葡萄糖神經(jīng)酰胺、3-甲基組氨酸、α-亞麻酸、二十四烷酸、20羧基白三烯E4、溶血磷脂酰膽堿等可能為對(duì)觀察組進(jìn)行養(yǎng)陰益肺方聯(lián)合常規(guī)西藥干預(yù)后的差異性血漿代謝物。所涉及主要異常代謝通路可能有α-亞麻酸代謝、嘌呤代謝、核黃素代謝、組氨酸代謝、磷脂代謝等。5在正離子模式下,將兩組治療后相比,初步推測(cè)出肌苷酸、3-甲基組氨酸、二十四烷酸、20羧基白三烯E4、20-三羥基白三烯B4可能為養(yǎng)陰益肺方聯(lián)合常規(guī)西藥治療和單純常規(guī)西藥治療的差異性代謝產(chǎn)物。所涉及主要異常代謝通路可能有嘌呤代謝、組氨酸代謝及花生四烯酸類代謝。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R259

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1 劉海葉;基于代謝組學(xué)的養(yǎng)陰益肺方治療慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣陰兩虛證作用機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：2327280