【摘要】：目的:干細(xì)胞旁分泌與干細(xì)胞分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞一樣,對于干細(xì)胞血管再生治療來說都是一種非常重要的機(jī)制。細(xì)胞分泌的微泡已經(jīng)被證實(shí)能在細(xì)胞間相互作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本項(xiàng)研究的目的是探討脂肪干細(xì)胞釋放的微泡在促進(jìn)血管再生治療中的潛在機(jī)制,探討微泡miRNA是否參與其中發(fā)揮作用。方法:內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細(xì)胞,提取微泡及微泡中的小RNA,微泡、微泡小RNA或miR-31刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、小鼠動脈環(huán)等,評估微泡、微泡小RNA及miR-31對血管再生的作用。實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平及動物水平分組進(jìn)行。大致分為以下幾組:1、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞微泡(MV),2、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細(xì)胞微泡(MV-P),3、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA,4、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA,5、anti-miR31陰性對照組(anti-miR31-cont.),6、anti-miR31組(anti-miR31),7、mimic-miR31陰性對照組(mimic-miR31-cont.),8、mimic-miR31組(mimic-miR31),9、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA+anti-miR31陰性對照組(GM-MV-RNA/antimiR31-cont.),10、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA+anti-miR31組(GM-MV-RNA/anti-miR31),11、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA+anti-miR-31陰性對照組(EDM-MV-RNA/anti-miR31-cont.),12、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細(xì)胞微泡小RNA+anti-miR31組(EDM-MV-RNA/antimiR31)。分別進(jìn)行管樣結(jié)構(gòu)形成、細(xì)胞遷移及增殖等血管再生相關(guān)實(shí)驗(yàn),動物實(shí)驗(yàn)方面進(jìn)行小鼠主動脈環(huán)實(shí)驗(yàn)及Mitrigel Plug實(shí)驗(yàn)等。同時(shí)檢測miR-31多種靶基因水平的變化,評估靶基因水平的變化是否在微泡miR-31促血管再生中發(fā)揮一定的作用。結(jié)果:1.脂肪干細(xì)胞微泡促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細(xì)胞遷移,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細(xì)胞能上調(diào)脂肪干細(xì)胞微泡的促血管再生作用;2.脂肪干細(xì)胞微泡小RNA促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細(xì)胞遷移,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細(xì)胞能上調(diào)脂肪干細(xì)胞微泡小RNA的促血管再生作用;3.MiR-31促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細(xì)胞遷移,下調(diào)miR-31水平抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細(xì)胞遷移;4.抑制脂肪干細(xì)胞微泡小RNA的miR-31能逆轉(zhuǎn)脂肪干細(xì)胞微泡小RNA的促進(jìn)細(xì)胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細(xì)胞遷移作用;5.脂肪干細(xì)胞微泡促進(jìn)小鼠主動脈環(huán)管樣結(jié)構(gòu)形成,促進(jìn)小鼠Mitrigel Plug管樣結(jié)構(gòu)形成,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細(xì)胞能上調(diào)脂肪干細(xì)胞微泡的促血管再生作用;6.抑制脂肪干細(xì)胞微泡小RNA的miR-31能逆轉(zhuǎn)脂肪干細(xì)胞微泡小RNA的促小鼠主動脈環(huán)及Mitrigel Plug管樣結(jié)構(gòu)形成;7.MiR-31作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后,缺氧誘導(dǎo)因子-1的抑制因子(FIH1)水平下降,實(shí)驗(yàn)證明FIH1是miR-31的靶基因。結(jié)論:1.脂肪干細(xì)胞能分泌微泡,這種微泡能夠促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及管樣結(jié)構(gòu)形成。內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細(xì)胞能增加微泡的分泌,促進(jìn)微泡的血管再生能力。2.RNA分析結(jié)果顯示脂肪干細(xì)胞分泌的微泡富含microRNA,而且內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪源性干細(xì)胞能顯著上調(diào)微泡中miR-31的水平。進(jìn)一步研究顯示微泡中的miR-31能促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及管樣結(jié)構(gòu)形成,而且還能促進(jìn)小鼠主動脈環(huán)及Matrigel Plug的血管再生。3.FIH1有抗血管再生的作用,更進(jìn)一步地,本研究發(fā)現(xiàn)它是miR-31的靶基因。結(jié)果表明miR-31可能在脂肪干細(xì)胞微泡小RNA促血管再生作用中發(fā)揮一定的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R45

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本文編號：2281790